第４５卷第５期 ２０１５年５月 温州医科大学学报 Ｖｂｌ＿４５ ＮＯ．５ Ｍａｙ。２０１５ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ■ ＣＤ８２介导的人类甲状腺癌细胞株ＦＴＣ．１ ３３的 生物学特性 陈周浔 ，周宏众 ，Ｈｅｎｎｉｎｇ Ｄｒａｌｌｅ ，Ｃｕｏｎｇ Ｈｏａｎｇ．Ｖｕ （１．温州医科大学附属第一医院 胃肠外科，浙江 温州 ３２５０１５；２．德国Ｍａｒｔｉｎ．Ｌｕｔｈｅｒ．Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈａｌｌｅ－Ｗｉｔｔｅｎｂｅｒｇ普通、内脏、血管外科中心外科，外科肿瘤与实验研究组，德国哈雷０６１０２） ［摘要］目的：探讨肿瘤转移抑制因子ＣＤ８２在人甲状腺癌细胞侵润和迁移中的作用以及发挥作用的 相关分子机制。方法：采用基因工程技术，将含ＣＤ８２全长基因的ｐＣＤＮＡ３．ｉ质粒用于细胞转染，构建过表达 ＣＤ８２基因的ＦＴＣ．１３３细胞株，并将其与野型ＦＴＣ．１３３细胞株进行生物性状比对。利用ＭＴＴ法及Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ细 胞迁移实验检测ＣＤ８２对ＦＴＣ．１３３细胞侵润和迁移能力的影响。结果：与野生型或者空质粒转染细胞相比， 各转染细胞（ｃｌｏｎｅ １、２、３）在转染后２４、４８及７２ ｈ的增殖率减少（Ｐ＞０．０５）；与野生型或者空质粒转染 细胞相比，各转染细胞（ｃｌｏｎｅ １、２、３）在转染后２４、４８及７２ ｈ的迁移能力明显减少（Ｐ＜０．０５）。结论： ＣＤ８２可以明显降低ＦＴＣ．１３３细胞的增殖及侵袭能力，与甲状腺癌发展与进程密切相关。 ［关键词］ 肿瘤转移抑制因子；ＣＤ８２；侵润；迁移；甲状腺肿瘤；ＦＴＣ．１３３ ［中图分类号］Ｒ１３５．１ ［文献标志码］Ａ ＤＯｈ １０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．２０９５．９４００．２０１５．０５．００７ １ｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＣＤ８２ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｔｈｙｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＦＴＣ－１３３ ｃｅｌｌｓ ＣＨＥＮ Ｚｈｏｕｘｕｎｉ．ＺＨＯＵＨｏｎｇｚｈｏｎｇ￣Ｈｅｎｎｉｎｇ Ｄｒａｌｌｅ ．Ｃｕｏｎｇ Ｈｏａｎｇ－Ｖｕ ．１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ， ．ｔｈｅ ＦｉｒｓｔＡｆｉｌｆｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ ｆＷｅｎｚｈｏｕ ｏＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｎｚｈｏｕ，３２５０１５；２Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｇｒｏｕｐ ｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎ— ｔａｌ ａｎｄ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｆ ｏＧｅｎｅｒａｌ，Ｖｉｓｃｅｒａｌ ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｍａｒｔｉｎ Ｌｕｔｈｅｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙ ｔＨａｌｌｅ—Ｗｉｔｔｅｎｂｅｒｇ，Ｄ－０６０９７Ｈａｌｌｅ．Ｇｅｒｍａｎｙ，０６１０２ 墨匝＿Ｏｂｊｅｃｉｔｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ ＣＤ８２ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｔｙｒｏｉｄ ｃａｒ－ ｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ／ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ ｐｌａｓｍｉｄ ｐＣＤＮＡ３．１，ｗｈｉｃｈ ｒｅｃｏｎｓｔｕｒｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ＣＤ８２ ｇｅｎｅ，ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｔｈｙｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＦＴＣ一１ ３３ ｃｅｌｌｓ．