乙醇沉淀法提取葡萄多糖的研究

维普资讯 http://www.cqvip.com ２８　食品工程　２００７年第４期　Ｆ００Ｄ　ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ　１２月出版　乙醇沉淀法提取葡萄多糖的研究　Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｉｔｉｓ　Ｌ．ｐＯＩｙＳａＣＣｈａｒｉｄｅ　ｂｙ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　任平国　徐启红　（漯河职业技术学院，漯河４６２０００）　Ｒｅｎ　Ｐｉｎｇ－ｇｕｏ　Ｘｕ　Ｑｉ－ｈｏｎｇ　（Ｌｕｏｈｅ　ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｃｏｌｌｅｇｙ，Ｌｕｏｈｅ　４６２０００，Ｃｈｉｎａ）　摘要利用乙醇沉淀法提取葡萄多糖。研究表明　胞、提高机体免疫功能，并能够抗肿瘤、抗氧化、　此法提取葡萄多糖的最佳条件为：温度９０　，时　降血脂、降血糖、促进核酸与蛋白质的生物合成，　间２　ｈ，料液体积比ｌ：２．次数为３。在提取液浓　近年来已经引起人们极大的重视。为此，我们对葡　缩至原体积１／ｌ０的基础上用６倍体积的体积浓度　萄多糖的提取丁艺条件进行了探讨，以期为更好地　９５％乙醇进行沉淀。根据最佳提取工艺可使葡萄多　利用葡萄资源提供重要的科学理论依据。　糖的提取率达到９９．９％。　关键词　葡萄多糖　乙醇沉淀提取　１材料与方法　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　Ｖｉｔｉｓ　Ｌ．ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｅｘ－　ｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｌｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｓｈｏｗｓ　１．１材料　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｖｉｔｉｓ　Ｉ　．ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘ—　新鲜葡萄：购自市场，要求颗粒饱满、无腐败　ｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｒｅ－ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｉｓ　９０　，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ　ｉｓ　２　ｈ，　变质。　ｓｏｌｉｄ—ｌｉｑｕｉｄ　ｉｓ　１：２．ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｉｓ　３．ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｃｏｎ＂　１．２试剂与设备　ｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｒｉｇｉｎａｌ　ｖｏｌｕｍｅ　ｔｏ　１／１　０，ｓｉｘ　ｔｉｍｅｓ　葡萄糖标准样品；无水乙醇、氢氧化钠、盐　ｏｆ　ｔｈｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　９５％ｅｔｈａｎｏｌ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　酸、苯酚ｆ重结晶）、硫酸、氯仿、正丁醇等均为分　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｌ’ＯＯＯＳＳ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｖｉｔｉｓ　析纯。　