实用医药杂志２０１３年Ｏ２月第３０卷第０２期Ｐｒａｃ Ｊ Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｍ．Ｖｏｌ ３０．２０１３—０２ Ｎｏ．０２ ・１５５・ 药 学 国内北虫草人工培养现状及其化学成分分析 于燕莉，梁爱君，黄贤荣 ［关键词】北虫草；人工培养；化学成分 【中图分类号】Ｒ２８５．１ 【文献标识码】Ｂ 佳发酵工艺参数：初始ｐＨ值为７，５００ ｍｌ三角瓶中培养基装 液量１００ ｍｌ，接种量６％，温度２８℃，周期为９６ｈ。赵明文得 出的优化培养基配方为：玉米粉４％。黄豆粉０．６％．酵母粉 北虫草Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ（Ｌ－ｅｘ Ｆｒ．）Ｌｉｎｋ来源于子囊菌 亚门（Ａｓｃｏ ｍｙｃｏｔｉｎａ）核菌纲（ｐｙｒｅｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）球壳目 （Ｓｐｈａｅｒｉｎｌｅｓ）麦角菌科（ｃｌａｖｉｔｉｃｐｉｔａｃｅａｅ）虫草属（Ｃｏｅｄｙｃｅｐｓ） 真菌，常寄生在鳞翅目和鞘翅目等昆虫蛹体上，也可利用家 蚕和柞蚕蛹人工批量培育，其药效、药理与冬虫夏草极为相 似。主要分布在我国东北、华北、西北等地区，华中、华南和西 南地区也有发现。冬虫夏草是中国三大补品之一，具有增强 免疫功能、抗肿瘤、抗菌消炎、抗衰老等药效作用。而北虫草 主要药用成分为虫草素、腺苷等，其含量远高于冬虫夏草，且 比冬虫夏草更易于人工栽培，因此被选为冬虫夏草的最佳替 代品而进行人工培育。我国２０世纪９０年代以来，对作为药 食两用品的北虫草进行了药化、药理、毒理等系统研究，证明 人工栽培北虫草无不良反应，且具有明显的镇静、抗疲劳、抗 肿瘤、抑制癌细胞和促使雄性激素分泌等作用。可增强机体 免疫功能，作为药品和食品使用，对人体健康安全可靠。 １北虫草的人工培养 ｌ。１ 固体栽培 １９８６年吉林省蚕业研究所以家蚕和柞蚕为 寄主培养蛹虫草成功获得子实体。后来蛹虫草先后在柞蚕和 桑蚕活蛹、家蚕、蓖麻蚕蛹以及樗蚕蛹为寄主在室内种植蛹 虫草成功。随后瓶栽蛹虫草成功，并提出子座的色泽与光线 强弱有关。随着发展。蛹虫草菌可以直接在培养基上，并长出 子座，并且可以直接液体培养菌丝体。目前生产上普遍采用 常规试管母种或固体原种栽培蛹虫草。蛹虫草子实体发生率 低，且生长不整齐，产量极低，甚至有的难以长出正常子实 体。后来有人发现人工蛹虫草培育成功的关键在于诱发子实 体原基的形成，认为温差刺激对子实体原基形成的效果较 好。 １．２液体培养天然的蛹虫草资源非常稀少，相对人工固 体栽培周期长，且条件控制困难。然而通过液体深层培养法 获得虫草菌丝体的化学组成与从天然采集的虫草的化学组 成接近，并且可以从发酵液中获得人们所需的物质，还能大 大缩短生产周期。邵爱娟等研究得出虫草菌丝的最适生长 温度为２０～２５℃。在进行菌丝发酵时碳源以蛋白胨为最优， 采用１：２或１：３的碳氮比较为合适。李宗军等正交实验表 明，发酵最佳培养基组成是：５％大米粉、豆饼粉、１．５％麦芽 粉、０．Ｉ％ＫＨ２ＰＯ４，０．０５％ＭｇＳ０４．７Ｈ２０。李信等得出影响蛹虫 草菌胞外多糖产量的实验因子显著性大小的排列顺序为： 甜菜糖＞酵母浸出粉＞ＫＮＯ３＞ＭｇＳＯ４・Ｈ２０＞ＦｅＳＯ４。胞外多糖最 【基金项目】山东省科技发展计划项目（编号：２０１０ＧＳＦ１０２７７） ［作者单位】２５００３１山东济南，济南军区总医院药剂科（于燕莉，黄 贤荣）；１０００７１北京，中国人民总后勤部卫生部药品仪器检 验所（梁爱君） ０＿３％，Ｋ２ＨＰＯ４０．０５％，ＭｇＳ０４０．０５％，接种量０－３％，ｐＨ５．５。认为 碳源因子对胞外多糖的产生影响显著。陈晋安等得出蛹虫草 发酵的适宜培养基组成为：蔗糖５．０％，玉米浆３．０％，酵母膏 ０．５％，Ｍ ｇｓＯ４・７Ｈ２０ ０．