维普资讯 http://www.cqvip.com 重庆医学２００８年２月第３７卷第３期 ２９３ ・论 著・ 大鼠脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注模型的建立及他汀的保护作用 鲁向辉 ，迟路湘 ，刘恺呜。 （第三军医大学西南医院：１．神经内科；２．心内科，重庆４０００３８） 摘要：目的建立大鼠脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注模型，并观察辛伐他汀、洛伐他汀的保护作用。方法 原代分离 培养ＳＤ大鼠脑微血管内皮细胞，以无糖Ｋｒｅｂｓ溶液再复氧复糖模拟体外缺血再灌注损伤，并实施辛伐他汀、洛伐他汀预处理干 预。观察各组细胞形态，测定各组细胞上清中内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）、诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）活性，利用ＣＣＫ一８检测 各组细胞增殖活性。结果 氧糖剥夺（Ｋｒｅｂｓ液）缺氧１２ｈ再复氧复糖４ｈ模型可成功模拟大鼠脑微血管内皮细胞缺血再灌注损 伤。辛伐他汀、洛伐他汀预处理后，脑微血管内皮细胞ｅＮＯＳ活性增强、ｉＮＯＳ活性降低，细胞增殖活性提高。结论 辛伐他汀、洛 伐他汀具有显著的脑缺血再灌注损伤保护作用。 关键词：脑微血管内皮细胞；动物模型；缺血再灌注；大鼠；辛伐他汀； 洛伐他汀 中图分类号：Ｒ３６５．７４１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１—８３４８（２００８）０３—０２９３—０３ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｎｊｕｒｙ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒａｔ ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｔａｔｉｎｓ ＬＵ Ｘｉａｎｇ—ｈｕｉ ．ＣＨＩ Ｌｕ—ｘｉａｎｇ ．ＬＩＵ Ｋａｉ—ｒｕｉｎｇ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｏｌｏｇｙ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｔｈｉｒｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００３８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｎｊｕｒｙ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒａｔ ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｉｌｓ （ＢＭＥＣｓ）ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｔａｔｉｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＳＤ ｒａｔ ＢＭＥＣｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｂｙ ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ，ＢＭＥＣｓ ｗｅｒｅ ｓｕｂｊ ｅｃｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｏｘｙｇｅｎ—ｇｌｕｃｏｓｅ ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ（ＯＧＤ）（Ｋｒｅｂｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｏｘｙｇｅｎ－ｇｌｕｃｏｓｅ，ｗｈｉｃｈ ｓｉｍｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ，ａｎｄ ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ ａｎｄ ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ．Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ （Ｎ０Ｓ）ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｉｎ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｅ ＢＭＥＣｓ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＢＭＥＣｓ ｗｅｒｅ ｉｍｐａｉｒｅｄ ａｆｔｅｒ ＯＧＤ ｆｏｒ １２ ｈｏｕｒｓ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｏｘｙｇｅｎ—ｇｌｕｃｏｓｅ ｆｏｒ ４ ｈｏｕｒｓ．Ｔｈｅ ＢＭＥＣｓ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈ ｐｒｅ— ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｔａｔｉｎｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ ａｎｄ ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ ｃａｎ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｐｒｏｔｅｃｔ ＢＭＥＣｓ ｆｒｏｍ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊ ｕｒｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ；ｉｎ ｖｉｔｒｏ；ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｉｌｓ；ｒａｔ；ｓｔａｔｉｎｓ 脑缺血再灌注损伤将导致血脑屏障完整性受损，引起继发 性脑损害。防止或减轻脑缺血再灌注损伤是目前缺血性脑血 １．２大鼠脑微血管内皮细胞原代分离培养［１］ 取２～３周龄 ＳＤ大鼠，雌雄均可，体重４Ｏ～６０ｇ（第三军医大学实验动物中 心），颈椎脱臼处死后消毒断头取出全脑，分离大脑皮质，用虹 膜剪剪碎成ｌｍｍ。大小，匀浆后加入０．１ ．ｏ４ ＩＩ型胶原酶（含３Ｏ ｕ／ｍｌ ＤＮａｓｅ Ｉ）３７℃水浴消化３０ｍｉｎ，离心后去上清，加２Ｏ ＢＳＡ悬浮后离心，再加入０．１ 胶原酶／分散酶（含２０ ｕ／ｍｌ ＤＮａｓｅ Ｉ）３７℃水浴消化３０ｍｉｎ，加入２Ｏ ．ｏ４ＢＳＡ悬浮后离心去 管病治疗的重点所在。脑微血管内皮细胞（ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕ— ｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｉｌｓ，ＢＭＥＣｓ）及其紧密连接是血脑屏障（ｂｌｏｏｄ ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅ，ＢＢＢ）的结构基础，是血液与脑组织间第一道屏 障，它具有与外周血管内皮细胞不同的独有特征，是研究脑血 管病的最佳载体。近年来他汀类药物的非调脂性作用日益受 到重视，被广泛应用于缺血性脑血管病的研究。本实验通过酶 消化加梯度离心法分离大鼠ＢＭＥＣｓ，以无糖Ｋｒｅｂｓ溶液再复 氧复糖模拟缺血再灌注损伤，并实施辛伐他汀、洛伐他汀预处 理干预，探讨他汀对ＢＭＥＣｓ体外缺血再灌注损伤可能的保护 机制。 １材料与方法 上清，吸出靠近底部的白黄色层面，加入ＤＭＥＭ离心后去上 清，加入ＤＭＥＭ完全培养液（含２ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酰胺，ｌｎｇ／ｍｌ ｂＦＧＦ，１０ｎｇ／ｍｌ ＶＥＧＦ，２０ ＦＢＳ，ｌｍｇ／ｍｌ肝素钠）悬浮后接 种于事先涂布明胶的塑料培养皿中，于培养箱内静置培养，隔 天换液。７～９ｄ细胞可达到单层融合，用０．２５ 胰酶和０． Ｏ２ ＥＤＴＡ消化传代于培养瓶中，取３～４代细胞用于实验。 ７～９ｄ细胞可达到单层融合，倒置显微镜观察细胞呈单层铺路 石状镶嵌排列，细胞免疫荧光化学法鉴定ＢＭＥＣｓ的ｖＷＦ蛋 白表达、激光共聚焦显微镜下观察并摄影。 １．３缺氧复氧模型的建立及实验分组 取３～４代生长良好 的ＢＭＥＣｓ用０．２５ 胰酶和０．０２ ＥＤＴＡ混合液消化，以５× １．