Ｂｙ ＭＴＴ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ Ａｓｓａｙｓ，ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆｔｈｅｓｅ ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＣＤ８２ ＦＴＣ一１３３ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｈｅ ｔｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｃｅｌｌｓ ＦＴＣ－１３３ ｃｅｌｌｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：２４， ４８，７２ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ｓｈｏｗｅｄ ｒｅｄｕｃｅｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ（Ｐ＞０．０５）ａｎｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｌｏｗｅｒ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｙ（ｔＰ＜０．０５）ｉｎ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｈ ｔｈｅｔ ｗｉｌｄ－ｙｔｐｅ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｏｃｋ ｃｅｌｌｓ（ｔｒａｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｈ ｔｅｍｐｔｙ ｐｌａｓｍｉｄ）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅ ｈａｔｔ ＣＤ８２ ｃａｎ ｒｅｄｕｃｅ ＦＴＣ一１ ３３ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ， ＣＤ８２ ｉｓ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｙｔｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． 墨墨墨墨ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ；ＣＤ８２；ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ；ｍｉｒｇａｔｉｏｎ；ｔｈｒｙｏｉｄ ｃｒａｃｉｎｏｍａ；ＦＴＣ．１３３ 浙江省２００７—２０１１年甲状腺癌报告发病率为 ８．３７／１０万；甲状腺癌的病死率为０．３４／ｌｏ万。温州 沿海地区是本病的高发区，２００７—２０１ １年甲状腺癌 患者在诊断时，就被发现体内癌细胞发生了局部转 移或者远处转移，９０％的转移发生在术后５年内并伴 有不理想的预后。甲状腺癌临床早期诊断的方法十 发病率每年以２９．９５％的速度呈快速上升趋势ｕ Ｊ。目 前认为，甲状腺癌的发生是肿瘤性甲状腺细胞发生 转移进而引起具有不完全特性的连续基因序列异常 的结果。尽管现在对甲状腺肿瘤有大量新的认识， 甲状腺癌的去分化线性模型仍未被完全识别。很多 收稿日期：２０１５－０２－０６ 分有限，同时存在治疗过度的现象，使得许多甲状 腺良性病变患者遭受不必要的手术创伤。因此，临 床上需要探索更为敏感可靠的诊断方法或肿瘤标志 物以便做出早期诊断。目前已知甲状腺癌的特异蛋 白相对较少，需要寻找更多与病变相关的特异蛋白 质，并探讨其在甲状腺癌中的作用及其机制。ＣＤ８２ 在内的ＴＭ４超家族由超过２Ｏ余种依附在细胞表面的 基金项目：温州市科技局科研基金资助项目（２０１４Ｙ０１９５）。 作者简介：陈周浔（１９７４一），男，浙江温州人，主治医师，博士后。 一糖蛋白组成，其成员在细胞信号传导、迁移、增殖 ３４６— 第４５卷 陈周浔，等：ＣＤ８２介导的人类甲状腺癌细胞株ＦＴＣ．１３３的生物学特性 第５期 以及在肿瘤转移形成的过程中起到重要的作用。目 前可确定ＣＤ８２在许多肿瘤的发生发展及转移中有重 要作用，关于ＣＤ８２在甲状腺癌细胞中的意义及相关 环节的因子及机制的研究，本研究组最早进行 可先离心后弃去培养液，小心用ＰＢＳ冲洗２～３遍后， 再加入含ＭＴＴ的培养液。每孔加入１５０ Ｌ二甲基亚 砜，置摇床上低速振荡１０ ｍｉｎ，使结晶物充分溶解。 在酶联免疫检测仪ＯＤ ４９０ ｎｍ处测量各孔的吸光值。 设置调零孔（培养基、ＭＴＴ、二甲基亚砜）和对照孔 （细胞、相同浓度的药物溶解递质、培养液、ＭＴＴ、 二甲基亚砜）。 １．４细胞迁移实验采用Ｃｏｒｎｉｎｇ公司８ ｍ孔径的 过详细报道＿２Ｊ，本研究意在通过稳定转染手段提高 甲状腺滤泡样癌细胞ＦＴＣ—ｌ３３的内源性ＣＤ８２，将转 染细胞与野型细胞做全面生物学性状比较，旨在调 查ＣＤ８２与甲状腺癌去分化、侵袭及转移潜力的相关 性。 聚碳酯膜Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室（２４孔板）。在Ｔｒａｎｓｗｅｌ１ 小室的下室中预先加入６００ Ｌ ２０％ＦＣＳ的１６４０培养 １材料和方法 ｉ．１ 基因重组及转染运用ｐＣＤＮＡ３．１质粒进行构 基，３７。Ｃ平衡１ ｈ，将细胞用ＰＢＳ洗３次。胰酶消化 后重悬于含１０％的ＤＭＥＭ Ｈａｍ’Ｓ（１：１）培养基中，取 １ Ｘ １０ ／ｍＬ细胞１００儿加入至Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上室。分别 建带人类全长ＣＤ８２．ｃＤＮＡ序列的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ． ＣＤ８２。ＣＤ８２完整ｃＤＮＡ编码序列（引物序列Ｆｏｒｗａｒｄ： ５’一ＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＴＧＧＡＣＧＡ一３’，Ｒｅｖｅｒｓｅ：５’一ＧＣＡＣＴＧＧＴ 在３７。Ｃ、５％ｃＯ，条件下培养２４ ｈ。取出Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ 小室，从上室用棉棒擦净未穿透微孔滤膜的细胞。 ＰＢＳ冲洗后用４％甲醛固定，行Ｇｉｅｍｓａ染色在２００倍 ＴＴＣＧＴＧＧＡＡＧＧＡ一３’）在一种真核表达载体ｐＣＤＮＡ３．ｉ内 （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司提供）被亚克隆。脂质体２０００（由 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，加州，卡尔斯巴德），Ｇｅｎｅｔｅｃｉｎ （Ｇ４１８抗体，ＧＩＢｃｏ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）用于转染与筛选。 Ｇｅｎｅｔｅｃｉｎ实验３周后，获得在６孔板中进行培养 的存活细胞。挑取单个抗性细胞克隆在Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ （Ｇ４１８）下常规培养扩增，得到高表达ＣＤ８２的甲状腺 癌细胞克隆。 １．２ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法参照《分子克隆》中 显微镜下计数滤膜下表面的细胞数，随机计数５个 视野中的细胞数目，每个标本重复３次。以迁移细 胞的数目（取实验平均值）来表示细胞的迁移能力。 １．５统计学处理方法采用ＳＰＳＳ １３．Ｏ统计软件进 行统计学处理。数据以ｉ±Ｓ表示，样本采用ｔ 检验，实验组间比较采用单因素分析。ＪＤ＜０．０５为 差异有统计学意义。 ２结果 的实验方法，以Ｂ—ａｃｔｉｎ的水平作为等量蛋白质样 本的内对照，每个标本至少重复３次进行ＳＤＳ．ＰＡＧＥ 电泳，并转至纤维素膜上，室温封闭２ ｈ后，用 ＴＢＳＴ缓冲液漂洗３次，再加入抗人抗体，４。Ｃ孵育 ２．１ ＦＴＣ一１３３稳定转染下的ＣＤ８２过度表达通过使 用ＲＴ—ＰＣＲ实验、蛋白质印迹实验分析在细胞株ＦＴＣ一 １３３上的ＣＤ８２转染是否成功。筛选后３个月，我们 分离了细胞内的总ｍＲＮＡ并采用ＲＴ—ＰＣＲ证实表达。如 图１中转染细胞克隆１（ｃｌｏｎｅ１）、克隆２（ｃｌｏｎｅ２）、 克隆３（Ｃｌｏｎｅ３）所示，各克隆ＣＤ８２ ｍＲＮＡ表达水 平如图２所示，结果证实：转染细胞内ＣＤ８２ ｍＲＮＡ （ｃｌｏｎｅｌ、ｃｌｏｎｅ２、ｃｌｏｎｅｓ）相比野生型ＦＴＣ．１３３（ＷＴ） 过夜。ＴＢＳＴ缓冲液漂洗３次后加入辣根过氧化物酶 标记的羊抗兔ＩｇＧ－－－抗，室温摇床孵育Ｉ ｈ，增强化 学发光系统显色，暗室内ｘ线底片感光成像。 １．３细胞增殖实验（ＭＴＴ）收集对数期细胞，调 整细胞悬液浓度，每孔加入１００ Ｌ，铺板使待测细 胞调密度至１ ｏ０Ｏ～１０ ０００孔，（边缘孔用无菌ＰＢＳ填 充）。５％ｃｏ，，３７。Ｃ孵育，至细胞单层铺满孔底（９６ 孔平底板），５％ｃｏ，以及３７。Ｃ孵育１６￣４８ ｈ，倒置 显微镜下观察。每￣ＬＤＩ］入２Ｏ，ｕＬ ＭＴＴ溶液（５ ｍｇ／ｍＬ， 即０．５％ＭＴＴ），继续培养。若药物与ＭＴＴ能够反应， 以及空载质粒转染细胞（ｍｏｃｋ）表达明显。转染筛 选后３个月，我们分离提纯备细胞的蛋白，并实施 蛋白质印迹实验，各克隆ＣＤ８２蛋白质表达水平如 图２所示，结果证实：转染细胞内ＣＤ８２（Ｃｌｏｎｅ１、 ｃｌｏｎｅ２、ｃｌｏｎｅ３）蛋白质相ＢＬＷＴ以及ｍｏｃｋ表达明显。 ●■■－●■＿＿ ｍｏｃｋ ｃｌｏｎｅ１ ｃｌｏｎｅ２ ｃｌｏｎｅ３＋ ＷＴ ｍｏｃｋ ｃｌｏｎｅ１ ｃｌｏｎｅ２ ｃｌｏｎｅ３ ４１． ＋：阳性对照（人类扁桃体组织） 图１ 各细胞株的ＣＤ８２ ＲＴ＿ＰｃＲ转录结果 一３４７— 第４５卷 温州医科大学学报 Ｃ馓：４６ｋＤａ 性。细胞间的紧密接触处也正是ＣＤ８２强表达位点（图 中白色箭头所指）。 ２．３ 高表达的ＣＤ８２对细胞增殖率的影响ＭＴＴ测 试用于对比野生型ＦＴＣ．１３３与ＣＤ８２转染ＦＴＣ一１３３的 增殖率。图４所示为ＣＤ８２转染细胞在转染后的２４、 ［１４ｃｔｉｎ：４２ｋｏ． Ｖ盯ｄ啊 ｃｌｏ￣ｏ２ ｃＩ啊＇－３ ｍＯｄ‘ 图２ 各细胞株的ＣＩ）８２蛋白质印迹实验 ２．２ 免疫荧光实验ＣＤ８２蛋白在细胞内外表达分 布如图３所示：在ＣＤ８２转染克隆ＦＴＣ一１３３细胞的细 胞膜与细胞质，ＣＤ８２的免疫荧光染色显示为强反应； ４８、７２ ｈ与ｗＴ及ｍｏｃｋ进行对比监控，可见各转染克 隆细胞增殖率减少，但此差异并无统计学意义（Ｐ＞ ０．０５）。 野生型ＦＴＣ．１３３的ＣＤ８２免疫反应呈弱阳性或者呈阴 ＷＴ Ａ ６ Ｃｄ８２的免疫阳性反应（红色所示）：细胞间的紧密接触处为ＣＤ８２阳性高表达（白色箭头所指）；蓝染色：ＤＡＰＩ染色的细胞核；△：野生型ＦＴＣ．１３３的ＣＤ８２免疫荧 光反应 图３ 免疫荧光实验观察ＣＤ８２蛋白在细胞内外表达分布（Ｘ ２００） 时间点（２４、４８、７２ ｈ）的ＣＤ８２高表达ＦＴＣ．１３３细胞 相比ｗＴ及ｍｏｋｅ的侵润和迁移能力均明显受到抑制， 且各组差异均有统计学意义（Ｊｐ＜０．０５）。 ３讨论 Ｗ１ － ｃｋｍ１ ｒｈ静 ｆｂｎｅ ３ 图４ ＭＴＴ法测定各细胞的增殖率 在以前的课题研究工作中，我们调查了ＣＤ８２在 甲状腺组织中的表达并分析了肿瘤患者病程中的预 后指标意义及肿瘤转移的趋势。除了根据组织学和 肿瘤发展阶段所规定的肿瘤特性外，每位患者的完 整病史也可以说明一些相关的预后指征。将表达的 结果进行统计学处理和比较，并分析其变化与各项 ２．４ 高表达ＣＤ８２明显抑制细胞的侵润和迁移能力 使用改良ｆｌ４ＪＴｒａｎｓ￣ｒｅｌ１小室法，来对比野生型ＦＴＣ一 １ ３３．￣ｍ胞与ＣＤ８２￣染细胞的细胞运动迁及侵袭能力。 结果（见图５）显示，过表达ＣＤ８２以后，转染后的各 临床病理学指标的关系，结果显示ＣＤ８２在所有良性 甲状腺肿组织中均呈高表达状态，而在无转移性原 发甲状腺癌中只有部分呈高或中度表达（转录水平 为６６．７％；蛋白水平为５８．０％），在转移性原发癌组 织中呈弱或无表达。ＣＤ８２的表达与肿瘤区域淋巴结 转移（Ｎ）、远处转移（Ｍ），以及与分化型甲状腺癌 （ＦＴＣ、ＰＴＣ）肿瘤分期呈密切相关，且差异均具有统 计学意义（尸＜０．０５或尸＜０．００１）。而与患者年龄、 一３４８— 第４５卷 陈周浔，等：ＣＤ８２介导的人类甲状腺癌细胞株ＦＴＣ．１３３的生物学特性 第５期 性别、癌肿大小（Ｔ）则无显著相关性Ｌ２Ｊ。基于此结果， 我们想进一步在细胞模型中对ＣＤ８２进行功能研究。 ＣＤ８２也可称为ＫＡ１１，ＩＡ４，Ｃ３３或者Ｒ２，位于人 类染色体１Ｉｐｌ１．２［３Ｊ。ＣＤ８２是种糖基质，属于Ｉ］Ｉ型跨 胞外基质的分布情况，其黏附能力抑或与胞外基质 中的各种黏附因子，如黏合素以及金属蛋白酶等分 子有关。ＣＤ８２在细胞侵润的下游信号和机制应该和 ＭＭＰｓ的表达相关１１９－２０１，ＭＭＰｓ在降解细胞外基质促 进细胞运动中发挥重要作用。在ＭＭＰ家族的众多成 膜蛋白，并含有２种不同的细胞外环，较大的循环包 含３种Ｎ－糖基化位点。Ｎ一和Ｃ．Ｔｅｒｍｉｎｕｓ定位于细胞质 中［４Ｊ。ＣＤ８２在细胞膜上的结构与特殊位置使其在细 胞信号传导方面的作用非常关键，并可能细胞 的生长、分化、细胞间黏合及运动ｌ５－７Ｊ。ＣＤ８２可与 很多细胞膜表面分子结合，如ＴＭ４的其他成员、黏 合素因子以及部分在细胞外基质黏合过程中充当重 要成分的人类淋巴细胞抗原成分Ｌ８－９Ｊ。ＣＤ８２可以与 整合素和其他的家族成员相互作用细胞间的黏 员中，ＭＭＰ一２和ＭＭＰ一９在细胞侵润过程中是被研究最 多且发挥最大作用的因子。有报道称ＭＭＰ．９活性受 到抑制是通过ＴＩＭＰ一１的表达上调造成的，而且这一 过程抑制了肿瘤的侵润［２１ Ｊ。综合本研究结果，我 们认为检￣ＣＤ８２可作为甲状腺癌转移潜能的指标， 是其恶性转变的重要促进因素，从而进一步证实 ＣＤ８２在甲状腺癌的发生、发展中发挥重要作用。本 研究组预备下一步运用蛋白质组学研究方法，利用 各种功能蛋白质的分子量及等电点差异，分离纯化、 分析目标蛋白质，筛选、分离、鉴定，从蛋白质功 能层面调查受ＣＤ８２影响的各主要相关功能因子。 附与转导。它们形成的复合物可以介导细胞间的信 号通路广泛的细胞的增殖、激活和运动【 Ｊ。 按黏附分子的结构特点可将其分为以下４类：①黏 合素家族的黏附分子；②免疫球蛋白超家族的黏附 分子；③凝集素家族；④钙离子依赖的细胞黏附素 家族的黏附分子，或称Ｃａｄｈｅｒｉｎ。