Ｌ．ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｗｉｌｌ　ｂｅ　９９．９％．　ＨＪ一５型多功能搅拌器（常州市华普达教学仪　ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｖ　ｉｔｉｓ　Ｌ．ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　Ｅｔｈａｎｏｌ　ｐｒｅｃｉｐｉ－　器有限公司）、ＤＫ一９８—１Ａ电热恒温水浴锅（上海　ｔａｔｊｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｎ　洪纪仪器设备有限公司）、７２１分光光度计（上海第　分析仪器厂）、ＬＧＩＯ一２．４Ａ高速离心机（北京医　葡萄（Ｖｉｔｉｓ．Ｉ　．）系葡萄科葡萄属植物，是世界性　用离心机厂）、真空恒温干燥箱（ＹＢ—ＩＡ天津生　水果，有“水果皇后”美誉。葡萄中含有多种易于　产）、电子天平。　被人体Ｉ吸收的物质，性味甘、酸、平，人肺、脾、　１．３实验方法　肾经，有补气血，强筋骨，利小便，滋肾宜肝之功　１．３．１葡萄多糖的提取Ｔ艺：　效，对神经衰弱、疲劳过度、消化不良、心悸盗　定量新鲜葡萄去梗、清洗一搅拌、打浆一热水　汗、浮肿也有疗效，因此具有很高的营养及保健价　提取、分离多糖一离心（３　０００　ｒ／ｒａｉｎ，１０　ｍｉｎ　１５．　值。其中富含的多糖是非细胞类物质，对正常细胞　ａｒｉｎ）一乙醇沉淀、洗涤一脱脂、脱蛋白一冷冻干　无毒副作用且具有多种生物活性，能够激活免疫细　燥一粗多糖　任平国，男，１９７３年　生，１９９５在毕业于信阳师范学院生物　上述工艺中水提水温为８５℃，采用石油醚脱　系，讲师　，　脂，脱蛋白则采用Ｓｅｖａｇｅ法。　收稿日期：２００７—１０—１７　维普资讯 http://www.cqvip.com

２ｏｏ７年第４期　１２月出版　任平国，等：乙醇沉淀法提取葡萄多糖的研究　２９　１．３．２葡萄多糖含量的测定　多糖含量用　ｅｄ，糖含量表示，以葡萄糖作为标准　品（用０．９的系数校正），用硫酸一苯酚法测总糖。公　式如下：　多糖提取率＝丽磊　×ｌ（）（）％　２结果与讨论　２．１　乙醇对葡萄多糖提取率的影响　称取４份新鲜葡萄，每份２５０　ｇ。破碎打浆后　在温度为８５　ｑＣ、时间为２．０　ｈ、料液比为体积ｌ：２　的条件下用水浸提多糖。离心后，合并两次提取液，　真空浓缩至原体积的ｌ／ｌ０后分别用２倍、４倍、６　倍、８倍体积浓度９５％乙醇进行沉淀。重复上述操　作２次，将沉淀物干燥称量，计算提取率，以比较　不同体积浓度９５％乙醇溶液用量对葡萄多糖提取率　的影响，结果见图ｌ。　＼　得　甚　乙醇１音数　图１　乙醇用量对葡萄多糖提取率的影响　由图１可知，乙醇用量对葡萄多糖提取率有显　著影响。在较低倍数时，葡萄多糖提取率随乙醇体　积倍数的增加而显著上升，而６倍、８倍的提取率　相差不大。考虑到多糖提取率以及节省乙醇用量、　分离的难易程度等因素，该实验选择用６倍体积的　体积浓度９５％乙醇来沉淀提取葡萄多糖。　２．２料液体积比对葡萄多糖提取率的影响　称取５份新鲜葡萄，每份２５０　ｇ，分别取五种料　液体积比（１：ｌ、ｌ：１．５、ｌ：２、ｌ：２．５、ｌ：３），　浓缩后的提取液用６倍体积浓度９５％的乙醇进行沉　淀并浸提。重复操作２次，将沉淀物干燥称量，计　算提取率，以比较不同料液比对葡萄多糖提取率的　影响，结果如图２所示。　由图２可以看出，料液体积比对葡萄多糖提取　率无显著影响。料液体积比在ｌ：ｌ至ｌ：３之间　＼　谢　料液体积比　图２料液体积比对葡萄多糖提取率的影响　时，葡萄多糖提取率随料液比的增大而缓慢增大。　由于料液体积比较大，会增加真空浓缩的丁作量，　所以以选择１：２的料液体积比为宜。　２．３提取时间对葡萄多糖提取率的影响　称取５份新鲜葡萄，每份２５０　ｇ。