医学研究杂志２０１０年ｌ２月 第３９卷第１２期 ・论 善・ 手术视线被海马旁回的内侧面所阻挡，增加颞叶牵拉 Ｐ２ｐ是环池内最重要的血管，一般位于环池上部，经 后位于海马旁回上方Ｐ２ｐ段也随之上抬，显露范围很 ＴＣＡ绝大多数可以显露，仅少数低位Ｐ２ｐ（本组 小。锁孔联合人路有助于增加显露范围 ，经无血 ６．２５％）可经ＰＳＡ显露。 管的穹隆伞带切开脉络裂颞部，是达环池上部极好的 然而，实验室中的研究结果不能完全反映术中复 手术通道 。因此，在锁孔手术中联合使用ＴＣＡ能 杂的实际情况。就锁孔ＰＳＡ而言，对Ｌａｂｂｅ ｓ静脉损 够有效的弥补锁孔ＰＳＡ的不足，安全显露环池上部。 伤的可能性始终存在，切开天幕可能损伤滑车神经、 ２．联合人路的骨窗位置和皮质切口选择：对后颞 三叉神经和岩上窦，术前颞叶水肿和发达的天幕窦的 下锁孔的骨窗位置目前尚无定论。乳突上嵴、颞鳞 存在都会影响显露效果。就锁孔ＴＣＡ而言，病变可 缝、顶乳缝交点恰好位于横、乙状窦转角处的前上 能推挤视放射和Ｗｅｍｉｃｋｅ ｓ区造成判断错误；颞角的 缘 ，若骨瓣下缘在该点以下，有损伤静脉窦的可 移位和闭塞会给寻找脉络裂带来困难；向尾侧牵拉海 能；若在该点以上，需继续向下磨除骨质以显露静脉 马体可能损伤海马结构，尤其是对主侧的损伤可能会 窦，增加术后骨缺损范围。骨瓣前界在该点前方 影响人格和记忆。完善的术前影像检查以及术中对 ２ｃｍ，靠近下脉络点体表投影（平外耳道 ），便于充 功能区的定位可以将这些因素的影响降至最低。 分显露脉络裂颞部；后界在该点后方１ ｃｍ，避免显露 参考文献 Ｌａｂｂｅ ｓ静脉汇人点（多在横、乙状窦转角处后方１ ｃｌｎ １ 许百男，孙正辉．颅内后循环动脉瘤的手术策略．中华医学杂志， 以上），影响颞叶可牵拉幅度。上述的骨瓣和相应的 ２００５，８５：２２３４—２２３５ ２ Ｒｈｏｔｏｎ ＡＬ．Ｔｈｅ ｓｕｐｒａｔｅｎｔｏｒｉａｌ ａ￣ｅｆｉｅｓ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ．２００２，５ １：５３ 切口设计，能同时满足锁孔ＰＳＡ和ＴＣＡ的要求。颞 —１２０ 中回入路是经皮质至脉络裂颞部最短的手术路径，但 ３ 王峰，孙涛，李新钢，等．环池及其手术人路的显微解剖学研究．中 其可能损伤视放射Ｍｅｙｅｒ ｓ袢和Ｗｅｒｎｉｃｋｅ ｓ区。经 华医学杂志。２００７，８７：１６５—１６９ 颞下回、枕颞沟入路时，由于手术径路并非正对脉络 ４ Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ Ｍ．Ｐｅｍｅｃｚｋｙ Ａ．Ｓｕｂｔｅｍｐｏｒａｌ ｋｅｙｈｏｌｅ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ ｓｕ・ 裂，手术视线受阻，需增加向上方牵拉颞叶和向下方 ｐｒａｓｅｌｌａｒ ａｎｄ ｐｅｔｒｏｃｌｉｖａｌ ｒｅｇｉｏｎ：ｍｉｃｒｏａｎａｔｏｍｉｃ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，１９９７，４１：５９２—６０１ 牵拉海马的幅度。颞下沟入路是较好的选择，尽管颞 ５ 陈亮，毛颖，张荣，等．幕上下联合锁孔入路显露岩斜区的显微解 下沟变异较大，但采用ＭＲＩ导航系统，可以寻找颞下 剖．中华显微外科杂志，２００８，３１：４２—４５ 沟的准确位置，并沿最短的白质径路进入颞角，来弥 ６ Ｒｈｏｔｏｎ ＡＬ．Ｔｈｅ ｌａｔｅｒａｌ ａｎｄ ｔｈｉｒｄ ｖｅｎｔｒｉｃｌｅｓ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，２００２， 补人为经验的不足。 ５１：２０７—２７１ ３．锁孔ＰＳＡ和锁孔ＴＣＡ的临床应用：锁孔ＰＳＡ ７ Ｒｈｏｔｏｎ ＡＬ．Ｔｈｅ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｂｏｎｅ ａｎｄ ｔｒａｎｓｔｅｍｐｏｒａｌ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｎｅｕｒｏ・ 和ＴＣＡ分别适合处理环池下部和上部病变。我们认 ｓｕｒｇｅｒｙ，２０００，４７：２１１—２６６ ８ Ｓｉｗａｎｕｗａｔｎ Ｒ，Ｄｅｓｈｍｕｋｈ Ｐ，Ｚａｂｒａｍｓｋｉ ＪＭ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｉｅａｌ ａ－ 为，在ＭＲＩ冠状位上，海马旁回内缘中点是人路选择 ｎａｔｏｍｙ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｔｅｍｐｏｒａｌ—ｔｒａｎｓｃｈｏｒｏｉｄａｌ 的解剖标志点。