维普资讯 http://www.cqvip.com 上海医学２００２年第２５卷第９期 ５８７ ・临床研究・ 慢性阻塞性肺部疾病急性发作期弹性蛋白酶和０ｔ１－抗胰蛋白酶的变化 杨文兰 蔡映云 揭志军 高蓓兰 本研究测定慢性阻塞性肺部疾病（ＣＯＰＤ）急性发作期 患者血清和痰中 抗胰蛋白酶（ ＡＴ）含量及活性、弹性 蛋白酶（ＮＥ）、白介素＿８（ＩＩ 一８）和肿瘤坏死因子一ａ（ＴＮＦ—ａ）含 量，探讨蛋白酶一抗蛋白酶失衡与ＣＯＰＤ急性发作的关系。 对象与方法 ＥＬＩＳＡ法，根据试剂盒操作说明书步骤进行测定。 （四）统计学处理各组数据以２ｒ±Ｓ表示。应用ＳＰＳＳ 统计软件对结果进行处理。 结 一果 、ＣＯＰＤ急性发作入院时，血清中蛋白酶一抗蛋白酶 一、对象 测定 （一）ＣＯＰＤ组 ２６例患者均为住院治疗的Ｃ０ＰＤ急 性发作期患者。男２１例，女５例，年龄４６～７２岁。因咳 嗽、咳痰、气促、胸闷等症状加重而人院，均符合ＣＯＰＤ诊断 标准…。入院后经积极抗感染、祛痰和解痉平喘治疗，根 据病情变化，将患者分为好转和恶化两组。 １．Ｃ０ＰＤ好转组：２１例，男１７例，女４例。患者经治 疗后症状好转，动脉血气较治疗前改善，胸片示炎症病灶吸 收消散。 ２．Ｃ０ＰＤ恶化组：５例，男４例，女１例。患者临床症 状加重，动脉血气较前恶化，胸片示病灶无吸收或增多。３ 例经机械通气治疗后获救，２例死亡。 （二）健康对照组２６例均为健康体检者，无吸烟史， ＣＯＰＤ急性发作期患者入院时血清中ａ．一ＡＴ的含量较 健康对照组增高，活性较健康对照组降低；ＮＥ、ＩＬ一８及 ＴＮＦ—ｎ的含量均较健康对照组增高（表１）。 表１ ＣＯＰＤ急性发作期患者与健康对照组血清测定指标 的比较（ ±Ｓ） 无慢性疾病史，近３个月内无急性呼吸道感染。男１７例， 女９例，年龄３５～５５岁。 二、方法 二、ＣＯＰＤ好转组和恶化组治疗前、后血清测定指标的 比较 恶化组入院时血清中ａ。一ＡＴ含量较好转组高，而活性 （一）血标本的收集和处理 分别取健康体检者和 ＣＯＰＤ患者入院时及治疗后血清２ ｍ１，一７０℃保存。 （二）痰标本的收集和处理 用无菌干燥痰瓶收集 ＣＯＰＤ患者清晨漱口后咳出的新鲜痰液，加入等量的０．１％ 二硫苏糖醇（ＤＴＴ）溶液，涡旋振荡混匀后置３７℃水浴１５ 较好转组低；恶化组血清中ＮＥ、ＩＬ一８和ＴＮＦ—ａ等含量均较 好转组高。治疗后上述差异进一步增大（表２）。 与入院时相比，好转组在治疗后血清中ａ 一ＡＴ含量下 ｍｉｎ，水浴期间间断取出进一步涡旋振荡，使样本充分混匀， 水浴后取出标本，８００转／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，吸取上清液， 降（Ｐ＜０．０５）， ＡＴ活性有降低，但差异无显著性，ＮＥ、 ＩＬ＿８和ＴＮＦ—ａ等含量均有降低（Ｐ均＜０．叭）。 ７０℃保存。 （三）测定方法 ①血清中ａ．一ＡＴ含量的测定：采用速 与入院时相比，恶化组在治疗后血清中ａ 一ＡＴ含量增 高（Ｐ＜０．叭），而活性进一步降低（Ｐ＜０．０５），ＮＥ、ＩＬ一８和 ＴＮＦ—Ｑ含量均增高（分别为Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１和Ｐ＜ ０．０１）。 率散射比浊法，用美国ＢＥＣＫＭＡＮ公司的ＡＲＲＡＹ ３．６型 全自动特定蛋白伪物分析系统进行测定。②血清和痰中 ａｌ—ＡＴ活性的测定：按Ｄｉｅｔｚ法进行测定，利用ａ．一ＡＴ能抑 制胰蛋白酶水解发色底物ＢＡＰＮＡ（Ｎ一苯甲酰一ＤＬ一精氨酸对 硝基苯胺盐酸盐）的原理，建立测定ａ．一ＡＴ生物活性的方 三、ＣＯＰＤ好转组和恶化组治疗前、后痰液中测定指标 的比较 入院时恶化组痰液中ａ．一ＡＴ活性较好转组低（Ｐ＜ ０．０１），而ＮＥ、ＩＬ一８和ＴＮＦ—ａ含量均较好转组高（分别为Ｐ ＜０、０１、Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）（表３）。 法。③血清和痰中ＮＥ、ＩＬ一８和ＴＮＦ ａ含量测定：应用 作者单位：２００４３３ 上海市肺科医院（杨文兰、高蓓兰）；复旦 大学附属中山医院（蔡映云、揭志军） 与入院时相比，好转组在治疗后痰液中乜ｒＡＴ活性降 低（Ｐ＜ｏ．０５），ＮＥ、ＩＬ一８和ＴＮＦ—ａ含量也降低（分别为Ｐ＜ 维普资讯 http://www.cqvip.com ・５８８・ Ｓｈａｎｕｈａｉ Ｍｅｄ Ｊ．２００２．Ｖｏｌ ２５．Ｎｏ ９ 表２ ＣＯＰＤ好转组与恶化组治疗前、后血清中测定指标的比较（ ± ） ０．０５．Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）。 极治疗后，好转组ＮＥ含量和ａ．