一种降血糖龙眼肉多糖的分离纯化方法[发明专利]
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 107987177 A(43)申请公布日 2018.05.04
(21)申请号 201711234594.2(22)申请日 2017.11.30
(71)申请人 广西壮族自治区农业科学院农产品
加工研究所
地址 530007 广西壮族自治区南宁市大学
东路174号(72)发明人 何雪梅 孙健 李丽 李志春
刘国明 郑凤锦 辛明 盛金凤 唐雅园 李昌宝 李杰民 零东宁 周主贵 (74)专利代理机构 北京天奇智新知识产权代理
有限公司 11340
代理人 韦玲双(51)Int.Cl.
C08B 37/00(2006.01)
权利要求书1页 说明书8页
A61P 3/10(2006.01)
(54)发明名称
一种降血糖龙眼肉多糖的分离纯化方法(57)摘要
本发明公开了一种降血糖龙眼肉多糖的分离纯化方法，包括以下步骤：(1)搅拌粉碎；(2)龙眼肉总提取物的制备；(3)萃取；(5)龙眼肉多糖的分离纯化：采用超滤系统装置，将500mL龙眼肉粗多糖溶液分别过分子质量Mr为30kD、10kD、3kD和650D的滤膜，分别得到Mr>30kD、10kD 1/1页 1.一种降血糖龙眼肉多糖的分离纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)搅拌粉碎：采集新鲜的龙眼肉，放入搅拌机中，以3000～5000r/min的速度搅拌15～20min，得到龙眼肉浆液，备用； (2)龙眼肉总提取物的制备：在70～74℃下，用质量分数为70％的乙醇溶液提取龙眼肉浆液3～5h，所用的料液比为1：20，收集提取液，在50℃进行减压浓缩，即得龙眼肉总提取物； (3)萃取：包括石油醚萃取、乙酸乙酯萃取和正丁醇萃取；石油醚萃取：将200mL龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗中，加入400mL石油醚，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为石油醚萃取物； 乙酸乙酯萃取：将上述石油醚萃取后剩余的龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗中，加入400mL乙酸乙酯，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为乙酸乙酯萃取物； 正丁醇萃取：将上述乙酸乙酯萃取后剩余的龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗中，加入400mL正丁醇，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为正丁醇萃取物，剩余的下层为水萃取物； (4)龙眼肉粗多糖的提取：将上述水萃取物加入3倍于水萃取物体积的质量分数为95％的乙醇溶液，搅拌后进行第一次沉降，静置12h，离心去除上清液，得到第一沉淀物，在第一沉淀物中加入沸腾的去离子水进行溶解，再进行过滤并去除不溶物，在上清液中加入3倍体积质量分数为95％的乙醇溶液进行第二次沉降，离心并去除上清液，得到第二沉淀物，在第二沉淀物中加入去离子水，加热溶解，过滤去除不溶物，所得溶液即为龙眼肉粗多糖溶液； (5)龙眼肉多糖的分离纯化：采用超滤系统装置，将500mL龙眼肉粗多糖溶液分别过分子质量Mr为30kD、10kD、3kD和650D的滤膜，分别得到5份分子质量不同的龙眼肉多糖溶液，分别为Mr>30kD的多糖溶液50mL、10kD CN 107987177 A 说 明 书 一种降血糖龙眼肉多糖的分离纯化方法 1/8页 【技术领域】 [0001]本发明涉及植物的提取领域，特别涉及一种降血糖龙眼肉多糖的分离纯化方法。【背景技术】 [0002]龙眼肉是含有极其丰富的维生素C和钾，还含有大量的镁和铜，有补气益血之功效，对于治疗虚劳羸弱、失眠、健忘效果显著。龙眼肉营养丰富，主要成分为糖类龙眼肉的水、氯仿、乙醇提取物均具有显著的降血糖和抗氧化活性。[0003]多糖是由单糖通过糖苷键结合的糖链，广泛分布于植物、动物和微生物中。多糖不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的混合物。近年来，人们认识到多糖不仅是参与构成生命的基本物质，具有作为细胞骨架、传递细胞间信号等功能，更重要的是发现多糖在机体免疫调节、增强抗病毒及抗癌活性、降血糖、清除体内自由基、延缓衰老、美白祛斑等方面具有重要的生物活性和功效。[0004]目前，国内外针对多糖提取工艺的研究多采用传统热水浸提法，提取溶剂单一，且多糖物质难以从植物细胞内释放出来；此外，热水浸提法要求提取时间长，提取温度高，易造成多糖水解，进而降低多糖物质生物活性；再者现行工艺制备的多糖的分子量较为分散和混乱，无法进行针对性的研究。