ＴＭ４与黏合素家 族成员之间的相互作用非常密切［１４－１５Ｊ。黏合素是 一参考文献： ［１】 龚巍巍，胡如英，罗胜兰，等．浙江省２００７—２０１ １年甲状腺 癌发病及死亡特征分析［Ｊ】．浙江预防医学，２０１４，２６（５）： ４３３－４３７． 种黏合蛋白，具有调节细胞基质之间、细胞与细 胞之间的相互作用。依赖于黏合素的细胞间的相互 ［２］ Ｃｈｅｎ Ｚ，Ｍｕｓｔａｆａ Ｔｒｏｊａｎｏｗｉｃｚ Ｂ，ｅｔ ａ１．ＣＤ８２，ａｎｄ ＣＤ６３ ｉｎ ｔｈｙｒｏｉｄ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ，２００４，ｌ４（４）：５１７—５２７． ［３】Ｄｏｎｇ ＪＴ，Ｌａｍｂ ＰＷ，Ｒｉｎｋｅｒ－Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ ＣＷ，ｅｔ ａ１．ＫＡＩ１，ａ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｏｎ ｈｕｍａｎ 黏合是基于细胞信号传导和细胞骨架重组的整合。 ＰＫＣ—ＴＭ４ＳＦ黏合素结构有可能指示一种新型的信号 复合体的产生。在耦合分子ＴＭ４ＳＦ蛋白质影响下， ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １ｌｐｌ１．２［Ｊ】．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，２６８（５２１２）：８８４— ８８６． ＰＫＣ与特定的黏合素相互绑定。这种绑定很可能发 生于ＴＭ４ＳＦ蛋白质的大环状结构功能区与黏合素的 “跟踪区”之间，而ＰＫｃ则与存在于细胞等离子一区 和二区之间的ＴＭ４ＳＦ蛋白质，或者细胞等离子端的 ＴＭ４ＳＦ蛋白质绑定。这就是说，黏合素的黏合功能 是受ＴＭ４ＳＦ蛋白质，而且黏合素与ＴＭ４ＳＦ的绑 定也由于这种交叉作用在细胞表面趋于稳定Ｌ３ 引。 另有报道称这种新型的信号复合体存在于正常细 胞中，在肿瘤组织中无法被检测出来。黏合素包含 了细胞内信号级联，黏着斑激素酶（ＦＡＫ）的络氨酸 磷酸化并参与了对钙阳离子的［１７Ｊ。基于目前 对ＴＭ４ＳＦ与黏合素相互作用的研究，ＴＭ４ＳＦ蛋白质在 ＦＡＫ络氨酸磷酸化过程中，在调节细胞以及重组细 【４】 Ｍａｚｕｒｏｖ Ｄ，Ｈｅｉｄｅｃｋｅｒ Ｇ，Ｄｅｒｓｅ Ｄ．Ｔｈｅ ｉｎｎｅｒ ｌｏｏｐ ｏｆ ｔｅｔ－ ｒａｓｐａｎｉｎｓ ＣＤ８２ ａｎｄ ＣＤ８ １ ｍｅ￣ａｔｅｓ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｈ ｔｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｈｉｃ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ Ｇａｇ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００７，２８２（６）：３８９６—９０３． 【５］Ｔａｎｇ Ｃｈｅｎｇ Ｍａｒｔｉｎｋａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ Ｏｆ ＫＡＩ１／ＣＤ８２ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｅｌｌ ｍｉ－ ｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｈｅ ｔｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ １ＮＧ４［Ｊ］．Ｃａｒ－ ｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２０１４，３５（１）：８６—９５． 【６】 Ｌ ＷＭ，Ｚｈａｎｇ Ｆ，Ｍｏｓｈｉａｃｈ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ ＣＤ８２ ｉｎ－ ｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｔｒｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｅｌｌ ｍｏｖｅｍｅｎｔ ｂｙ ａｔｔｅｎｕ・ ａｔｉｎｇ ｈｅｔ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒｎｅａ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｃｔｉｎ ｏｒｇａｎｉｚａｉｔｏｎ［Ｊ］． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１２，７（１２）：ｅ５１７９７． ［７】 Ｙｏｕ Ｊ，Ｍａｄｉｇａｎ ＭＣ，Ｒｏｗｅ Ａ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｍｖｅ￣ｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ＫＡＩ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｖｅ ａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ ＭＭＰ－２ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｕｒｏｌ Ｏｎｃｏｌ，２０１２，３０（４）：５０２－５０８． 胞骨架内的肌动蛋白（也包括转移与非转移）的过 程中起到决定性作用Ｄｓ］。通过体外构建外植体培 养模型，我们的结果进一步证实了调高内源性ＣＤ８２ 将会显著地抑制甲状腺癌细胞的增殖与迁移能力， 【８］ Ｚｈａｎｇ ＸＡ，Ｂｏｎｔｒａｇｅｒ ＡＬ，Ｈｅｍｌｅｒ ＭＥ．Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ一４ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ（ＰＫＣ）ａｎｄ ｌｉｎｋ ＰＫＣ ｔｏ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｂｅｔａ１ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００１，２７６（２７）：２５００５・２５０１３． 在免疫荧光实验中我们可以清楚看到ＣＤ８２在胞浆及 一（下转第３５３页） ３４９— 第４５卷 毛传万，等：磁共振３Ｄ．ｐｃＡＳＬ成像技术在急性缺血性脑卒中的应用 脉狭窄中的应用研究【Ｄ］．南昌大学，２０１４． 第５期 技术，具有无创性、检查方便等优点，能早期发现 脑缺血灌注异常，可应用于筛查急性脑缺血性卒中 的患者。 ［５】 娄晰，吴冰，黄点点，等．正常成人后循环脑区动脉自旋标 记灌注成像的可重复性研究【Ｊ］．中华放射学杂志，２０１４， ４８（２）：１５１—１５４． ＧＤ，Ｓｏｒｅｎｓｅｎ ＡＧ，Ｇｏｒｔｚａｌｅｚ ＲＧ．Ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ 【６】 Ｂａｒｅｓｔ参考文献： Ｍｉｒａｓｏｌ ＲＶ，Ｂｏｋｋｅｒｓ ＲＰ，Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ ＤＡ．ｅｔ ａ１．Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ｒｅ－ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ｗｈｏｌｅ—ｂｒａｉｎ ａｒｔｅｒｉａｌ ｓｐｉｎ ｌａｂｅｌｉｎｇ：ａ ｎｏｎｉｎｖａ－ ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｏｐ Ｍａｇｎ Ｒｅｓｏｎ Ｉｍａｇｉｎｇ， １ ９９８，９（４）：１ ９９—２０７． ｒｃｈｕｋ Ｇ，Ｏｌｉｖｏｔ ＪＭ，Ｆｉｓｃｈｂｅｉｎ ＮＪ，ｅｔ ａ１．Ａｒｔｅｒｉａｌ ｓｐｉｎｌａ－ ［７】 Ｚａｈａｂｅｌｉｎｇ ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎｄｉｆｎｇｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ａｔｔａｃｋ ｐａｔｉｅｎｔｓ： ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ—ａｎｄ ｂｏｌｕｓ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｗｅｉｇｈｔｅｄ ｓｉｖｅ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｔｏ ｇａｄｏｌｉｎｉｕｍ［￣．Ｓｔｒｏｋｅ，２０１４，４５（２）：４５６－ ４６１． ｕｅ ｏｆ ａｒｔｅｒｉａｌ ｓｐｉｎ—ｌａｂｅｌｅｄ ［２】 Ｓｐｒｅｚａｋ Ｋ，Ｕｒｂａｎｉｋ Ａ．Ｔｈｅ ｖａｌｉｍａｇｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ Ｄｉｓ，２０１２，３４（３）：２２１—２２８． ［８】 陈耿，宦怡，徐俊卿，等．ＭＲ扩散加权成像与动脉自旋标 ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ（ＡＳＬ）ｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ［Ｊ］．