环池内病变越在该点的上方，经ＴＣＡ ｆｉｓｓｕｒｅ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ ａｍｂｉｅｎｔ ｃｉｓｔｅｒｎ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，２００５，５７：２２８ 显露越容易，经ＰＳＡ显露越困难；反之，病变越在该 —２３５ 点的下方，经ＰＳＡ显露越容易，经ＴＣＡ显露越困难。 （收稿：２０１０—０７—０９） 多烯磷脂酰胆碱改善脂肪肝大鼠肝脏 脂质沉积的作用机制研究 李红山 陈少东 摘 要 目的 探讨多烯磷脂酰胆碱对高脂饮食脂肪肝大鼠肝脏脂质沉积的抑制效应及其机制。方法 采用单纯高脂饮 食诱导的大鼠脂肪肝模型。在造模６周后，随机分为模型组和多烯磷脂酰胆碱组，分别灌胃给予饮用水和相应药物，疗程４周， 作者单位：３１５０００宁波市传染病医院肝炎科（李红山）；３６１０００厦门大学医学院（陈少东） ・７３・ ・论 善・ Ｊ Ｍｅｄ ＲｅｓＤｅｃ ２０１０，Ｖｏ１．３９ Ｎｏ．１２ ，，实验结束时取材观察：①肝组织病理变化（ＨＥ染色）；②ＩＩⅡ清脂联素（ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｏｎ，ＡＤＰ），肝组织三酰甘油（ｔｒｉｇｌｙ。。ｒｉｄ。ＴＧ）、游 离脂肪酸（ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ，ＦＦＡ）、肝组织脂联素受体（ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ２，ＡｄｉｐｏＲ２）、腺苷酸活化的蛋白激酶（ＡＭＰ—Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｋ ｉｎａｓｅ，ＡＭＰＫ）、脂肪酸合成酶（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＦＡＳ）、乙酰辅酶Ａ羧化酶（ａｃｅｔｙｌ ＣｏＡ ｃａｒｂ０ｘｙｌａｓｅＡＣＣａｓｅ）、丙二酰辅酶Ａ ，（Ｍａｌｏｎｙｌ ＣｏＡ）含量的变化及其各指标问相关性分析。结果模型组肝组织出现程度不同的肝细胞脂肪变性及空泡样变。模型 组肝组织ＴＧ、ＦＦＡ、ＦＡＳ、ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量较正常组显著升高（Ｐ＜０．０１），血清ＡＤＰ与肝组织ＡｄｉｐｏＲ２、ＡＭＰＫ显著降 低（Ｐ＜０．０１）。多烯磷脂酰胆碱组的肝脏脂肪变性显著减轻，肝组织ＴＧ、ＦＦＡ、ＦＡＳ、ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量显著降低（Ｐ＜ ０．０１），血清ＡＤＰ与肝组织ＡｄｉｐｏＲ２、ＡＭＰＫ含量明显升高（Ｐ＜０．Ｏ１）。结论 多烯磷脂酰胆碱对脂肪肝大鼠肝脏脂质沉积有高 强度的抑制效应，其机制与改善脂肪酸代谢有关。 关键词 实验性脂肪肝 三酰甘油 游离脂肪酸 脂联素 多烯磷脂酰胆碱 Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｅｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｉｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ Ｌｉｖｅｒ ｌｉｐｉｄ Ｄｅｐｏｓｉｔｉｎｇ ｉｎ Ｒａｔｓ ｗｉｔｈ Ｆａｔｔｙ Ｌｉｖｅｒ．Ｌｉ ＨｏｎｇｓｈａｎＣｈｅｎ Ｓｈａｏｄｏｎｇ． ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎｉｎｇｂｏ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ ３１５０００，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｉｓｃｕｓｓ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｐｏｌｙｅｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈ０¨ｎｅ ｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｌｉｖｅｒ ｌｉｐｉｄ ｄｅｐｏｓｉｔｉｎｇ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ—ｆａｔ ｄｉｅｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＳＤ ｍａｌｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ＮＡＦＩ ｍｏｄｅｌ ｂｙ ｈｉｇｈ—ｆａｔ ｄｉｅｔ ｆｏｒ １０ ｗｅｅｋｓ．Ａｆｔｅｒ ｓｉｘ ｗｅｅｋｓ，ｔｈｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｐｏｌｙｅｎｅ ｐｈ０ｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈ０１ｉｎｅ ｇｒｏｕｐ ｂｙ ｒａｎｄｏｍｇｉｖｅｎ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｒ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｖｉａ ｇａｓｔｒｏｇａｖａｇｅ．Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ，，ａｎｄ ｗｅｒｅ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｌｉｖｅｒｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｒｅ． ｓｅａｒｃｈ．Ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ：（１）ｌｉｖｅｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ；（２）ｔｈｅ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｓｅｒｕｍ，ａｎｄ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ａｄｉｐｏｎｅ． ｃｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２，ＡＭＰ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｋｉｎａｓｅ，ａｃｅｔｙｌ ＣｏＡ ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｎｄ ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅＴｈｅ ｃｏｒ ．ｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｍｏｎｇ ａｌｌ ｔｈｅ ｄａｔａ ａｂｏｖｅ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ（１）Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｅｒｉｏｕｓ ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒ． ｉｄｅ，ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ，ａｃｅｔｙｌ ＣｏＡ ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｎｄ ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ＡＭＰ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ，ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｒｅ． ，ｄｕｃｅｄ ｍａｒｋｅｄｌｙ．