药物筛选——HMG-COA还原酶抑制剂的筛选小论文
摘要：HMG-CoA还原酶抑制剂的有三种筛选方法，分别是紫外吸收光谱法，同位素标记法，酶联免疫法。
关键词：药物筛选、HMG-CoA、筛选方法 背景介绍：
HMG-CoA 还原酶即3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme A reductase, HMGR）。
在结构上是个由4条链组成 。每条链467氨基酸，包含α 螺旋16个，β折叠14个的四聚物。
在动物与人体中，HMG-COA还原酶是肝细胞合成胆固醇过程中的限速酶，催化生成甲羟戊酸，抑制HMG-COA还原酶能阻碍胆固醇生成。
如图所示，HMG-CoA还原酶在甲基二羟戊酸途径发挥作用，是合成胆固醇的限速酶，催化合成甲基二羟戊酸，并生成体内多种代谢产物。
根据HMG-COA还原酶作用机制而研制出的上市药物——他汀类药物（staitins）。 他汀类药物（staitins），是，主要用于降脂，广泛应用于高脂血症的治疗。 药物筛选方法：
我们目前了解的主要方法有三种：紫外吸收光谱法，同位素标记法，酶联免疫法。
HMG-CoA还原酶抑制剂抑制HMG-CoA还原酶活性，通过这三种方法可以测得HMG-CoA还原酶活性，以此了解HMG-CoA还原酶抑制剂的作用效果。 其中，紫外吸收光谱法是根据反应： HMGR
（MVA为甲羟戊酸），NADPH在340nm处有紫外吸收，NADP+ 无吸收。
当HMG-COA的活性增强时，反应体系中NADPH浓度减少，NADP+浓度上升，同时，以340nm紫外波长测定，会发现平衡时紫外吸收度减小。反之，HMG-COA的活性降低，平衡时紫外吸收度则增大。
紫外吸收检测器的工作原理是Lambert-Beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动
HMG-CoA+2NADPH+2HMVA2NADPCoASH相不吸收光，则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。物理上测得物质的透光率，然后取负对数得到吸收度。
下图所示是一张试剂盒做的一个实验例子，
同位素标记法根据反应：
(MVA是甲羟戊酸)
反应后，用分离柱分离得到MVA，测定其放射性。
根据同位素示踪我们可以检测到，原本在HMG-CoA中的C14射线强度减弱，而在分离得到的MVA中射线强度增强。同时，C14浓度和射线强度成正比。 （由于C14的射线能量较低，可用液体闪烁计数器测量。） 所以，MVA放射性越强，抑制剂的活性越强。 酶联免疫法根据同样的反应：
测HMG-CoA的剩余量。
测定方法是，包被单抗的微孔中加入含HMG-CoA溶液，HMG-CoA与HRP（辣根过氧化物酶）标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）显色。TMB在HRP的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和HMG-CoA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，通过标准曲线计算HMG-CoA浓度 参考文献：
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