・３１Ｏ・ 中国地方病防治杂志２０１５年８月第３０卷第４期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｔｒｌ Ｅｎｄｅｍ Ｄｉｓ Ｖｏ１．３０ Ｎｏ．４ ２０１５ 艾拉莫德对类风湿关节炎患者ＣＤ３＋Ｔ细胞ＩＦＮ一 及细胞因子ＩＬ－６调节作用的研究 王梦涛 ，倪丹红 ，王晓元 ，曹团平 ，刘丹 １．西安市第五医院检验科，陕西７１００８２；２．兰州大学第Ｚ－Ｎ院风湿免疫科 中图分类号：Ｒ ６８４．３ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００１—１８８９（２０１５）０４—０３１０—０２ 类风湿性关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）是一 种累及多关节的自身免疫性疾病，以Ｔ淋巴细胞，特 别是辅助Ｔ淋巴亚群Ｔｈｌ介导为免疫系统功能紊乱的 疾病，同时有Ｔｈｌ７／Ｔｒｅｇ细胞、ＮＫ细胞、Ｂ细胞及自身 抗原及多种细胞因子等参与其发生发展。艾拉莫德 （Ｉｇｕｒａｔｉｍｏｄ，Ｔ－６１４）是一种新型抗风湿小分子药物， 控制病情效果佳，但其机制尚不明确。本研究通过检 测Ｔ－６１４干预对ＲＡ的ＣＤ３＋Ｔ细胞ＩＦＮ—ｒ细胞表达、 ＩＬ－６细胞因子水平变化，探讨ＲＡ治疗的免疫机制。 １材料和方法 １．１研究对象选择２０１３年１０月－２０１４年２月在 西安市第五医院就诊的ＲＡ活动期患者１０例，其中男 性１例，女性９例，年龄２５～５５岁，病程３月～１０年， 均符合１９８７年ＡＣＲ的ＲＡ诊断标准，且未使用过Ｔ一 ６１４治疗。 １．２ 主要试剂和仪器 人淋巴细胞分离液，ＲＰＭＩ １６４０培养基、胎牛血清，Ｈｕｍａｎ ＩＬ一８ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ＥＬＩＳＡ试剂盒，艾拉莫德由先声药业公司惠赠，ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ流式细胞仪产自美国Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司，酶 标仪为美国ＢｉｏＴｅｋ公司。 １．３ 方法 １．３．１ Ｔ－６１４（先声药业公司惠赠）每片为２５ｍｇ，粉 碎后，溶解在ＤＭＳＯ中，震荡２０ｒａｉｎ后，过筛网，配置成 ｌＯｍｇ／ｍｌ，分装ＥＰ管中，细胞培养应用ＤＭＥＭ液稀释 １０倍使用微孔过滤器过滤分装使用。 １．３．２细胞分组处理患者静脉血１０ｍｌ入肝素抗凝 管中，采用密度梯度分离法，分离ＰＢＭＣ后，用ＲＰＭＩ １６４０培养液（含１０％的胎牛血清）调整细胞数至２× １０ ／ｍｌ，接种于２４孔培养板，每孔１ｍｌ细胞混悬液， ５％ＣＯ２培养箱孵育。设空白对照组（无药物干预），Ｔ 一６１４高剂量组（５０ｍｇ／ｍ１）、低剂量组（５￣ｇ／ｍ１）共培养 ２４ｈ，染色进行ＣＤ３＋Ｔ细胞ＩＦＮ一 表达检测及收集上 基金项目：陕西省卫生科研项目（２０１５Ｄ２５） 作者简介：王梦涛，男，本科，主管检验师，从事临床检验工作。 通讯作者：刘丹，Ｅ—ｍａｉｌ：ＬＤ６６６６６６＠１２６．ｃｏｍ 清检测ＩＬ一６水平。 １．３．３流式细胞仪检测ＣＤ３＋Ｔ细胞ＩＦＮ一 阳性表达 水平孵育２４ｈ的细胞悬液，洗涤，加入人ＣＤ３一ＡＰＣ 染色剂，破膜后洗涤２次。ＩＦＮ一 ＦＩＴＣ染色，多聚甲 醛固定，上机检测，流式细胞仪检测ＣＤ３＋Ｔ细胞ＩＦＮ－ 表达阳性百分数及荧光强度。 １．３．