１主要试剂和仪器 胎牛血清（ＦＢＳ）、ＤＮＡ酶Ｉ（ＤＮａｓｅ Ｉ）、ＩＩ型胶原酶、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）、血管内皮 细胞生长因子（ＶＥＧＦ）、胶原酶／分散酶、牛血清清蛋白 （ＢＳＡ）、兔抗大鼠ｖＷＦ多克隆抗体（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ，美国）、ＦＩＴＣ标 记驴抗兔ＩｇＧ（Ｚ鹰生物）、兔抗大鼠ＭＭＰ一９多克隆抗体（博士 德）、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（Ｄｏｊｉｎｄｏ，日本）、细胞培养池（Ｆａｌｃｏｎ， 美国）、Ｍｏｄｅｌ一５５０酶标仪、Ｎｕ４７一Ｅ可调氧浓度孵箱（Ｎｕａｉｒｅ，美 国）、ＴＣＳ ＳＰ５激光共聚焦显微镜（Ｌｅｉｃａ，德国）。辛伐他汀（默 沙东，美国），洛伐他汀（北京弘伟明和）。 通讯作者 １Ｏ 个细胞／ｄＬ接种于培养板，待细胞完全汇合生长后，换５ ＦＢＳ的ＤＭＥＭ低糖培养基过夜。根据Ｚｈａｎｇ等［２ 所述的方 法稍加改进，建立体外缺血再灌注模型：ＰＢＳ清洗细胞，更换无 糖的Ｋｒｅｂｓ溶液（ｍｍｏｌ／Ｌ，１１９ ＮａＣｌ，４．７ ＫＣｌ，１．２ ＫＨ２ＰＯ４， 维普资讯 http://www.cqvip.com ２９４ 重庆医学２００８年２月第３７卷第３期 ２５ ＮａＨＣＯ３，２．５ ＣａＣ１ｚ，１ ＭｇＣ１２，ｐＨ ７．３，现用现配），置于 ｉＮＯＳ增高，有显著差异；各浓度他汀预处理后均能明显提高细 胞ｅＮＯＳ活性，除０．１ｂｔｍｏｌ／Ｌ洛伐他汀外，其他浓度他汀均能 ３７℃的３ＹｏＯｚ、５ ＣＯｚ、９２ Ｎｚ培养箱中培养１２ｈ；复氧复糖 时，更换无血清低糖ＤＭＥＭ培养基置于３７℃，５ ＣＯ 培养箱 降低ｉＮＯＳ活性。辛伐他汀组ｅＮＯＳ活性高于洛伐他汀组，但 中培养４ｈ。对照组：更换无血清ＤＭＥＭ低糖培养基，置于 ３７℃，５ ＣＯｚ培养箱中培养。他汀组：于缺氧前１２ｈ加入０．１、 １、１０￣ｍｏｌ／Ｌ辛伐他汀或洛伐他汀。 １．４细胞形态学观察变化。 倒置相差显微镜下观察各组细胞形态 无显著差别，而其下调ｉＮＯＳ作用明显优于洛伐他汀，见表１。 １．５ ｅＮＯＳ、ｉＮＯＳ活性测定收集各组细胞上清液，按ｌｍｌ／ 份分装，置一７Ｏ℃冻存备用。ｅＮＯＳ、ｉＮＯＳ测定具体操作严格 按说明书进行。 １．６ ＣＣＫ－８增殖实验另取ＢＭＥＣｓ以２×１０ ／孔的密度接 种于９６孔板，随机分组并按要求实施缺氧复氧处理后，弃上 清，每ＴＩ，］ｍ约１００ｂｔｌ无血清ＤＭＥＭ低糖培养基及１Ｏ“ｌ ＣＣＫ一８ 溶液。设置加入相应量培养基、辛伐他汀和ＣＣＫ一８溶液，但没 有加人细胞的孔作为空白对照。正常培养箱内继续孵育４ｈ 后，酶标仪４５０ｎｍ测定吸光度。 １．７数据统计分析结果以ｊ±Ｓ表示，以ＳＰＳＳ １３．０软件行 统计学处理，对各组数据进行方差齐性检验，组问比较采用单 因素方差分析，Ｐ＜Ｏ．０５为差异有统计学意义。 ２结 果 ２．１ 内皮细胞鉴定及各组形态变化接种时可见串珠样脑微 血管段，随后可见短梭形细胞从微血管段周围长出（图１），细 胞融合后呈紧密连接的铺路石样单层生长（图２）。免疫荧光 细胞化学法显示ｖＷＦ蛋白呈阳性表达（图３）。镜下观察各实 验组可见：对照组细胞呈单层铺路石或短梭型、多角型排列，胞 核居中呈椭圆形；模型组大量细胞变圆脱落，未脱落细胞回缩， 问隙变大；他汀组改变无模型组明显。 图１ 短梭形细胞从微血管段周围长出【×４ Ｏ】 图２ 细胞融合后呈紧密连接的铺路石样单层生长【×２００） ２．２ ｅＮＯＳ、ｉＮＯＳ活性比较 模型组较对照组ｅＮＯＳ降低、 图３ ＢＭＥＣｓ的ｖＷＦ表达呈阳性，标尺为２５０ｂｔｍ ２．３细胞增殖活性比较 模型组较对照组细胞增殖显著降 低，不同浓度他汀预处理后均能明显改善细胞增殖活性，辛伐 他汀作用更强，见表１。 表１ 各组ＮＯＳ表达、细胞增殖活性比较 与对照组比较，ａ：Ｐ＜ｏ．Ｏｌ；与模型组比较， ：Ｐ＜ｏ．０５，ｃ：Ｐ＜ ｏ．ｏ１；与相同浓度他汀比较， ：Ｐ＜Ｏ．０５。 ３讨 论 目前内皮细胞的研究常采用人脐静脉内皮细胞或牛主动 脉内皮细胞作为载体。而脑微血管内皮细胞是ＢＢＢ的主要结 构基础，与外周血管内皮细胞相比，其在基因、蛋白质组水平、 生理结构及功能上均有其特异性口 ］。因此，进行脑血管疾病 相关研究更应注重针对性。脑缺血再灌注会导致ＢＭＥＣｓ功 能受损，通透性明显增高，ＢＢＢ严重破坏，是引起脑水肿和脑出 血的最常见原因之一，研究可能的治疗及改善办法具有重要的 ＩＪ缶床意义。本实验总结以往研究，采用对大脑皮质碎块两次酶 消化加梯度离心法成功分离ＳＤ大鼠ＢＭＥＣｓ，避免了传统筛 网过滤加组织匀浆法对内皮细胞的损伤，保证了细胞的活力和 脑微血管片段的纯度。根据Ｚｈａｎｇ等［２ 方法加以改进，以氧糖 剥夺（Ｋｒｅｂｓ液）再复氧复糖模型模拟缺血再灌注损伤。建立 此模型要点是；（１）酶消化时问不能过长，控制于３０ｍｉｎ以内； （２）２０％ＢＳＡ密度介于微血管片段和杂细胞之间，能达到再次 纯化的目的；（３）复糖时勿用高糖而用低糖培养基，以维持细胞 稳态。从缺氧１２ｈ复氧４ｈ后的细胞形态和ＣＣＫ一８测定都证 实了模型的成功，且重复性较好。 