Ｐｏｌｙｅｎｅ ｐｈ０ｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｃｏｕｌｄ ｒｅｄｕｃｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔｆｌｙ．Ｔｈｅ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｒｅｅ ｆａｔｆｔｙ ａｃｉｄ，ａｃｅｔｙｌ ＣｏＡ ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｐｏｌｙｅｎｅ ｐｈ０ ｐｈａｔｊｄｙｌｃｈｏ１ｉｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｒｅｄｕｃｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ． １ｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｄｉｐｏｎｅｅｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ＡＭＰ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ，ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｐｏｌｙｅｎｅ ｐｈｏｓ ｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｒａｉｓｅｄ ｍａｒｋｅｄｌｙ．（２）Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ ａｎｄ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｄｉ． ｐｏｎｅｃｔｉｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｓｅｎｌｍ，ＡＭＰ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ，ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ，ｗｈｉｌｅ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ａｅｅｔｙｌ ＣｏＡ ｅａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｐｏｌｙｅｎｅ ｐｈｏ ｐｈａｔｉｄｙｌｃｈ０ｌｉｎｅ ｈａｓ ｓｔｒｏｎｇ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｌｉｖｅｒ ｌｉｐｉｄ ｄｅｐｏｓｉｔｉｎｇ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒＴｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｍａｙ ｂｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｔｈｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ． ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ；Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ；Ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ；Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｏｎ；Ｐｏｌｙｅｎｅ ｐｈ０ｓｐｈａ ｄｙｌｃｈ０ｌｉｎｅ 多烯磷脂酰胆碱是由大豆中提取的磷脂精制而 ＳＣＸＫ（沪）２００３—０００２。上海中医药大学实验动物中心清洁 级动物房饲养、造模与观察，自由饮水。 ２．药物与试剂：多烯磷脂酰胆碱：北京安万特制药有限公 司生产，批号：Ｄ７０４９。按２２．ｇｒｏｇ多烯磷脂酰胆碱：１ｍｌ蒸馏 水，配成浓度为２２．８ｍｇ／ｍｌ的悬浊液。高脂饲料购自苏州先 狮动物饲料厂。游离脂肪酸（ＦＦＡ）试剂盒（批号：２００８０１１０） 成，其主要活性成分是ｌ，２２二亚油酰磷脂酰胆碱 （ＤＬＰＣ，人体不含），约占５２％。