一ＡＴ活性均降低，而恶化组 ＮＥ含量增高，ａ 一ＡＴ活性反而降低，提示ＣＯＰＥ）患者血清 中ａｌ—ＡＴ、ＮＥ的变化可提示病情的预后。经过治疗，ＮＥ含 与入院时相比恶化组在治疗后痰液中ａＩ－ＡＴ活性降低 （Ｐ＜０．０５），ＮＥ、ＩＬ一８和ＴＮＦ—ａ含量均增高（分别为Ｐ＜ ０．０５、Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０１）。 讨 论 量增高而ａ ＡＴ活性降低表明疗效不佳。 ＣＯＰＤ急性发作期ＩＬ一８及ＴＮＦ—ａ也明显增高。研究 发现，患者血清及痰液中ＩＬ一８均较健康对照组高，恶化组 蛋白酶一抗蛋白酶失衡是ＣＯＰＤ的重要发病机制之一。 本研究发现，ＣＯＰＤ急性发作期患者血清中ＮＥ和ａ．一ＡＴ含 量较正常组高，但ａ．一ＡＴ活性较正常组低。体内几乎所有 显著升高。有关实验研究发现，在ＣＯＰＤ缓解期，痰液中 ＩＬ。８的含量与一秒钟用力呼气量／最大肺活量（ＦＥＶ１／ ＦＶＣ）呈明显负相关，痰液中ＩＬ。８的变化可反映气道炎症 的严重程度［４ｊ。ＴＮＦ—ａ的变化与ＩＬ。８相似。 蛋白酶一抗蛋白酶失衡在ＣＯＰＤ的发生及发展中起重 的ａ。一ＡＴ均由肝脏产生，在下呼吸道，ａ。一ＡＴ是对白细胞弹 性蛋白酶作用最强的抑制剂，正常情况下，下呼吸道中讪一 ＡＴ活性足以对抗肺内ＮＥ的负荷。调节ａ．一ＡＴ释放的机 制并不十分明确。在创伤、毒素和感染等因素的强烈刺激 下，ａ．一ＡＴ作为一种急性时相蛋白释放入血，在ＣＯＰＤ患者 中，脂多糖、ＩＬ一１、ＴＮＦ、ＩＬ一６及ＮＥ 一ＡＴ等可能在增加ａ】一 ＡＴ产生中起作用。而在气道炎症的局部，ａ 一ＡＴ含量的增 加还与局部血管通透性增高有关ｌ２ Ｊ。 ａ．一ＡＴ的活性部位蛋氨酸残基可迅速而特异性地抑制 ＮＥ的作用，但其活性部位极易被中性粒细胞释放的金属蛋 白酶及细菌释放的弹性蛋白酶破坏。故ＣＯＰＤ发作期患者 尽管ａ．一ＡＴ含量增加，但活性反而减低。而且在ＣＯＰＤ急 要作用。研究中发现，虽然在急性期ａ 一ＡＴ含量增高，但其 活性明显下降。可否通过补充外源性ａ 一ＡＴ恢复蛋白酶一 抗蛋白酶平衡，进而减轻炎症反应对肺组织的破坏、改善预 后，尚有待进一步研究。 参 考 文 献 １慢性阻塞性肺疾病（ＣＯＰＤ）诊治规范（草案）．中华结核和呼吸 杂志，１９９７，２０：１９９—２０３． ２ Ｖｉｇｎｏｌａ ＡＭ，Ｂｏｎａｎｎｏ Ａ，Ｍｉｒａｂｅｌｌａ Ａ．ｅｔ ａｌ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｅｌａｓｔａｓｅ ａｎｄ ａ１一ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｉｎ ｓｐｕｔｕｍ ｏｆ ａｓｔｈｍａｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９８．１５７：５０５ ５１１． 性发作期，痰液中中性粒细胞明显升高，即使在感染控制 后，中性粒细胞仍较正常时明显增高，使肺内的ＮＥ负荷明 显升高。抗胰蛋白酶含量的增高已远远不能抑制ＮＥ对肺 组织的破坏，使ｎ．一ＡＴ对肺的保护作用明显下降，引起肺组 织损伤 Ｊ。 研究还发现，恶化组患者在入院时血清中ａ．一ＡＴ和ＮＥ 含量较好转组明显为高，而ａｌ—ＡＴ活性则明显为低。经积 ３ Ｐｉｃｃｉｏｎｉ ＰＤ．Ｋｒａｍｐｓ ＪＡ，Ｒｕｄｏｌｐｈｕｓ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｐｒ０ｔｅｉｎａｓｅ／ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｍｂａｌａｎｃｅ ｉｎ ｓｐｕｔｕｍ ｓｏｌ ｐｈａｓｅｓ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｈｅｓｔ，ｌ９９２，１０２：１４７０—１４７６． ４ Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｃ，Ｙｏｎｅｄａ Ｔ．Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｍ．ｅｔ ａ１．Ａｉｒｗａｙ ｉｎｆｌａｍｍａ— ｔｉｏｎ ｉｎ ＣｏＰＤ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ ｓｐｕｔｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一８．Ｃｈｅｓｔ． １９９７．１１２：５０５—５１０． （收稿日期：２００１ ０６—２６） （本文编辑：唐清蓉）