Ｐｒｚｅｇｌ Ｌｅｋ，２０１３，７０（５）：３１９－３２７． ｋａｍｐ ＮＳ，Ｖａｎ Ｏｓｃｈ ＭＪ，Ｋａｐｐｅｌｌｅ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ａｒｔｅｒｉａｌ ｓｐｉｎ ［３］ Ｈａｒｔｌａｂｅｌｉｎｇ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ 记在缺血性脑血管疾病诊断中的临床应用ｆＪ１．实用放射 学杂志，２０１０，２６（８）：１ １００．１ １０３． （本文编辑：吴彬） ｉｓｃｈｅｍｉａ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｕｒｏｌ，２０１４，２７（１）：４２—５３ 【４］ 王志强．高分辨率ＭＲＩ和３Ｄ—ｐＣＡＳＬ技术在单侧大脑中动 （上接第３４９页） ［９】 Ｓｈｉｎｏｈａｒａ Ｔ，Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ Ｎ，Ｈａｎｉｂｕｃｈｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆＫＡＩ１／ＣＤ８２ ｃＤＮＡ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｈｅｍａｔｏｇｅｎｏｕｓ ｓｐｒｅａｄ ｏｆｈｕ— ｍａｎ ｌｕｎｇ・－ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ－・ｄｅｐｌｅｔｅｄ ＳＣＩＤ ｏｆ ｔＵｌＴＩＯｒ ＣＤ４４ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ＰＫＣａ—ｐ３８－ＳＰ—ｌ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＦＡＳＥＢ Ｊ，２０１４，２８（１ １）： ４５９１．４６０９． ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００１，９４（１）：１６—２３． ［１０】Ｌｅｅ，ＪＨ，Ｓｅｏ Ｙ Ｐａｒｋ ＳＲ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆａ ｓｐｌｉｃｅ ｖａｒｉ－ ｎｔ ａｏｆＫＡＩ１，ａ ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ，ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ［１７】Ｈ６１ｔｅｒｓ Ｓ１，Ａｎａｃｋｅｒ Ｊ，Ｊａｎｓｅｎ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ ｌ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ，２０１３， ４３（２）：５０３－５ １２． ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００３．６３ （２１）：７２４７—７２５５． ［１８】Ｈａｋｏｍｏｒｉ ＳＩ．Ｇｌｙｃｏｓｙｎａｐｔｉｃ ｍｉｃｒｏｄｏｍａｉｎｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｕ— ｍｏｔ ｃｅｌｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ，ａｄｈｅ－ ［１１］Ｍａｕｎｉｏｎ ＢＡ１，Ｂｅｒｄｉｔｃｈｅｖｓｋｉ Ｆ，Ｋｒａｅｆｌ ＳＫ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｍｅｍ— ｂｒａｎｅ一４ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＣＤ８１（ＴＡＰＡ一１），ＣＤ８２，ＣＤ６３， ａｎｄ ＣＤ５３ ｓｐｅｃｉｉｃａｌｆｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｌｐｈａ ４ ｂｅｔａ ｓｉｏｎ，ａｎｄ ｍｏｔｉｌｉｔｙ［Ｊ］．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，２０１０，５８４（９）：１９０１—１９０６． ［１９］Ｓｔａｕｎ—Ｒａｍ Ｅ，Ｇｏｌｄｍａｎ Ｓ，Ｇａｂａｒｉｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｎｄ ａｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒ０ｔｅｉｎａｓｅ ２ ａｎｄ ９（ＭＭＰ・２ ａｎｄ－９、ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ ｉｎｖａｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｒｅｐｒｏｄ Ｂｉｏｌ Ｅｎ— ｄｏｃｒｉｎｏｌ，２００４，２：５９． １（ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９）［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９６．