是临床上常用的护 肝药物，在脂肪肝的治疗中应用尤为广泛，有研究表 明，多烯磷脂酰胆碱对脂肪肝患者具有良好的治疗效 果，能改善患者的临床症状和体征，具有防止患者组 织学恶化的趋势 。然而，多烯磷脂酰胆碱改善脂 购自南京建成生物工程公司，三酰甘油（ＴＧ）试剂盒试剂盒 （批号：２００７１１０３３２），温州津玛生物科技公司。大鼠血清脂联 素（ＡＤＰ）ＥＬＩＳＡ检测试剂盒（ＱＲＣＴ一３０１３３２１０３１１１１ＥＩＡ＼ 肪肝肝脏脂质沉积的机制尚不清晰。故笔者拟运用 单纯高脂饮食诱导的脂肪肝模型，开展多烯磷脂酰胆 碱防治脂肪肝的实验研究，旨在观察其对脂肪肝大鼠 肝组织脂质沉积的影响，并同绕脂肪酸代谢路径，探 ｕＩ Ｔ），肝组织脂联素受体（ＡｄｉｐｏＲ２）（ＱＲＣＴ一 ３０１ ３３２１０３３２２１ＥＩＡ＼ＵＬＴ）、腺苷酸活化的蛋白激酶（ＡＭＰＫ） （ＱＲＣＴ一３０１３３２１０３０２２３ＥＩＡ＼ＵＬＴ）、脂肪酸合成酶（ＦＡＳ） （ＱＲＣＴ一３０１ ３３２１０３３３１１ＥＩＡ＼ＵＬＴ）、乙酰辅酶Ａ羧化酶（ＡＣ． Ｃａｓｅ）（ＱＲＣＴ一３０１３３２１０３１３２２ＥＩＡ＼ＵＬＴ）、丙二酰辅酶Ａ（Ｍａｌ— 讨该药影响脂质代谢的主要环节，阐明其防治非酒精 性脂肪肝的部分作用机制。 材料与方法 １．实验动物：ｓＤ雄性大鼠１９只，体重ｌ ５０～１ ８０ｇ，清洁 级，购自中国科学院上海实验动物中心，实验动物许叮证号： ．ｏｎｙｌ ＣｏＡ）（ＱＲＣＴ一３０１３３２１０３０２２１ ＥＩＡ＼ＵＬＴ）ＥＬＩＳＡ检测试剂 盒均购自美国ＡＤＩ 公司。 ３．模型制备：采用单纯高脂饮食大鼠模型，模型制备方 ７４． 医学研究杂志２０１０年ｌ２月 第３９卷第１２期 法 Ｊ：以普通饲料＋２％胆固醇＋１０％猪油组成高脂饲料喂养 ｌＯ周。造模过程中大鼠自行取食、自由饮水。 ４．动物分组和给药：ｌ９只ＳＤ雄性大鼠按随机数字表随 机分为正常组大鼠（５只，予正常饲料喂养）和造模大鼠（１４ 只，予高脂饲料喂养）。造模６周后。再按随机数字表将造模 大鼠随机分为模型组和多烯磷脂酰胆碱组，每组７只。按 ｌｍｌ／１００ｇ体重灌胃给药或饮用水，持续４周。实验结束时： ・论 着・ ６．统计学方法：所有数据均使用ＳＰＳＳＩ２．０软件包进行统 计学分析。计量资料均以平均数＂４－标准差（ ±ｓ）形式表示。 组间比较采用单因素方差分析ｇ检验。等级资料用Ｒｉｄｉｔ分 析。相关分析采用Ｂｉｖａｒｉａｔｅ相关分析。 结 果 １．各组大鼠肝组织病理变化：模型大鼠均出现不 同程度的脂肪变性和空泡样变，变性的肝细胞极度肿 ①称取动物体重，用２％戊巴比妥钠３ｍｌ／ｋｇ腹腔注射麻醉，打 开腹腔，经下腔静脉采血，４℃静置２ｈ后，３０００ｒ／ｍｉｎ，离心 胀呈圆形，体积较正常明显增大，胞质内出现大量脂 肪空泡，部分细胞可见细胞核挤向胞膜，可见散在的 点状坏死灶，坏死区及少量汇管区有少量炎性细胞浸 １５ｍｉｎ，吸取血清，分装，一７０￣Ｃ低温保存；②取下肝脾。在肝 右叶同一位置切取两小块组织，置入１０％中性甲醛缓冲液中 固定。其余肝组织分装于１．５ｍｌ离心管中，一７０℃低温保存。 润，为典型的Ｆ ／Ｇ ，多烯磷脂酰胆碱组大鼠脂肪 变性程度及细胞肿胀明显减轻，胞内脂滴数量减少， 体积变小，炎性细胞浸润及坏死灶较模型组少，下降 为Ｆ：～Ｆ ／Ｇ。～Ｇ：（图１）。Ｒｉｄｉｔ分析结果显示：模型 ５．检测指标与方法：①肝组织ＴＧ、ＦＦＡ含量，酶比色法。 用生化试剂盒测定；②肝组织常规ＨＥ染色，并依据非酒精性 脂肪性肝病诊疗指南 ，判定肝细胞脂肪变性程度（Ｆ。～ ）：Ｆ。： ＜５％肝细胞脂肪变；Ｆ ：５％～３０％肝细胞脂肪变；Ｆ ：３０％～ ５０％肝细胞脂肪变性；Ｆ ：５０％一７５％肝细胞脂肪变；Ｆ ：７５％以 组脂肪变性程度较正常组显著升高（Ｐ＜０．０１），多烯 磷脂酰胆碱组脂肪变性程度较模型组显著降低（Ｐ＜ ０．Ｏ１）（表１）。 上肝细胞脂肪变；③血清ＡＤＰ、肝组织ＡｄｉｐｏＲ２、ＡＭＰＫ、ＦＡＳ、 ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量，均采用ＥＬ１ＳＡ法检测。 图Ｉ各组大鼠肝组织脂肪变性示意图（ＨＥ染色，×２００） Ａ．正常组；Ｂ．模型组；Ｃ．多烯磷脂酰胆碱组 表ｌ 各组肝组织病理ＨＥ染色脂肪变性比较（只） ２．各组大鼠肝组织ＴＧ、ＦＦＡ含量的变化：与正常 大鼠相比，模型大鼠肝组织ＴＧ和ＦＦＡ含量大幅度升 高（ｇ值分别为ｌ５．３０和１９．３４，Ｐ＜０．Ｏ１），分别达正 常组的３．２倍和３．５倍，而多烯磷脂酰胆碱组的肝组 织ＴＧ及ＦＦＡ含量均显著低于模型组（ｑ值分别为 ７．