４ ＥＬＩＳＡ检’狈０ ＩＬ－６水平根据Ｈｕｍａｎ ＩＬ一６ Ｉｍ— ｍｕｎｏａｓｓａｙ ＥＬＩＳＡ试剂盒的说明书进行操作，绘制标准 曲线。计算出样品中ＩＬ一６的含量。 １．４统计学处理采用ＳＰＳＳ １８．０统计软件进行分 析，剂量资料以ｘ±ｓ表示，组间比较使用单因素方差 分析，多重比较采用ＳＮＫ－ｑ检验，检验水准为０．０５。 ２ 结果 ２．１ ＣＤ３＋Ｔ细胞ＩＦＮ一 检测Ｔ一６１４与ＰＢＭＣ细胞 共孵育２４ｈ，通过流式细胞仪检测ＣＤ３＋Ｔ细胞分泌 ＩＦＮ一＾ｙ表达，Ｔ一６１４高剂量和低剂量组与对照组明显 减低，Ｐ＜０．０５，见表１。 表１ 培养２４ｈ各组ＣＤ３＋Ｔ细胞ＩＦＮ一 阳性表达的比较 （元±ｓ％） ２．２ 细胞培养上清液检测 ＥＬＩＳＡ检测上清ＩＬ一６水 平，Ｔ一６１４高、低剂量组与对照组比较，ＩＬ一６水平明显 减低，Ｐ＜０．０５，见表２。 表２共培养２４ｈ上清各组ＩＬ一６结果的比较（ｘ± ） （下转至３１２页） 中国地方病防治杂志２０１５年８月第３Ｏ卷第４期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｔｒｌ Ｅｎｄｅｍ Ｄｉｓ Ｖｏ１．３０ Ｎｏ．４ ２０１５ ３讨论 病毒与广泛的抗菌作用，与鞣质能使接触部位迅速止 血，脂肪酸及其酶有镇痛、镇静作用。所以木贼草有良 慢性宫颈炎与宫颈癌关系密切，是诱发宫颈癌的 高危因素之一，高危型ＨＰＶ持续感染是宫颈癌和癌前 病变发生的必要条件，故积极治疗宫颈炎合并持续性 高危型ＨＰＶ感染，对与预防宫颈癌的发生具有重要意 好的抗菌，抗病毒，止血，镇痛，提升白细胞，提高机体 免疫力的作用，本研究结果表明：聚焦超声治疗宫颈炎 合并持续性高危ＨＰＶ感染联合使用木贼草膏中，聚焦 超声破坏了病变的细胞及组织，破坏了病毒所在的环 境，并能加快局部代谢功能，促进组织再生。木贼草的 收敛，止血及抗菌作用能有效减少它在治疗后的渗出 义，ＨＰＶ感染后机体的细胞免疫，体液免疫均降低，不 能有效清除病毒，造成其持续感染状态。临床用来尝 试清除ＨＰＶ的方法很多，如：奥平栓，抗病毒液胶，保 及出血，也降低了因渗出，出血引起感染的可能，同时 抑制病毒合成和生长，木贼草的镇痛作用可减轻患者 在聚焦超声治疗后引起的不适感，所以聚焦超声与木 贼草是相互作用，促进了宫颈炎的修复及高危ＨＰＶ的 清除，在临床治疗中值得大力推广。 参考文献 ［１］董志伟．中国癌症筛查及早诊早治指南（试行）［Ｍ］．北京：北京 大学医学出版社，２００５，４７—５４． 妇康等，目前干扰素常用于宫颈ＣＩＮ及ＨＰＶ感染的治 疗较为常见 Ｊ，其作用机理是提高身体疾病及抑制病 毒的合成，但治疗效果均不理想。 聚焦超声作为无创治疗的新技术，单次治疗宫颈 糜烂的总有效率达到９４．７％，对于伴ＨＰＶ感染的 ＣＩＮ，一次治愈率达到９３．３％Ｅ ３ ３。本次治疗采用聚焦 超声治疗的联合组，超声组对宫颈ＨＰＶ感染的转阴率 均较药物组明显增加，聚焦超声治疗后６个月ＨＰＶ转 阴率可达到８０％，明显高于自然转阴率，研究表明，聚 ［２］ Ｓｉｋｏｒｓｋｉ Ｍ，Ｉｒｕｂｅｋ Ｈ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ（ＣＩＮ）ａｓｓｏｃｉａ ｔｅｄ ｗｉｔｈ 焦超声具有提高机体免疫功能和清除病毒生存环境的 双重作用。木贼草膏含木贼草，其性甘、苦平微寒，无 毒。