维普资讯 http://www.cqvip.com 重庆医学２００８年２月第３７卷第３期 ２９５ 他汀类药物为３一羟基一３一甲基戊二酸单酰ＣｏＡ（ＨＭＧ－ 性损伤的转归改善有益。 ＣｏＡ）还原酶抑制剂，是一种临床上广泛使用的降血脂药物。 洛伐他汀为从微生物中提取的第１代他汀，辛伐他汀为经过结 参考文献： 构修饰合成的第２代他汀。近年来其非降脂作用日益受到重 ［１］许熊飞，李润平，李泉，等．大鼠脑微血管内皮细胞的分离 视，包括延缓动脉壁粥样硬化进程，抑制血小板活化和血管平 与原代培养［Ｊ］．细胞生物杂志，２００５，２７（１）：８４． 滑肌细胞增殖，以及抗炎、抗氧化、免疫抑制等作用，而被广泛 ［２］Ｚｈａｎｇ ＷＤ，Ｓｍｉｔｈ Ｃ，Ｓｈａｐｉｍ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓ— 应用于缺血性脑血管病［６ ］。 ｓｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｒｅｂｒｏｍｉｃｒｏｖａｓｃｕ— Ｎ０ｓ有３种亚型：神经元型Ｎ０Ｓ（ｎＮＯｓ），诱导型Ｎ０ｓ ｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｓｉｍｕｌａｔｅｄ （ｉＮＯｓ），内皮型Ｎ０ｓ（ｅＮＯｓ），任一亚型均可催化Ｌ＿精氨酸产 ｉｓｃｈｅｍｉａ ｉｎ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９９，１０１（２）： 生ＮＯ。不同细胞中不同类型的酶催化合成的ＮＯ具有不同 １４８． 的生物学作用。目前研究认为，缺血初期由ｅＮＯＳ短暂升高产 ［３］Ｌｕ Ｌ，Ｙａｎｇ ＰＹ，Ｒｕｉ ＹＣ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｏｍｅ ａ— 生的适量Ｎ０具有神经保护作用，而由ｎＮＯＳ产生的Ｎ０具有 ｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒａｔ ｂｒａｉｎ ａｎｄ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉ— 神经损伤作用，在晚期较长时段，ｉＮＯＳ导致迟发性神经元死 ａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｓ，２００７，５６（２）：１５９． 亡 。 ［４］胡俊，丁仕义，黎海涛．血脑屏障开放的检测方法［Ｊ］．重 本实验观察到：模型组ｅＮＯＳ活性明显降低，而ｉＮ０ｓ显 庆医学，２００３，３２（１２）：１７４４． 著提高，细胞增殖活性降低。未观察到缺氧后ｅＮＯＳ的增高， －Ｉ５］Ｈａｗｋｉｎｓ ＢＴ，Ｄａｖｉｓ ＴＰ．Ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ／ｎｅｕｒｏ— 可能是由于ＢＭＥＣｓ于体外缺氧１２ｈ复氧４ｈ后，ｅＮＯＳ表达 ｖａｓｃｕｌａｒ ｕｎｉｔ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ， 已由短暂的增高阶段转入下降阶段，具体高峰时段还需要进一 ２００５，５７（２）：１７３． 步实验观察。研究表明：他汀主要通过上调ｅＮＯＳ介导其在缺 ［６］覃军，何作云，李爱民．辛伐他汀对食饵性兔动脉粥样硬 血性脑血管病中的神经保护作用，其众多非调脂作用机制均以 化不同阶段内皮素、一氧化氮的作用［Ｊ］．重庆医学， 此为基础。本实验发现：各浓度他汀预处理后均能明显提高细 ２００２，３１（４）：２５９． 胞ｅＮＯＳ活性，辛伐他汀组略高于洛伐他汀组，但无显著差异， ［７］ Ｓｔ６ｐｉｅ Ｋ，Ｔｏｍａｓｚｅｗｓｋｉ Ｍ，Ｃｚｕｃｚｗａｒ Ｓ Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ 而其下调ｉＮＯＳ作用明显优于洛伐他汀，提高细胞增殖活性作 ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｓｔａｔｉｎｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｐ，２００５，５７（５）： 用也更强。提示：他汀可能通过下调ｉＮ０ｓ来增强其上调 ５６１． ｅＮＯＳ所产生的ＢＭＥＣｓ保护效应。Ｍｏｏｎｉｓ等＿ｇ 通过对１２９ ［８］Ｐｌｏｔｋｉｎｅ Ｍ，Ｍａｒｇａｉｌｌ Ｉ．ＮＯ ｓｙｎｔｈａｓｅｓ：ｎｅｗ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉ— 例卒中患者进行多变量逻辑回归分析后认为：急性卒中后服用 ｃａｌ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｃｃｉｄｅｎｔ［Ｊ］．