０４和１０．７０，Ｐ＜０．０１）（表２）。 与模型组相比．‘Ｐ＜０．０１ 表２各组大鼠肝组织ＴＧ、ＦＦＡ、ＡｄｉｐｏＲ２含量和血清ＡＤＰ的变化（ ±ｓ） 与模型组相比． Ｐ＜０．０ｔ ３．各组大鼠血清ＡＤＰ，肝组织ＡｄｉｐｏＲ２含量的变 化：较之正常组，模型大鼠血清ＡＤＰ含量及肝组织 磷脂酰胆碱组的血清ＡＤＰ含量及肝组织ＡｄｉｐｏＲ２含 量则显著高于模型组（ｑ值分别为５．００和４．１４，Ｐ＜ ０．０１）（表２）。 ＡｄｉｐｏＲ２含量均显著降低（ｑ值分别为９．８５和７．９０。 Ｐ＜０．０１），分别为正常组的５６．１０％、５５．９５％，多烯 ４．各组大鼠肝组织ＡＭＰＫ、ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ一 ・７５・ ・论 善・ 酰胆碱组的肝组织ＡＭＰＫ含量显著高于模型组（ｑ＝ ４．３８，Ｐ＜０．０５），且肝组织ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ、 ＦＡＳ均显著低于模型组（ｑ值分别为６．１０、６．２１和 ３．５４，Ｐ＜０．０５）（表３）。 ＣｏＡ、ＦＡＳ含量的变化：模型组肝组织ＡＭＰＫ含量较 正常组显著降低（ｑ：７．Ｏ１，Ｐ＜０．０１），其肝组织ＡＣ— Ｃａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ、ＦＡＳ均较正常组显著升高（ｑ值 他 ｍ 一 分别为７．９２、７．８２和５．９３，尸＜０．０１）。而多烯磷脂 表３各组大鼠肝组织ＡＭＰＫ、ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ、ＦＡＳ含量的变化（ ±ｓ） Ｏ ０ １ ８ ０ ∞ 与模型组相比， Ｐ＜０．０１ 一一 Ｏ Ｏ ０ ０ １ １ ０ ９ ０ ∞他∞ 一５．血清ＡＤＰ含量、肝组织ＴＧ、ＦＦＡ、ＡｄｉｐｏＲ２、 ＡＭＰＫ、ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙ１一ＣｏＡ、ＦＡＳ、ＣＰＴ—ｌ含量相 呈显著正相关；血清ＡＤＰ含量与肝组织ＡｄｉｐｏＲ２、 ＡＭＰＫ含量呈显著正相关，而与肝组织ＦＡＳ、ＡＣＣａｓｅ、 Ｏ Ｏ Ｏ ０ ０ Ｏ 关性分析：对正常组、模型组和药物干预组的各个样 本进行相关分析，结果显示：肝组织ＴＧ、ＦＦＡ含量与 血清ＡＤＰ、肝组织ＡｄｉｐｏＲ２、ＡＭＰＫ含量呈显著负相 关，而与肝组织ＦＡＳ、ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量则 Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量则呈显著负相关；肝组织ＡＭＰＫ ∞ ∞ ∞ 一 ３ Ｏ ８ Ｏ ６ ４ 含量与肝组织ＦＡＳ、ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｈｍｙｌ—ＣｏＡ含量呈显 著正相关（表４）。 Ｏ ０ Ｏ ０ Ｏ ０ Ｏ ０● ２ ９ ７刀∞６ 的∞ ∞ ，２ Ｏ ∞ ３ 表４相关分析统计（ｎ＝１９，上方为ｒ值，下方为Ｐ值） Ｏ．８２１ ０．７６７ ０．０００ ０．７９８ ０．０００ Ｏ．５９３ Ｏ Ｏ ０．０００ ０ ７５６’ ０．０００ Ｏ ０ ０ Ｏ ０ Ｏ ０ Ｏ Ｏ ０ １ ０．７６５ ０．００７ Ｏ ０ ０ Ｏ ７ ｌ ３ ７ ８ ６ ４ ｌ ∞ 吣 ∞ ∞∞∞ ∞ ０．８４ｌ ０，０００ ０．６５９ ０ ０００ ０．７２０ Ｏ．ＯＯｌ ｌ —０ ００２ ０．８１０ ０．０００ ０．７１４ Ｏ．Ｏ０ｌ ＦＡＳ ０．６６３ ０．００２ Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ １ 在显著水准为０．Ｏｌ时（双尾），相关显著 讨 论 陷，相伴的脂肪毒性和葡萄糖毒性造成肝损害，并诱 致系统性代谢应激，产生代谢功能不全综合征 。 导致肝脏ＦＦＡ异常增多的原因包括胰岛素抵抗引起 的脂肪组织脂解增多、肝脏合成ＦＦＡ增多、ＦＦＡ氧化 分解减少，极低密度脂蛋白合成与分泌障碍等 。 非酒精性脂肪性肝病（Ｉ＇ｌＯＦｌ—ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＡＦＬＤ）为由遗传一环境一代谢应激相关因 素所致，以肝细胞内脂肪堆积为主的临床病理综合 征 ，其发病具体机制尚未清楚，而ＦＦＡ和ＴＧ的积 聚，肝脏脂肪代谢失衡是脂肪肝形成的主要启动因 素，尤其是ＦＦＡ异常增多在ＮＡＦＬＤ的发生发展中起 其中肝脏对ＦＦＡ合成与氧化代谢的失衡是ＦＦＡ增高 的重要原因之一。 