现代药理学研究证明其化学成分有尤问荆碱，阿 魏碱、咖啡酸、鞣质、脂肪酸等，尤问荆碱、阿魏碱可干 扰病毒ＲＮＡ合成，抑制病毒生长；咖啡酸在体外有抗 （上接第３１０页） ３讨论 一ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ（ＨＰＶ）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ＥＵＲＪ Ｇｙｎａｅｃｏｌ ｏｎｃｏ［Ｊ］． ２００３，２４（２）：１４７—１５０． ［３］周小良，付蓉花，向爱清，等．聚焦超声用于轻度宫颈上皮女瘤变 治疗临床研究［Ｊ］．实用临床医学，２００９，１０（３）：７２—７４． 收稿日期：２０１５—０２—０８ 责任编辑：许卫东 ６由Ｔｈ２细胞及ＡＰＣ产生，ＩＬ－６具有增强树突细胞 （ＤＣ）处理抗原能力，暴露并呈递隐匿性（ｃｒｙｐｔｉｃ）抗原 决定表位，诱发免疫炎症反应。本组研究发现Ｔ－６１４ 具有减低ＰＢＭＣ细胞ＩＬ－６分泌水平减低的作用，提示 具有Ｔｈ２细胞作用。由此，Ｔ－６１４在ＲＡ的免疫 ＲＡ目前采用改善病情抗风湿药（ＤＭＡＲＤｓ）如甲 氨蝶呤、来氟米特等具有一定疗效，但存在较多的不良 反应和耐药等情况，而生物制剂治疗成本较高，故不作 为首选用药。艾拉莫德（Ｔ一６１４）为新型的口服的小分 子ＤＭＡＲＤｓ药物，在ＲＡ疾病中的治疗作用越来越受 到重视 ， 。 ＲＡ患者自身淋巴细胞过度增生激活，Ｔｈｌ／Ｔｈ２分 化平衡被打破，多种细胞因子分泌到血清及关节中，激 活Ｂ细胞分泌免疫球蛋白，造成ＲＡ的多系统、器官损 害。而动物模型研究表明，Ｔ－６１４可以减轻Ｔｈｌ／Ｔｈ２ 作用，可能为了Ｔｈｌ细胞分化、Ｔｈ２分泌作用，而 Ｔｈｌ／Ｔｈ２失衡，最终达到减轻临床症状，改善病 情的作用。 上述研究结果提示，Ｔ－６１４治疗ＲＡ的免疫抑制 可能为活动期ＲＡ患者Ｔｈ１／Ｔｈ２失衡，同时降低 了细胞因子ＩＬ－６水平，而达到控制病情的作用。 参考文献 ［１］刘丹，陈妤，丁汉飞，等．艾拉莫德（Ｔ一６１４）在类风湿关节炎基础 实验与ｌ临床疗效的研究进展［Ｊ］．中国新药杂志，２０１３，２２（９）： １０５２－１０５５． 介导的免疫疾病的病情进展，抑制免疫球蛋白产 生 。Ｔ细胞分泌的ＩＦＮ—ｒ具有广泛的免疫调节作 用，能活化ＮＫ细胞，提高其杀伤能力，提高ＭＨＣＩＩ 类分子的抗原提呈能力，增强免疫细胞的杀伤能力和 吞噬能力。本研究检测Ｔ－６１４干预ＲＡ的ＣＤ３＋Ｔ细 胞分泌ＩＦＮ—ｒ表达减少，从而减轻诱导疾病加重的全 ［２］ Ｍｕｃｋｅ Ｈ．Ａ．Ｍ．Ｉｇｕｒａｔｉｍｏｄ：ａ ｎｅｗ ｄｉｓｅａｓｅ—ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｄｒｕｇ．Ｄｒｕｇｓ ｏｆ Ｔｏｄａｙ ２０１２，４８（９）：５７７—５８６． ［３］Ａｉｋａｗａ Ｙ，Ｔａｎｕｍａ Ｎ，Ｋｏｊｉｍａ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｎｅｗ ａｎｔｉ——ｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｄｒｕｇ Ｔ—。６１４ ｏｎ ＴＨ１ ａｎｄ ＴＨ２ Ｔ ｃｅｌｌ—‘ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｕｔｏ— 身及关节局部炎症反应，改变了病程，减少骨质破坏， 与临床疗效相符，故提示Ｔ－６１４对ＲＡ的治疗作用是 通过抑制ＣＤ３＋Ｔ细胞分泌ＩＦＮ－ｙ来实现的。另外，ＩＬ ｉｍｍｕｎｅ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ １９９６，３９（Ｓｕｐｐ１．）：Ｓ１２６． 收稿日期：２０１４—１０—１５ 责任编辑：许卫东
