５８６· 临床误诊误治２０１０年６月第２３卷第６期Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｓｄｉａ￣ｎｏｓｉｓ＆ＭｉｓｔｈｅｍＤｖ，Ｖｏ１．２３ Ｎｏ．６，Ｊｕｎｅ ２０１０ 药品无菌检查的影响因素分析 杨 静，王文习，李 翔，苗爱东 ［关键词］ 药品检查；安全管理；综合预防 ［中国图书资料分类号］ Ｒ９５４ ［文献标志码】 Ｂ ［文章编号】 １００２—３４２９（２０１０）０６—０５８６—０２ 无菌检查是对临床要求无菌的药品及其他物品是否 术指标。 染有活菌的一种检测方法 ｊ。“欣弗事件”涉及的“欣弗” 系安徽华源生产的克林霉素膦酸酯葡萄糖注射液，经中国 药品生物制品检定所抽样检验表明，其无菌检查和热原检 查均不符合规定，致使患者出现寒战、高热、呼吸困难、发 绀等症状，而“欣弗”事件也使无菌制剂的无菌保障问题 成为公众关注的焦点 。。保证药品无菌制剂达到无菌要 求，确保临床用药安全，是药品生产企业和药品监管部门 需要认真思考的问题 。由于无菌检查的所有操作均需 在严格控制微生物污染的环境下进行，环境条件要求严 格，许多干扰因素都会造成检验结果误差。本文结合工作 实践，就影响药品无菌检查的各种因素进行文献综述，以 期引起同道的关注。 １关于药品的无菌检查 我国的药品检验制度是伴随着药品抽查检验工作的 开展而不断完善的。建国之初各地即建立了药政机构和 药检机构，药品抽查检验制度和药品标准都逐步建立起 来，至１９５３年全国已建立ｌ３个药品检验所和ｌ４个药品 检验室，同时颁布了一系列的药规。由于特殊的历史 原因，１９６６～１９７６年我国的药政、药检机构遭到严重破坏， 工作停滞，并出现了一系列的“药害”悲剧＂ 。经过一段 时期的恢复，１９８４年后我国的药品检验工作得到了空前 的发展和进步。多次完善后的《药品管理法》确立了药品 抽查检验制度的法律地位。近年随着临床药品检验方法 的不断改进，检验水平亦日趋提高。 ２药品无菌检查的影响因素 ２．１操作环境的影响 ２．１．１药品无菌检查的环境要求：国家药典明确规定 ｊ： 无菌检查应在环境洁净度１００００级和局部洁净度１００级 的单向流空气区域内进行，其全过程必须严格遵守无菌操 作，防止微生物污染。每次操作前用０．１％苯扎溴胺或其 他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，然后启动层 流净化装置，同时用紫外线杀菌灯照射１ ｈ。紫外线杀菌 灯应定期检查辐射强度，不符合要求的紫外线杀菌灯及时 更换。操作前采用沉降菌检测方法检查空气中的菌落数， 以此来判断无菌室是否达到规定的洁净度 ’ 。这些工 作在菌检中应得到足够的重视，确保无菌室达到规定的技 作者单位：１０００７１北京，北京军区联勤部药品仪器检验 所生测室（杨静、李翔、苗爱东）；０５００８２石家庄，白求 恩国际和平医院药剂科（王文习） ２．１．２无菌检查环境对药品检查造成的影响：菌种处理 应在半无菌室进行，严禁在无菌检查用洁净室操作，否则 会导致试验室环境污染或菌种间交叉污染 。无菌室的 温度、湿度也会对药品检查造成影响，故应严格控制无菌 室的温度在１８～２６℃，相对湿度为４５％～６５％。若室温 过低，培养基中的琼脂易发生凝固，进而影响厌氧菌的 检出。 ２．２设备及用具的影响无菌室内应固定存放乙醇灯、 火柴、镊子、剪刀、７５％乙醇棉、聚维酮碘棉等。药品检验 人员进入无菌室后勿频繁走动，操作过程中如需传递物品 应通过传递箱，不要随意出入无菌室。凡操作所用的器皿 均应洗涤干净，用牛皮纸包扎严密，灭菌。经高压蒸汽灭 菌的物品取出时切勿立即置冷处，避免因急速冷却，使灭 菌物品内蒸汽冷凝造成负压而易感染细菌，取出后应置恒 温培养箱中烘干，待用。