着非常重要的作用，高游离脂肪酸血症与高胰岛素血 症一起形成ＮＡＦＬＤ病理过程中的两个基本代谢缺 ．研究结果发现，多烯磷脂酰胆碱对模型组显著升 高的肝组织三酰甘油、游离脂肪酸含量具有高强度的 ７６． 医学研究杂志２０１０年１２月 第３９卷第１２期 抑制效应，其含量分别为模型组的７１．０７％， ５５．５８％，结合模型大鼠ＨＥ染色组织学变化及该药 的改善效应，证实了其高强度抑制肝脏脂肪沉积的药 效学效应。提示多烯磷脂酰胆碱能改善肝脏脂肪代 谢失衡这一脂肪肝形成的主要启动因素，并降低ＦＦＡ 毒性。 脂联素是目前已知的唯一一个与肥胖呈负性相 关的脂肪分泌蛋白，在肥胖者脂肪组织中的基因表达 明显降低 。。低脂联素血症与肥胖和ＩＲ存在密切联 系，可能是导致ＮＡＦＬＤ发生的重要因素之一 。有 研究表明，脂联素及其受体２在脂肪肝病理变化中具 有重要意义 ，ＡＭＰ激酶（ＡＭＰ—Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｋ ｉｎａｓｅ， ＡＭＰＫ）是肝脏脂肪酸合成与氧化的关键信号分子， 脂联素在与其受体结合后，能激活这一信号分子，引 起其下游一系列分子的改变，主要有以下几方面 ： ①减少肝糖输出，其中ＡＭＰＫｃ￣２亚单位是脂联素抑制 肝糖输出最关键的靶点“ ；②使其下游限速酶ＡＣＣ失 活而发挥促进脂肪酸氧化作用，降低血ＦＦＡ水平 ； ③使ＡＣＣａｓｅ磷酸化而活性降低，Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量 下降，从而减少肝脏脂肪沉积。这样就形成了一个以 脂联素为起点的游离脂肪酸代谢路径，这一路径的变 化在脂肪肝发生发展中起着非常重要的作用。 对模型组显著降低的血清脂联素含量，多烯磷脂 酰胆碱具有明显改善作用，其血清脂联素含量为模型 组的１．３６倍。同时，该药能降低脂肪肝模型大鼠明 升高的肝组织ＦＡＳ、ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量， 明显升高模型组显著降低的肝组织ＡｄｉｐｏＲ２、ＡＭＰＫ 含量，达到与正常组相当的水平。相关分析结果显 示：肝组织ＴＧ、ＦＦＡ含量与血清ＡＤＰ、肝组织Ａｄｉ． ｐｏＲ２、ＡＭＰＫ含量呈显著负相关，而与肝组织ＦＡＳ、 ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量则呈显著正相关；血清 ＡＤＰ含量与肝组织ＡｄｉｐｏＲ２、ＡＭＰＫ含量呈显著正相 关，而与肝组织ＦＡＳ、ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量则 呈显著负相关；肝组织ＡＭＰＫ含量与肝组织ＦＡＳ、 ＡＣＣａｓｅ、Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量呈显著正相关。由此可 见，游离脂肪酸代谢路径各指标间均有有密切相关， 脂联索与代谢路径下游的各指标问也具有显著相关 性，结合游离脂肪酸代谢路径大多指标与肝脏ＴＧ含 量和ＦＦＡ含量的密切关联性，此结果不仅进一步支 持了“脂联素一游离脂肪酸代谢”路径的存在，也为 该路径在脂肪肝病理机制中的重要意义进一步提供 ・论 誊・ 了重要的证据。提高血清ＡＤＰ含量、改善游离脂肪 酸代谢路径而降低ＦＦＡ和肝脏脂肪含量的结果，不 仅证实“脂联素一游离脂肪酸代谢”路径在脂肪肝病 理机制中的重要意义，也提示，多烯磷脂酰胆碱对脂 肪肝大鼠肝组织脂质沉积的高强度抑制效应，基于其 改善血清脂联素水平后，引起以下两方面的变化： ①提高血清脂联素水平，进而抑制脂肪酸合成的两个 关键酶ＡＣＣａｓｅ和ＦＡＳ，使脂肪酸合成减少；②通过减 少Ｍａｌｏｎｙｌ—ＣｏＡ含量，激活ｃ ＰｒＩ１—１活性，刺激脂肪 酸氧化。最终降低肝脏ＦＦＡ含量，减少内源性ＴＧ 的合成，改善肝脏脂肪代谢失衡这一脂肪肝形成的 主要启动因素及降低ＦＦＡ毒性。至于该药对游离脂 肪酸代谢路径上脂联素外的其他环节是否有直接干 预作用，还有待于今后进一步深人研究。 参考文献 １ 申泽．易善复治疗非酒精性脂肪肝１００例疗效观察．中华现代临 床医学杂志，２００７，５（８）：６９３—６９４ ２ 胡国平，刘凯，赵连三．多烯磷脂酰胆碱（易善复）治疗酒精性肝 病和脂肪肝的系统评价．