因此，如何高效分离提纯不同分子量的龙眼肉多糖已成为龙眼肉多糖产业化亟需解决的瓶颈问题。 【发明内容】 [0005]本发明目的在于提供一种降血糖龙眼肉多糖的分离纯化方法，该技术先进行搅拌粉碎，使龙眼肉中的组织结构初步破碎，活性物质得到释放；接着制备龙眼肉的总提取物；然后依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对龙眼肉进行提取，得到水萃取物；接着通过二次沉降，制得龙眼肉粗多糖溶液；最后通过超滤系统装置，制取不同分子量的龙眼肉多糖溶液。本发明能够高效分离提纯龙眼肉多糖，并且能够制备不同分子量的龙眼肉多糖，为龙眼肉多糖的进一步发展提供研究基础。[0006]为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种降血糖龙眼肉多糖的分离纯化方法，包括以下步骤：[0007](1)搅拌粉碎：采集新鲜的龙眼肉，放入搅拌机中，以3000～5000r/min的速度搅拌15～20min，得到龙眼肉浆液，备用；[0008](2)龙眼肉总提取物的制备：在70～74℃下，用质量分数为70％的乙醇溶液提取龙眼肉浆液3～5h，所用的料液比为1：20，收集提取液，在50℃进行减压浓缩，即得龙眼肉总提取物；[0009](3)萃取：包括石油醚萃取、乙酸乙酯萃取和正丁醇萃取；[0010]石油醚萃取：将200mL龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗中，加入400mL石油醚，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为石油醚萃取物；[0011]乙酸乙酯萃取：将上述石油醚萃取后剩余的龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗 3 CN 107987177 A 说 明 书 2/8页 中，加入400mL乙酸乙酯，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为乙酸乙酯萃取物；[0012]正丁醇萃取：将上述乙酸乙酯萃取后剩余的龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗中，加入400mL正丁醇，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为正丁醇萃取物，剩余的下层为水萃取物；[0013](4)龙眼肉粗多糖的提取：将上述水萃取物加入3倍于水萃取物体积的质量分数为95％的乙醇溶液，搅拌后进行第一次沉降，静置12h，离心去除上清液，得到第一沉淀物，在第一沉淀物中加入沸腾的去离子水进行溶解，再进行过滤并去除不溶物，在上清液中加入3倍体积质量分数为95％的乙醇溶液进行第二次沉降，离心并去除上清液，得到第二沉淀物，在第二沉淀物中加入去离子水，加热溶解，过滤去除不溶物，所得溶液即为龙眼肉粗多糖溶液；[0014](5)龙眼肉多糖的分离纯化：采用超滤系统装置，将500mL龙眼肉粗多糖溶液分别过分子质量Mr为30kD、10kD、3kD和650D的滤膜，分别得到5份分子质量不同的龙眼肉多糖溶液，分别为Mr>30kD的多糖溶液50mL、10kD 4 CN 107987177 A[0026] 说 明 书 3/8页 乙酸乙酯萃取：将上述石油醚萃取后剩余的龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗 中，加入400mL乙酸乙酯，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为乙酸乙酯萃取物；[0027]正丁醇萃取：将上述乙酸乙酯萃取后剩余的龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗中，加入400mL正丁醇，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为正丁醇萃取物，剩余的下层为水萃取物；[0028](4)龙眼肉粗多糖的提取：将上述水萃取物加入3倍于水萃取物体积的质量分数为95％的乙醇溶液，搅拌后进行第一次沉降，静置12h，离心去除上清液，得到第一沉淀物，在第一沉淀物中加入沸腾的去离子水进行溶解，再进行过滤并去除不溶物，在上清液中加入3倍体积质量分数为95％的乙醇溶液进行第二次沉降，离心并去除上清液，得到第二沉淀物，在第二沉淀物中加入去离子水，加热溶解，过滤去除不溶物，所得溶液即为龙眼肉粗多糖溶液；[0029](5)龙眼肉多糖的分离纯化：采用超滤系统装置，将500mL龙眼肉粗多糖溶液分别过分子质量Mr为30kD、10kD、3kD和650D的滤膜，分别得到5份分子质量不同的龙眼肉多糖溶液，分别为Mr>30kD的多糖溶液50mL、10kD