酶标仪方法确认作业指导书

一、目的

指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。 二、精密度

指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度，一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 三、专属性

指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。色谱法应附代表性图谱，并标明诸成分在图中的位置，分离度应符合要求。 四、检出限

指试样中被测物能被检测出的最低量。色谱法一般采用信噪比法。一般以信噪比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。 五、线性

指在设计的范围内，测量结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。要求列出回归方程、相关系数和线性图。 六、范围

指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

1、目的

对酶标仪所涉及到的方法进行确认，以证实酶标仪能够正确运用这些方法，并能证实该方法适用于预期的用途，在误差的允许范围之内，可在本实验室内运行。

2、范围

适用于实验室酶标仪所涉及到的标准方法及非标准方法。 3、职责

3.1 技术负责人指定专人负责方法的确认，并对方法确认的结果进行核查批准；

3.2 参加方法确认的工程师应详细记录试验现象及数据，总结实验结果，并编写成文件；

3.3 相关人员严格按此作业指导书作业书。 4、名词解释 4.1 检出限

方法检出限是指某一方法在给定的置信水平上可以检出被测物质的最小浓度（相对检出限）或最小质量（绝对检出限）。方法检出限的确定方法有不同，根据不同的检测方法选择合适的确定方法。

4.2 线性

线性关系是指分析方法能够得到与被测物质的量或浓度具有直线关系的测定值的能力。

4.3 精密度

精密度是指从均匀样品中抽取的复数个待测样品进行重复分析测定时，所得到的一系列测定数据彼此之间的一致程度。测定值的误差以偏差、标准偏差、或相对标准偏差的形式表示。

4.4 准确度

准确度指分析方法所得测定值与真实值（标准值）相符合的程度，通常以测定重现精密度时所得总平均值与真值的差于真值的比值表示（真值一般使用理论值，如果理论值不存在或即使存在但很难求出的情况下，可采用经过确证或认可的数值来代替）。

4.5 分析结果的不确定度

测量不确定度：表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。在实际工作中，结果的不确定度可能有很多来源，例如定义不完整、取样、基体效应和干扰、环境条件、质量和容器的不确定度、参考值、测量方法和程序中的估计和假定、以及随机变化等。方法确认时，应努力尝试找出影响不确定度的所有分量，并作出合量的评估，并应确保报告结果的表达方式不会引起错觉。合理的评估应建立在对方

法实施知识以及测量范围的基础上，并利用过去的经验。对各影响量产生的不确定度分量不应有遗漏，也不能有重复。在评定测量不确定度时，对给定条件的所有重要不确定分量，均应采用适当的分析方法加以考虑。

4.6方法的灵敏度

灵敏度可用仪器的响应值或其它指示量与对应的待测物质的浓度或量之比来描述。一个方法的灵敏度可因试验条件的变化而变化。在一定的实验条件下，灵敏度具有相对的稳定性。

5、作业内容 5.1线性评价

5.1.1准备6个不同水平的标准溶液，每个浓度的标准溶液随机顺序测2次，做标准曲线，观察其回归方程及线性相关系数是否符合要求。

5.1.2 标准曲线的最高点浓度不大于最低点浓度的50倍。 5.1.3 曲线的最低点最好和报告的检出限相近。 5.2 检出限确认

5.2.1 方法检出限（MDL）

重复测定试剂空白中的标品至少7次，计算出标准偏差s，乘以3可以得到MDL的估计值。

选择质地均匀的样品，并确保样品无读数，加入和MDL估计值浓度相近的标品，重复试验至少7次，7次试验平均分布在三天内完成。

计算加标试验的标准偏差，MDL=t（n-1）×s，其中 t值是指在99%置信区间，自由度为n-1时的t分布的系数，可查表得出 n 7 8 9 10

注：计算得到的MDL值应该不超过10倍的加标量，否则，应该选择更低的浓度值重复上述步骤。

计算加标样的回收率和RSD值，回收率的范围应该在70~130%之间，RSD≤20%。

回收率=标品的实际值/加标的理论值×100% 5.3 准确度和精确度确认 5.3.1准确度确认

用加标回收率测定，在样品中加入一定量标准物质测定其回收率。 至少测试7次加标样，且7次加标样应该平均在三天做完。

t 3.14 3.00 2.90 2.82 记录测试结果并计算回收率，回收率范围应该在80~120%之间， RSD≤20%。 5.3.2 精确度确认

试验应尽量覆盖方法提及的不同材质样品

试验加标水平应尽量覆盖方法的测试范围，要包括比MDL稍大的浓度点，线性的最高点

重复试验至少七次，RSD≤20% 5.4 数据记录

试验人员在实验过程中应详细记录试验的整个过程，包括样品的制备方法、标准品的级别及试剂的调配、试验环境、分析测试参数、注意事项、分析结果等。