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氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：
氨基酸(Aminoacid，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态，植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。另外，氨基酸还能反映灼伤、伤寒等方面情况。Leagene氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)(AminoAcidAssaykit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下，能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫)，其吸收峰在波长，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比。该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成：
编号名称TC2153100T1ml250ml120ml10.5mlStorage试剂(A):氨基酸标准(50μg/ml)试剂(B):AALysisbuffer试剂(C):茚三酮显色液试剂(D):AAAssaybuffer使用说明书4℃RTRT避光RT1份自备材料：
1、去离子水或无氨蒸馏水2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、离心机5、60%乙醇6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：北京雷根生物技术有限公司www.leagene.com
①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按植物组织：AALysisbuffer按一定的比例加入AALysisbuffer匀浆或研磨，用去离子水稀释，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，保存备用。②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于氨基酸的检测。③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AALysisbuffer进行适当匀浆，离心，留取上清即为氨基酸粗提液，保存备用，用于氨基酸的检测。④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AALysisbuffer进行恰当的稀释。2、配制茚三酮工作液:取适量的茚三酮显色液、AAAssaybuffer，茚三酮显色液：AAAssaybuffer按一定的比例混合，即为茚三酮工作液。避光密闭保存，2周有效。3、配制维生素C工作液:取出1支维生素C，准确溶解于去离子水，混匀。预冷备用。保存1周有效。注意：该试剂盒提供的维生素C及其配制的工作液为过量。4、配制系列氨基酸标准溶液：取出氨基酸标准恢复至室温后，以氨基酸标准按下表继续稀释：加入物(ml)氨基酸标准(50μg/ml)去离子水或无氨蒸馏水含氮量(μg)10.0080.9920.420.0160.9940.830.0240.9961.240.0320.9981.650.040.99625、AA加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的氨基酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。加入物(ml)去离子水或无氨蒸馏水系列氨基酸标准(1-5号管)待测样品茚三酮工作液维生素C工作液空白管0.8——1.20.04标准管—0.8—1.20.04测定管——0.81.20.04混匀，80℃中加热15min，迅速冷却。6、AA测定：当呈现蓝紫色时，补加乙醇，混匀。立即以空白调零，分光光度计(1cm光径比色杯)测定吸光度。计算：
以系列氨基酸标准(1-5号管)含氮量为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲北京雷根生物技术有限公司www.leagene.com
线，根据测定管的吸光度进而计算其含氮量。根据如下公式计算具体样品中氨基态氮的含量：植物组织样品AA(μg/g)=C×VT/(W×VS)式中：C=从标准曲线上查得的氨基态氮含量(μg)VT=样品稀释总体积(ml)=80W=样品鲜重(g)VS=测定时加入样品体积(ml)=0.8血清、尿液等样品AA(μg/ml)=C×N/VS
式中：C=从标准曲线上查得的氨基态氮含量(μg)N=稀释倍数VS=测定时加入样品体积(ml)=0.8注意事项：
1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于4℃。2、氨基酸与茚三酮产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫)在1-1.5h内能保持稳定，故稀释后应尽快检测。3、AAAssaybuffer应密闭保存，防止挥发。4、空气中的氧气有可能干扰显色步骤，但维生素C不易加多，否则导致吸光度人为偏大。5、在80℃水浴中孵育加热，可使显色更为稳定。6、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。7、所测样本的浓度过高，应用AALysisbuffer稀释样品后重新测定。有效期：6个月有效。相关：
编号DF0135NR0001PS0013TO1013名称多聚甲醛溶液(4%PFA)DEPC处理水(0.1%)RIPA裂解液(强)丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)