肝脏，２００５，１０（１）：５—７ ３ 中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组．非酒精性脂 肪性肝病诊疗指南．中华肝脏病杂志，２００６，１４（３）：１６１—１６３ ４ Ｌｉｅｂｅｒ ＣＳ．ＣＹＰ２ＥＩ：ｆｒｏｍ ＡＳＨ ｔｏ ＮＡＳＨ．Ｈｅｐａｔｏｌ Ｒｅｓ，２００４．２８ （１）：１—１１ ５ 曾民德．葡萄糖毒性、脂肪毒性与非酒精性脂肪性肝病．中华肝 脏病杂志，２００５，１３（２）：２８１—２８２ ６ 徐正婕，范建高，王国良，等．游离脂肪酸在脂肪性肝炎发病中 的作用．中华肝脏病杂志，２０００，８（２）：１２７—１２８ ７ Ｂａｒａｎｏｖａ Ａ，Ｇｏｗｄｅｒ ＳＪ，Ｓｅｈｌａｕｅｈ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｅｐ— ｔｉｎ，ｒｅｓｉｓｔｉｎ，ａｎｄ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｗｈｉｔｅ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｏｂｅｓｅ ｐａ— ｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ—ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ， Ｏｂｅｓ Ｓｕｒｇ，２００６（９），１６：１１１８一Ｉ１２５ ８ 杨辉，李瑜元，聂玉强，等．非酒精性脂肪肝患者胰岛素抵抗与脂 联素基因表达的关系．中华肝脏病杂志，２００７，１５（７）：５２５—５２８ ９ 李红山，胡义扬，冯琴，等．脂联素及其受体在脂肪肝病理变化中 的意义及其中药干预．中华肝脏病杂志，２００９。１７（１１）：８２６—８３０ １０ Ａｈｉｍａ ＲＳ．Ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ａｓ ａｎ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｏｒｇａｎ．Ｏｂｅｓｉｔｙ（Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇ），２００６，１４（５）：２４２—２４９ １ １ Ａｎｄｒｅｅｌｌｉ Ｆ，Ｆｏｒｅｔｚ Ｍ，Ｋｎａｕｆ Ｃ，ｅｌ ａ１．Ｌｉｖｅｒ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓ－ ｐｈａｔｅ—‘ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ－—ａｌｐｈａ２ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｓｕｂｕｎｉｔ ｉｓ ａ ｋｅｙ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ｇｌｕｃｏｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ ａｎｄ ｌｅｐｔｉｎ ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎｓｕｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００６，１４７（Ｓ）：２４３２—２４４１ １ ２ Ｆｒｕｅｂｉｓ Ｊ，Ｔｓａｏ ＴＳ，Ｊａｖｏｒｓｃｈｉ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ ｃｌｅａｖａｇｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｆ ３０－－ｋ Ｄａ ａｄｉｐｏｅｙｔｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ—－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｕｓｃｌｅ ａｎｄ ｃａｕｓｅ ｗｅｉｇｈｔ ｌｏｓｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００１，９８（４）：２００５—２０１０ （收稿：２０１０—０６—０２） （修回：２０１０—１１—０３） ・７７・