各种恒温、恒湿培养箱除定期检 查外，还应每天观察箱内温度及湿度的波动范围；每次使 用高压蒸汽灭菌器前，应检查、判断其是否在设定的温度 与压力条件下可达到灭菌效果。反之，不符合器械及设备 使用和管理规定的情况均有可能影响药品检验的准确性。 ２．３培养基的影响 ２．３．１培养基的配制及保存：培养基质量的好坏、稳定与 否，对检验结果有着极为重要的影响。目前一般药品检验 采用脱水培养基，由于微生物在室温下接触水会迅速繁 殖，因此配制好的培养基最好立刻灭菌 。灭菌后的培 养基应保存在２～２５ ｏＣ的环境内，时间不宜过长，若保存 于非密闭容器中需在３周内用毕，以免水分散失及染菌。 ２．３．２培养基的灭菌处理：培养基只能进行一次蒸汽灭 菌处理，已灭菌的固体培养基使用前宜用水浴或微波炉加 热熔化，勿用电炉直接熔化，以免营养成分因过度受热而 破坏。已熔化的培养基应一次用完，剩余培养基不宜再 用。用于培养需气菌、厌气菌的硫乙醇酸盐流体培养基， 在供试品接种前培养基氧化层颜色不得超过培养基深度 的１／５，使培养基的深部具备良好的厌氧环境，以保证药 品中厌气菌的充分生长 。否则，需经１００℃水浴或流通 蒸汽加热至粉红色消失（不超过２ ｍｉｎ），并迅速冷却后方 可再次使用。 ２．３．３培养基的适用性检查：供试品在做无菌检查前，务 必先行培养基的适用性检查，即对每个批号的脱水培养基 均要进行无菌检查和灵敏度检查，两项检查均符合规定后 方可用于供试品的无菌检查。如果所用培养基不符合无 临床误诊误治２０１０年６月第２３卷第６期Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｓｄｉａ￣ｎｏｓｉｓ＆Ｍｉｓｔｈｅｒａｐｖ，Ｖｏ１．２３，Ｎｏ．６，Ｊｕｎｅ ２０１０ ·５８７· 菌要求，供试品的无菌检查应视为无效。 ２．４供试液制备过程的影响 ２．４．１验证要求：国家药典委员会下发的“关于执行《中 的菌液每毫升含菌应小于１Ｏ０ ｃｆｕ，且为了保持菌种的活 性应当日使用。 ２．７强化无菌观念无菌检查、微生物限度检查是药品 国药典＞＞２００５年版微生物限度检查法和无菌检查法有关 问题的说明”中规定：当进行药品无菌检查或微生物限度 检查时，应进行方法验证 。验证结果应实事求是，有特 指性和肯定性 …。进行供试品无菌检查时，检查方法和 检验条件应与验证的方法相同。 安全性检查的重要项目 。作为药品检验人员应把无菌 观念贯穿药品检验的全过程，例如无菌衣、裤、帽、口罩等 每次用前应进行消毒处理或用一次性无菌物品代替。每 次操作完毕后应同操作前一样擦拭、消毒无菌室。用作乙 醇棉的脱脂棉应灭菌后再使用。 总之，我们应以高度的责任心和严谨的工作态度认 ２．４．２无菌要求：供试品检验全过程必须符合无菌技术 要求。应在近火焰区进行操作，且操作过程中不应大幅度 或快速动作，以免搅动空气中的尘埃微粒 ；使用灭菌用 具时勿接触可能污染的任何器物，灭菌吸管勿用口吹吸。 ２．４．３方法要求：薄膜过滤法具有操作快速、简便，污染 机会相对少的特点。２００５年版药典规定，只要供试品性 状允许，无菌检查应采用薄膜过滤法。 。为避免微生物 污染，可优先选用封闭式薄膜过滤器，最好依供试品种类 不同选择适宜的集菌培养器。水溶性供试液过滤前应先 将少量的冲洗液过滤，以润湿滤膜，滤膜润湿和冲洗液充 分振摇的较滤膜不润湿和不振摇的所用冲洗量少 。采 用少量、多次冲洗的方法既可以节约冲洗液，又能冲洗干 净，消除抗菌成分 。 ２．４．４酶类要求：在Ｂ一内酰胺酶类抗生素的无菌检查 中，可通过加入适量Ｂ一内酰胺酶（青霉素酶）以消除残留 药物的抑菌活性 。 ２。４．５试剂要求：如需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂 等试剂，应证明其有效性，且对微生物生长及存活无影响。 每次操作时均应取相应溶剂和稀释剂及冲洗液作阴性对 照，若试剂不纯、引入微量杂质或干扰物质、标准试剂校正 因子Ｆ值不准等均可影响检验结果。 ２．４．６操作要求：操作误差是由于检验人员操作不当引 起。如读滴定管数值时偏高或偏低，滴定终点颜色辨别偏 深或偏浅，没有注意供试品本身的特性等。文献报道无菌 检查中还需考虑在大量冲洗后细菌易受损及营养支持等 问题，因此选用含营养成分的０．１％蛋白胨水溶液即可满 足要求 ｊ。 ２．４．７剂量要求：供试品、稀释剂、培养基均要定量加入， 以使检查标准化，并控制试验结果 ，勿估计取量。 ２．５正确判断检查结果 在规定的培养条件下，应严格 遵守培养时间，培养期内必须逐日仔细观察，如培养基在 加入供试品后或在培养过程中出现浑浊，培养１４ ｄ后不 能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量接种 于同种新鲜培养基中或斜面上，继续培养（细菌培养４８ ｈ、 真菌培养７２ ｈ），观察是否再现浑浊或斜面上有无菌落生 长。亦可用接种环取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有 菌生长。 ２．６菌种的制备及保存菌种是活的微生物，在菌种的 使用贮藏过程中需定期传代，并防止变异，无菌检查所用 菌种的传代次数不得超过５代，应有专人负责，并专用冰 箱保存，使用前应对菌种的纯度和特性进行确认。制备好 真对待药品检验的每一个细小的操作环节，以保证检验结 果的科学、准确，从而保障临床用药安全。 ［参考文献］ ［１］ 中国药典编纂委员会．中国药典［Ｍ］．北京：化学工业出 版社，２００５：８９—９３． ［２］ 曹成，卢玲．从“欣弗事件”祸因谈灭菌操作要点［Ｊ］．药 学与临床研究，２００７，１５（１）：８８＿８９． ［３］ 李永亮，张宏飞．注射剂无菌安全存在的问题及对策思 考［Ｊ］．中国实用医药，２００８，３（１）：１５５—１５７． ［４］ 谢志洁．我国药品抽查检验法律制度的历史变迁—— 关于我国药品抽查检验法律制度的系列思考（４）［Ｊ］． 现代食品与药品杂志，２００７，１７（６）：１—３． ［５］ 中国药品生物制品检定所编．中国药品检验标准操作规 范［Ｍ］．北京：中国医药科技出版社，２００５：３１３－３２３． ［６］ 汪穗福．微生物检测验证技术［Ｍ］．北京：中国医药科技 出版社，２００５：１１． ［７］ 许华玉，李智勇，王国荣，等．２００５版《中国药典》无菌检 查法修订内容的介绍［Ｊ］．中国药品标准，２００５，６（２）： ３９４１． ［８］ 李玉芹．浅谈目前无菌检查和微生物限度检查存在的问 题［Ｊ］．中国药事，２００７，２１（１２）：ｌＯ１１—１０１２． ［９］ 罗书香．药品微生物限度检查方法验证资料分析［Ｊ］． 中国药事，２００７，２１（７）：５２５—５２６． ［１Ｏ］黄英，赵中泽，刘向前．无菌检查法影响因素分析［Ｊ］．中 国药师，２００６，９（３）：２８７—２８８． ［１１］杨芳，冯志学，谢丽群，等．替硝唑注射液的无菌检查方 法验证［Ｊ］．中国药业，２００７，１６（１６）：３３—３４． ［１２］国圜，刘兴兰．注射用磺苄西林钠的无菌实验方法学研 究［Ｊ］．现代医药卫生，２００７，２３（２）：１９１—１９２． ［１３］陈润莉，王咏梅．头孢菌素类无菌检查中酶处理探讨 ［Ｊ］．中国药师，２００８，１１（７）：８５７—８５８． ［１４］俞信真．药品检验结果的误差来源与控制［Ｊ］．医药导 报，２００９，２８（１）：１０９一ｌ１０． ［１５］方玲芬，徐洪．注射用奥关拉唑钠无菌检查法方法学研 究［Ｊ］．中国药品标准，２００６，７（４）：６４—６６． ［１６］翟枫，裴明日，姜丽，等．微生物限度检查的定量方法改 进［Ｊ］．中国药业，２００５，１４（３）：４４． ［１７］许华玉，杜鹃，汤杨．药品中微生物污染检测方法验证的 必要性［Ｊ］．中国药品标准，２００５，６（４）：４６４８． （收稿时间：２０１０—０２—２５）