Ｔｈｅｒａｐｉｅ， 他汀与其后的转归改善有关，与卒中前服用及未服用他汀有显 ２００２，５７（６）：５４８． ． 著差异。鉴于缺血晚期生成的ｉＮＯＳ介导迟发性损伤，经本科 ［９］Ｍｏｏｎｉｓ Ｍ，Ｋａｎｅ Ｋ，Ｓｃｈｗｉｄｅｒｓｋｉ Ｕ，ｅｔ ａ１．ＨＭＧ－ＣｏＡ ｒｅ— 推测：他汀下调ｉＮＯＳ机制可能参与其中。本实验发现：他汀 ｄｕｃｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｍｐｒｏｖｅ ａｃｕｔｅ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ ｏｕｔｃｏｍｅ 对ＢＭＥＣｓ缺氧复氧后ｅＮＯＳ和ｉＮ０ｓ表达具有双向影响，借 ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，２００５，３６（６）：１２９８． 此可缺血后不同时间、不同种类的Ｎ０合成，增强Ｎ０的 正面效应，抑制其负面效应，能在脑缺血再灌注损伤早、后期发 （收稿日期：２００７—０８—０２） 挥作用，而强化对ｉＮＯＳ的抑制可能对脑缺血再灌注后期迟发 （上接第２９２页） ［４］ Ｋｉｍ ＮＷ，Ｐｉａｔｙｓｚｅｋ ＭＡ，Ｐｒｏｗｓｅ ＫＲ，ｅｔ ａ１．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｓｓｏ－ 药物如苦参碱和化疗药物联合应用，不仅能够降低化疗药物的 ｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈ ｉｍｍｏｒｔａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ 剂量以减少不良反应，而且能够提高肿瘤治疗的效果，为肿瘤 ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２６６（５１９３）：２０１１． 治疗提供了一条新途径。 ［５］ Ｍｅｅｋｅｒ ＡＫ，ｄｅ Ｍａｒｚｏ ＡＭ．Ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｅｌｏｍｅｒｅ 参考文献： ｂｉｏｌｏｇｙ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｏｎ— ｃｏｌ，２００４，１６（１）：３２． ［１１汤为学，骆云鹏，王瑞雪．人实体瘤抗癌药物敏感试验 ［６］ Ｌｉ Ｈ，Ｃａｏ Ｙ，Ｂｅｒｏｄｔ ＭＣ。ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅ— ＭＴＴ法的建立［Ｊ］．重庆医科大学学报，１９９２，１７（２１）： ｔｗｅｅｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐ５３ ｉｎ １０３． ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９９，１８（４８）：６７８５． ［２］Ｃｈｏｕ ＴＣ，Ｔａｌａｌａｙ Ｐ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔｓ ［７］ Ｈｏｌｔ ＳＥ，Ｗｒｉｇｈｔ ＷＥ，Ｓｈａｙ ＪＷ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｉｍｍｏｒｔａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１９９６，１６ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ，１９８４，２２（１）： （６）：２９３２． ２７． ［８］ 王劲．端粒／端粒酶在血液系统中的研究进展［Ｊ］．重庆医 ［３］Ｇｒｅｉｄｅｒ ＣＷ．Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ ＥＨ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｅ— 学，２００２，３１（９）：８７５． ｌｏｍｅｒａｓｅ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｅｘ— ｔｒａｃｔｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９８５，４３（２ Ｐｔ １）：４０５． （收稿日期：２００７—０７—０９）
