几种厌氧菌的培养方法

‘、󰀁尹󰀁‘,””妙术与方法󰀂,的的”叭”、󰀁尹,几种厌氧菌的培养方法诸葛健 无锡轻工业学院无锡!‘,仍”的”沪在发酵工业中常需培养厌氧细菌丙酮丁醉的梭状芽抱杆菌,如生产加人未脱脂棉∃多的∀脱脂棉和结晶焦性没食子酸及溶液白酒生产中与产醋。∋&()。最后用橡皮塞塞满空间香关系密切的丁酸菌和己酸菌等 约∀#∃毫伏或更低!的培养基中由于许多专它们与分子并盖紧塑料盖为防止∋&∃)溶液漏人培养。性厌氧菌最初仅能生长在氧化还原电位较低基中可先将玻管倒置使琼脂层在上层橡皮塞外加塑料盖氧接触会很快死亡,因此在培养厌氧菌时应。尽可能减少与分子氧接触的机会种厌氧菌的培养方法。这里介绍几培琼抽幽田+󰀁接种颤酬 三!结晶焦性食子酸∗&∋()脱脂棉花未脱脂栩花一培并签城先还原法在培养基中预先加人对微生物生长发育无,脂触耗害的还原剂如半胧氨酸疏基化合物硫化钠或抗坏血酸等使培养基预先被还原使氧化还原电位降低到一定程度,,然后在隔绝空气的条四 一! 二!图%加吸氧剂法件下存放培养基备用二。琼脂管培并法 图∀!首先在一根两端开口的无菌玻璃管的一端双层试管培并法 图,!将穿刺接种后的小试管放在盛有结晶焦性∃多&没食子酸的较长大的试管中再加入∀塞入一无菌橡皮塞,然后从另一端注入融化的∋−)无菌培养基装量占管的大部分使琼脂面离顶端%#溶液,立即塞上无菌橡皮塞并加塑料盖盖紧进。厘米用无菌橡皮塞塞紧并用塑料盖盖,行培养紧。待其冷却凝固,再穿刺接种厌氧菌。在菌落长出后用无菌玻棒将琼脂柱挤出培养物供橡皮塞夕加塑料澎试验用。橄皮塞外加塑料盖琼脂培养墓日幽阶。棉花塞穿刺接种的小试管长出的厌氧菌橄皮塞 ‘!图.琼脂管培养法图,双层试管培养法三加吸级荆法 图/!用二”法之玻管装琼脂培养基“五缺妞培养皿培养法在培养皿盖上铺上琼脂培养基󰀂在皿底一装量仅为玻管高度之半接种后,从琼脂表面往上逐层∃沁的侧放上结晶焦性没食子酸另一层注入∀∋&−)溶液,勿使二者混合。待将菌划线接种脂培养基表面可覆盖一层凡士林与石蜡的混合物气。在皿盖的琼脂培养基上以后,立即将盖与底合。如条件许可,用氮气或二氧化碳气排除空,在一起并用石蜡将盖与底之间的缝隙密封后将皿底之两种化合物混合以吸除氧气,然,效果更好。吸氧剂的添加量∀一般可按每。进行∀∃∃毫升空气中的氧需用克结晶焦性没食子厌氧培养。∀毫升∃∀外酸和∃&∃)∋溶液来估计为了更好地隔绝空气上述各法中所用琼发酵液中丁二酸的分析林应锐0 中国科学院微生物研究所北京!分析与其它二元酸混杂着的丁二酸时∀.用气相色谱法1。,,多,。高锰酸钾,至煮沸条件下出现极少棕色沉淀且。但该法必须先除去其它杂质,在%一,分钟内不消失为止∀毫升左右为∃。煮沸浓缩至体积。然后经过定量醋化才能进行分析操作颇繁杂冷却后,,滴加,∃关氢氧化钠近年采用液体色谱法山需仪器目前尚未普及,。较为方便,。但该法所至碱性 用酚酞指示剂或7)试纸测定!,将样我们在工作中设计了不。一品转移至量筒内用少量水洗三角瓶洗液合并在量筒内定容至%∃毫升,必先分离掉反丁烯二酸,酮戊二酸和苹果酸,,。过薄除去氢氧化物,等杂质直接分析发酵液中丁二酸的方法较为#毫升量筒里收集∀∃毫升滤液沉淀在另一%简捷可用于处理大量样品的常规分析准确性∃拓以上在2一康班、加入一滴6∃8&硝酸溶液使酚酞褪色 7)5一。!。滤液移至三角瓶中󰀁%&∃再用盛此滤液的1筒,量取%∃毫升硝酸银溶液加入三角瓶中在酸性高锰酸钾的沸腾溶液中,丁二酸不,。随后用%∃毫升水洗涤量筒洗液并入三角瓶,4,受氧化而反丁烯二酸和苹果酸则被氧化掉3〔们。一酮戊二酸可以定量地被氧化为丁二酸如中摇荡均匀静置片刻过滤除去银盐沉淀用量筒收集%#毫升滤液倒至三角瓶中再用少1,此,可于酸性条件下加入高锰酸钾至发酵液中,水洗量筒产洗液合并在三角瓶里加人9一5滴,一起煮沸进行氧化使之只留下丁二酸再将反应液调至中性加人硝酸银过滤除去丁二酸银沉淀再用氯化钠回滴过量的银盐由此得出丁二酸总量以#45󰀁一%肠重铬酸钾溶液,用标准的∃8&氯化钠溶液,,滴定至红棕色褪去呈淡黄色为止三。,,结果计算然后减去由比色法测定之发酵按以下公式计算丁二酸含量:丁二酸 毫克;毫升!< =一>!#2=:6液中。酮戊二酸含量∀即能获得原来发酵液8&。?一。≅Α;中丁二酸的真正含量。∃毫升硝酸银溶液所用去之抓化滴定∀二操作方法∃关硫酸溶液加至%将%∃毫升∀∃毫升含>:、钠溶液毫升数󰀂滴定样品所用去之氯化钠溶液毫升数󰀂氯化钠溶液的实际当量浓度󰀂最终用于滴定时所用原发酵液样品毫升数 %󰀁上述有机酸钙盐沉淀的发酵液样品中,搅拌数&:分钟后液。,,过林,用%#毫升量筒收集%∃毫升滤,≅:将薄液转至#∃毫升三角瓶中用少量水洗,,,#毫升!󰀂“1简洗液合并至三角瓶中小心加入高锰酸钾粉末待反应缓和之后在加热条件下继续加人田静同志提供酮戊二酸比色分析结果