CN 107987177 A 说 明 书 4/8页 溶液150mL、650D 6 CN 107987177 A 说 明 书 5/8页 中，加入400mL正丁醇，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为正丁醇萃取物，剩余的下层为水萃取物；[0058](4)龙眼肉粗多糖的提取：将上述水萃取物加入3倍于水萃取物体积的质量分数为95％的乙醇溶液，搅拌后进行第一次沉降，静置12h，离心去除上清液，得到第一沉淀物，在第一沉淀物中加入沸腾的去离子水进行溶解，再进行过滤并去除不溶物，在上清液中加入3倍体积质量分数为95％的乙醇溶液进行第二次沉降，离心并去除上清液，得到第二沉淀物，在第二沉淀物中加入去离子水，加热溶解，过滤去除不溶物，所得溶液即为龙眼肉粗多糖溶液；[0059](5)龙眼肉多糖的分离纯化：采用超滤系统装置，将500mL龙眼肉粗多糖溶液分别过分子质量Mr为30kD、10kD、3kD和650D的滤膜，分别得到5份分子质量不同的龙眼肉多糖溶液，分别为Mr>30kD的多糖溶液50mL、10kD CN 107987177 A[0071] 说 明 书 6/8页 一种降血糖龙眼肉多糖的分离纯化方法，包括以下步骤： [0072](1)搅拌粉碎：采集新鲜的龙眼肉，放入搅拌机中，以5000r/min的速度搅拌20min，得到龙眼肉浆液，备用；[0073](2)龙眼肉总提取物的制备：在74℃下，用质量分数为70％的乙醇溶液提取龙眼肉浆液5h，所用的料液比为1：20，收集提取液，在50℃进行减压浓缩，即得龙眼肉总提取物；[0074](3)萃取：包括石油醚萃取、乙酸乙酯萃取和正丁醇萃取；[0075]石油醚萃取：将200mL龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗中，加入400mL石油醚，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为石油醚萃取物；[0076]乙酸乙酯萃取：将上述石油醚萃取后剩余的龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗中，加入400mL乙酸乙酯，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为乙酸乙酯萃取物；[0077]正丁醇萃取：将上述乙酸乙酯萃取后剩余的龙眼肉总提取物转入1000mL分液漏斗中，加入400mL正丁醇，振摇，静置，待溶液完全分层后，上层溶液即为正丁醇萃取物，剩余的下层为水萃取物；[0078](4)龙眼肉粗多糖的提取：将上述水萃取物加入3倍于水萃取物体积的质量分数为95％的乙醇溶液，搅拌后进行第一次沉降，静置12h，离心去除上清液，得到第一沉淀物，在第一沉淀物中加入沸腾的去离子水进行溶解，再进行过滤并去除不溶物，在上清液中加入3倍体积质量分数为95％的乙醇溶液进行第二次沉降，离心并去除上清液，得到第二沉淀物，在第二沉淀物中加入去离子水，加热溶解，过滤去除不溶物，所得溶液即为龙眼肉粗多糖溶液；[0079](5)龙眼肉多糖的分离纯化：采用超滤系统装置，将500mL龙眼肉粗多糖溶液分别过分子质量Mr为30kD、10kD、3kD和650D的滤膜，分别得到5份分子质量不同的龙眼肉多糖溶液，分别为Mr>30kD的多糖溶液50mL、10kD [0082]表1： 8 CN 107987177 A[0083] 说 明 书 7/8页 [0084][0085] 表2： 样品IC50/ug·mL-1总提取物1559.7石油醚萃取物2236.2乙酸乙酯萃取物1827.7正丁醇萃取物1345.8水萃取物705.2阿卡波糖(阳性对照)677.4[0086]IC50值越小，其降血糖能力越强。从表2可以看出，龙眼肉总提取物和各萃取物均具有一定的降血糖活性，其中水萃取物的体外降血糖活性最高，IC50值仅为705.2，远小于其他萃取物，接近阳性对照阿卡波糖的IC50值。这一结果说明龙眼肉中的降血糖有效成分可能为多糖类物质。 [0087]对比试验2： [0088]体外降血糖活性评价：检测龙眼肉粗多糖和不同分子量的龙眼肉多糖的体外降血糖活性，具体检测方法参考对比试验1，具体检测结果见表3。[0089]表3： [0090] 9 CN 107987177 A[0091] 说 明 书 8/8页 从表3结果可知，不同分子量的龙眼肉多糖溶液其体外抑制α-葡萄糖苷酶活性的 能力不同，且具有一定的规律，即基本随着分子量的增大，多糖溶液对α-葡萄糖苷酶抑制活性也逐渐增大，当10kD 10 因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容