采用五个不　同的提取ｔ，１１司（分别为１．０　ｈ、１．５　ｈ、２．０　ｈ、２．５　ｈ、　３．０　ｈ），浓缩后的提取液用６倍体积浓度９５％的　乙醇进行沉淀并浸提。重复操作２次，将沉淀物干　燥称量，计算提取率，以比较不同时间对葡萄多糖　提取率的影响，结果见图３。　＼　蝌　甚　提取时ｎ１Ｊ／ｈ　图３时间对葡萄多糖提取率的影响　由图３看出，浸提时间对葡萄多糖提取率的影　响不显著。葡萄多糖的提取率随时间的延长而有所　增加，但增长的幅度不大，甚至在时间超过２．０　ｈ　后还略有下降。这是由于葡萄多糖在水溶液中溶解　和扩散达到了平衡而使多糖提取率变化趋缓。考虑　到提取率与节约时间及能耗的关系，以２　ｈ的提取　时间比较合适。　２．４提取温度对葡萄多糖提取率的影响　在料液体积ｌ：Ｌ＊ｎ提取时问相同的前提下，采用　５个不同温度（５０　ｑＣ、６０　、７０　、８０　和９０　：）　对葡萄多糖进行提取试验，试验结果见图４。　由图４可知，温度对葡萄多糖提取率有显著的　影响，随着温度的升高，葡萄多糖的提取率逐渐增　大，９０　条件下的提取率是５０　时提取率的近３　倍。在６０　～８０　ｑＣ之间曲线的斜率逐渐增大，而　维普资讯 http://www.cqvip.com

食品工程　２００７年第４期　５・０　４　０　３．０　鬟　．０　１．０　５０　５５　６０　６５　７０　７５　８０　８５　９０　　’温度／℃　图４提取温度对葡萄多糖提取率的影响　后曲线斜率逐渐减小，温度高于９０℃时，多糖提　取率的增加量已不显著且蛋白质已溶出，增加了去　蛋白的难度和工作量，另外升高温度至沸腾在长时　问浸提条件下可能会影响多糖活性，所以浸提温度　不宜过高。而低温浸提虽然对多糖活性影响小，但　是提取率比较低。因此，提取温度定在９０℃较为　合理。　２．５提取次数对葡萄多糖提取率的影响　称取４份新鲜葡萄，每份２５０　ｇ。改变次数为　１次、２次、３次、４次，浓缩后的提取液用６倍体　积浓度９５％的乙醇进行沉淀浸提。重复上述操作２　次，将沉淀物干燥称量，计算得率，以比较不同次　数对葡萄多糖提取率的影响，结果见图５。　２・５　２・０　墓　１．０　０　５　０　１　２　３　４　提取次数　图４提取次数对葡萄多糖提取率的影响　由图５可知，随着浸提次数的增加，多糖得率　也在增加，但是浸提４次时多糖得率不再增加，说　明３次浸提已经将绝大部分葡萄多糖提取出来，因　此确定浸提３次为最佳浸提次数。　２．６葡萄多糖含量的测定　以葡萄糖为标准，采用硫酸一苯酚法，在４９０　ｎｍ　处测定其吸光值（Ａ伽　，求得标准曲线的回归方程　为　ｐ＝９１．０２６×Ａ４９０　一６．０３５０（ｒ＝０．９９９４）　式中：ｐ——表示多糖质量浓度；　１２月出版　Ａ——表示吸光度。　将乙醇沉淀后的葡萄多糖用蒸馏水溶解，按标　准曲线显色测定Ａ伽　值，由回归方程计算含量。　葡萄多糖含量为６．７３　ｇ／１００　ｇ（以葡萄糖计），加样　测定平均回收率为９９．９％。　３结论　通过试验确定的乙醇沉淀法提取葡萄多糖的最　佳条件为：温度９０℃、时间２　ｈ、料液体积比１：２，　次数为３，在提取液浓缩至原体积１／１０的基础上　用６倍体积的体积浓度９５％乙醇进行沉淀。根据　最佳提取工艺可使葡萄多糖的提取率达到９９．９％。　参考文献　１　兰茂．滇南草本（第一卷）［Ｍ］．昆明：云南人民出　版社。１９８３：２６８—２７０．　２　陈明．真菌多糖抗肿瘤研究的进展［Ｊ］．食用茵，　１９９３，１５（６）：４１－４２．　３　松田和雄．抽出液的精制＜多糖的分离精制法＞　［Ｍ］．日本：日本农艺化学会出版中心，１９８７：　３％４５．　４　陈钧辉，陶力，李俊．生物化学实验［Ｍ］．第３版．　北京：科学出版社，２００３．　５　张惟杰．糖复合物生化研究技术［Ｍ］涕２版．杭　州：浙江大学出版社，１９９９：１２—１３．　６　刘文卿．实验设计［Ｍ］．北京：清华大学出版社，　２００５：６４—７６．　７　朱加进．苦菜中可溶性多糖提取工艺研究［Ｊ］．农　业工程学报，２００２，１８（１）：１３８—１４１．