１５７（５）：２０３９—２０４７． 【１２］Ｓｒｉｄｈａｒ ＳＣ１，Ｍｉｒａｎｔｉ ＣＫ．Ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ ＫＡＩ１／ＣＤ８２ ｓｕｐｐｒｅｓｓ－ ｅｓ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｉｎｔｅｇｒｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｒｏｓｓｔａｌｋ ｗｉｔｈ 【２０】Ｂｉｌｂａｎ Ｍ，Ｇｈａｆｆａｒｉ－Ｔａｂｒｉｚｉ Ｎ，Ｈｉｎｔｅｒｍａｎｎ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｋｉｓｓ－ ｐｅｐｔｉｎ一１０，ａ ＫｉＳＳ・１／ｍｅｔａｓｔｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｃａｐｅｐｔｉｄｅ，ｉｓ ａ ｐｈｙｓ— ｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓ ｃ－Ｍｅｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｎｄ ａＳｒｃ ｋｉｎａｓｅｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００６．２５（１６）： ２３６７．２３７８． ［１３】Ｍａｅｃｋｅｒ ＨＴ，Ｔｏｄｄ ＳＣ，Ｌｅｖｙ Ｓ．Ｔｈｅ ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ ｓｕｐｅｒｆａｍｉ— ｌｙ：ｍｏｌｅｃｕｌｒ ａｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒｓ［Ｊ］．ＦＡＳＥＢ Ｊ，１９９７，ｌ１（６）：４２８—４４２． ［Ｊ］．ＪＣｅｌｌ Ｓｃｉ，２００４．１１７（Ｐｔ ８）：１３１９・１３２８． ［２１］ Ｊｅｅ ＢＫ Ｐａｒｋ ＫＭ，Ｓｕｒｅｎｄｒｎ ａＳ，ｅｔ ａ１．ＫＡＩ１，ＣＤ８２ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｕｌＴＩＯｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｂｙ ＭＭＰ９ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｖｉａ ＴＩＭＰ１ ｕｐ－ｒｅｇｕ— ［１４】Ｈｏｈｅｎｅｓｔｅｒ Ｅ．Ｓｉｎａｌｇｌｎｉｇ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ａｔ ｈｔｅ ｃｅｌｌ－ｍａｔｒｉｘ ｉｎｔｅｒ－ ｆａｃｅ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ，２０１４，２９：１０－１６． ｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｈ１２９９ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ［Ｊ］．Ｂｉｏ－ ｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２００６，３４２（２）：６５５—６６１． ［１５］Ｚ６１１ｅｒ Ｍ．Ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎｓ：ｐｕｓｈ ａｎｄ ｐｕｌｌ ｉｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｎｉｇ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２００９，９（１）：４０－５５． 【１６】Ｚｈａｎｇ Ｐ’Ｇｏｏｄｒｉｃｈ Ｃ，Ｆｕ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｍｅｌａｎｏｍａ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＩＣＡＭ－ｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ （本文编辑：胡苗苗） 一３５３一