０５％，Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０５％，认为蔗糖为碳源 最好，以酵母膏为氮源，菌体产量最高。李烨研究认为蛹虫草 菌丝的生长可以利用多种碳源和氮源．在以红糖碳源、奶粉 为氮源的液体培养基中生长最佳。且碳源／氮源合适＿的比例 为２．Ｏ～２．５１１．０，适宜ｐＨ５．０～６．５。汪宇等以发酵得率为指标优 化培养基成分确定为蛋白胨１．５％，Ｍｇｓ０４ ｏ．０５％，Ｋ２ＨＰＯ ０．１５％，ＶＢ１５ ｍｅＣＬ，２，４一Ｄ ２ ｍｇ／Ｌ。在相同条件下，优化培养 基比原来培养基的发酵得率提高了４．５％，研究初步得到蛹 虫草液体培养条件和生长动力学。为工业化生产提供了一定 的理论依据。刘祝等研究最好的培养基配比可将该菌株的虫 草素含量提高到１．２１％，比用Ｃｚａｐｅｋ培养基提高８．１倍。柴 建萍等通过实验得出玉米粉为最优碳源，蚕蛹粉为最优氮 源，ＭｇＳＯ 为最优无机盐。液体发酵最佳培养基配方为：玉米 粉（０．０２ ｇ／ｍ１），蚕蛹粉（０．００５ ｇ／ｍ１），硫酸镁（０．０００５ ｅｄｍ１）。 ２化学成分 ２．１核苷类北虫草中主要含腺苷、鸟苷、尿苷，此外还有 虫草素、腺嘌呤和尿嘧啶。其中虫草素最早于１９５１年由加拿 大的Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ从北虫草中提纯得到。虫草素是一种核苷 类抗生素，对葡萄球菌、链球菌、鼻疽杆菌、炭疽杆菌、猪出血 性败血症杆菌等均有抑制作用，具有广谱的抗菌活性，有抑 制肿瘤、抗病毒、免疫调节和抑制ｍＲＮＡ翻译的作用。其中 治疗白血病已进入Ⅱ期临床试验。腺苷是虫草素的直接前 体，本身也具有很好的生理活性，有文献报道，腺苷是蛹虫草 中的活性成分之一．具有减少心肌漏出酶，维持细胞膜的完 整性并能降低冠状动脉阻力，可以改善心脑血液循环、防止 心律失常、抑制神经递质释放和调节腺苷酸环化酶活性等。 在心肌缺血缺氧时对心肌有一定的保护作用，而且可有效而 选择性地降低肺动脉压。腺苷已被用作冬虫夏草的质控指 标。鸟苷对防治生殖器复发性疱疹有较好的疗效。 ２．２多糖类１９７７年，宫崎等报道了一种水溶性冬虫夏草 多糖。是一种高度分支的半乳糖甘露聚糖，具有抗菌抗炎的 作用，虫草多糖还具有促进ＳＯＤ酶的作用。主链为由 （１— ２）糖苷键连接的Ｄ一呋喃甘露聚糖，支链含（１—３）、（１—５）和 （１—６）糖苷键连接的Ｄ２呋喃半乳糖基以及（１叫）键连接 的Ｄ一呋喃半乳糖基，非还原性末端均为Ｄ一呋喃半乳糖和吡 喃甘露糖。 ・１５６・ 实用医药杂志２０１３年Ｏ２月第３０卷第０２期Ｐｒａｃ Ｊ Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｒｎ．Ｖ０１ ３０，２０１３—０２ Ｎｏ．０２ ２Ｉ３ 虫草酸 虫草酸（ｃｏｒｄｙｃｅｐｉｃ ａｃｉｄ）是奎宁酸的异构 物，即Ｄ一甘露醇。为虫草类真菌中的主要有效成分之一。具 种酶具有清除新陈代谢中产生的超氧阴离子自由基的能力， 在维护机体活性氧代谢的平衡中起重要作用。在预防各种疾 有利尿脱水、提高血浆渗透压、镇喘祛痰、抗自由基等药理作 用。并且对多种疾病有一定的疗效。研究表明虫草中甘露醇 病及抗衰老防御物质中ＳＯＤ是最重要的关键酶（目前为止 发现的唯一的以自由基为底物的酶）。如抗红斑狼疮、类风 湿、皮肌炎、防辐射、抗癌，并有抗衰老和美容肌肤的作用。近 含量主要与其产地、寄主及生长期等因素有关。 ２．４甾醇类北虫草中甾醇类成分主要是麦角甾醇，另外 还有Ｂ一谷甾醇。麦角甾醇是真菌类的特征甾醇，在虫草中含 量相对恒定．通常作为质量控制指标之一。是一种重要的维 生素Ｄ：原，具有抗癌、防衰、减毒等功能，其是虫草中最主要 的一种甾醇，揭示了冬虫夏草菌丝体的水平。麦角甾醇以两 种形式存在，即游离麦角甾醇和酯化麦角甾醇，各自具有不 同的生理功能。姜泓等从人工蛹虫草的干燥子实体中的乙醇 提取物中分离得到７个化合物，其中１－６化合物为核苷类， 第７个麦角甾醇过氧化物（ｅｒｇｏｓｔｅｒｏｌ ｅｒｏｘｉｄｅ，７）为甾醇类。 ２．５氨基酸类虫草中含有丰富的蛋白质和氨基酸。据实 年来，ＳＯＤ得到广泛的研究，其成果已在医药、食品、化妆品、 生物农药等领域得到广泛应用。 ２．７微量元素对北虫草和冬虫夏草中镍、钙、铁、铜、锰、 锌、钾、钴、铬进行了比较，结果表明，两者的各微量元素含量 有一定差异，但基本在同一数量级上。 总之，天然冬虫夏草来源稀少，对生长环境要求苛刻，所 以人工培育北虫草已经成为热点。现在比较成熟的人工培育 方法有两种：一种是液体发酵获得菌丝：另一种为固体培养 基上获得子座。虽然北虫草的人工培养已进入产业化阶段， 但生产中仍存在着一定的难题．如在栽培过程中。出现子实 体细小、分叉、中空以及不出草、出草少等；栽培技术普通人 验表明：在野生蛹虫草中含有的氨基酸．在人工培育蛹虫草 中几乎都含有．并且在以蚕蛹为培养基质生长的蛹虫草中氨 基酸总量及人体必需的八种氨基酸总量均高于野生型及其 它人工培育型的蛹虫草。蛹虫草粗蛋白含量在３Ｏ％左右。氨 基酸总量达到２２％，蛹虫草菌丝体和子座都含有１７种氨基 员不易掌握，北虫草菌种的退化等，严重影响北虫草的产量 和质量 目前，因为长期无性繁殖及多次转管的菌种，其母种容 易退化，所以急待摸索出一种有效的防止菌种退化的方法。 北虫草中主要成分与天然虫草虽然相似。但是否天然虫草的 主要药理作用是由虫草素、虫草酸等发挥作用．还是几种成 分协同作用的结果。北虫草能否真正成为天然冬虫夏草的理 想替代品，仍需进一步深入研究。 『２０１２—０４—１９收稿，２０１２—０５—２０修回１ ｆ本文编辑：韩仲琪１ 酸，除组氨酸外，其余ｌ７种氨基酸均含有：天冬氨酸、苏氨 酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨 酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精 氨酸、色氨酸。其氨基酸总量和天然冬虫夏草接近，略高于天 然虫草。 ２．６ ＳＯＤ（超氧化物歧化酶）它是一种生物活性蛋白质．这 药 学 济南军区医疗机构制剂室年检存在的问题及对策 刘忠良。陈瑶 【关键词】制剂室；情况分析；发展对策 【中图分类号】Ｒ９５ 【文献标识码】Ｂ ｌ存在问题 医疗机构制剂是医疗机构根据临床需要．经过监管部门 批准配制的自用制剂，是医药市场不能满足而临床用药不可 或缺的制剂，是医疗机构药学工作的重要组成部分。为保障 官兵和人民群众用药安全，适应国家和药品安全管理的 新形势和新要求，根据总后卫生部和军区联勤部卫生部通知 要求．结合全军药品抽验工作，对战区内医疗机构制剂室进 行了年度检查。总的来说，这次制剂室年度检查是２０１０年制 通过这次检查，发现战区医疗机构制剂工作仍存在一些 困难和问题．一定程度上影响和制约了制剂工作又好又快发 展，主要表现在以下几个方面： １．１ 质量意识淡薄如有的医疗机构质量把关不严，制剂 室部分洁净室洁净级别不符合要求。主要原因是有的医院未 完全安装净化设施。或高效过滤器自安装后没有及时保养和 更换，或管道改装后留有漏洞；制剂室部分仪器设备没有定 剂室换证验收后进行的第一次，各医疗机构制剂室能够严格 按照《医疗机构制剂管理办法》和《医疗机构制剂许 可证验收标准》及细则等规定，规范医疗机构自制制剂配制 管理，制剂室硬件条件得到较大改善，软件管理更加规范，制 剂整体水平上了一个新的台阶，保证了医疗机构自制制 剂用药的安全、有效、质量可控ＩｌＪ。但仍存在一定的不足。 【作者单位】２５００２２山东济南，济南军区联勤部药品仪器检验所（刘 忠良，陈瑶） 期计量检定．超过计量周期仍在使用，主要原因是一味等待 军区计量站进行检定，本院没有能力检定，也没有主动请当 地地方计量部门进行检定：有的制剂室未对制剂的微生物限 度进行批批检验就用于临床：还有的制剂室没有定期对洁净 室尘埃粒数进行检测报告。这些必会影响制剂的质量安全。 １．２人才技术力量有待加强科学发展观的核心是以人为 本，没有人什么事情也办不成，没有人才就做不好工作。制剂
