安徽科技学院学报，２０１３，２７（６）：１９～２１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 烟草青枯病菌对不同氮源利用研究 黄保宏 ，周本国 ，高正良 ，丁小玲 （１．安徽科技学院植物科学学院，安徽凤阳２３３１００；２．安徽省农业科学院烟草研究所，安徽合肥２３００３１） 摘要：采用酪朊水解物培养基法研究了安徽宣州黄渡烟草青枯病原菌株对钠、钾、钙、硫酸 铵、氯化铵和尿素等６种氮源的利用。结果表明：烟草青枯病菌对酰胺态氮尿素利用最好，且与氨态氮和 硝态氮利用差异显著；但病菌对铵态氮和硝态氮利用差异不显著。这为烟草青枯病田间防治和合理科学 施肥提供理论依据。 关键词：烟草；青枯病菌；氮源 中图分类号：￥４３５．７２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—８７７２（２０１３）Ｏ６—００１９—０３ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｓｏｕｒｃｅｓ ｉｎ Ｔｏｂａｃｃｏ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ＨＵＡＮＧ Ｂａｏ—ｈｏｎｇ ，ＺＯＵ Ｂｅｎ—ｇｕｏ ，ＧＡＯ Ｚｈｅｎｇ—ｌｉａｎｇ ，ＤＩＮＧ Ｘｉａｏ—ｌｉｎｇ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙ，Ａｎｈｕｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ ２３３１００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｔｏｂａｃｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ＡＡＡＳ，Ｈｅｆｅｉ ２３００３ １，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ ｔｏｂａｃｃｏ Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｆｒｏｍ Ａｎｈｕｉ ｘｕａｎｚｈｏｕ ｂｙ ｃａｓｅ ｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ ｗｉｔｈ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｎ ｉｔ ａｎａｌｙｚｅｓ ６ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｓ ｔｈａｔ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｓｏｄｉｕｍ ｎｉｔｒａｔｅ．Ｐｏ． ｔａｓｓｉｕｍ ｎｉｔｒａｔｅ，Ｃａｌｃｉｕｍ ｎｉｔｒａｔｅ，Ａｍｍｏｎｉｕｍ ｓｕｌｆａｔｅ，Ａｍｍｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｕｒｅａ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｔｏｂａｃｃｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ ｔｏ Ａｍｉｄｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｏｆ ｕｒｅａ ｗａｓ ｂｅｓｔ，ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ Ａｍｍｏｎｉａｃａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ ｎｉ— ｔｒａｔｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｄｉｆｆｅｒ ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔｌｙ，ｂｕｔｆ ｔｈｅ ｇｅｒｍ ｏｆ Ａｍｍｏｎｉａｃａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ ｎｉｔｒａｔｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｕｓｉｎｇ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉ－ ｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ．Ｔｈｉｓ ｉｓ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｏｂａｃｃｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｗｉｌｔ ａｎｄ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ｓｃｉｅｎｔｉｉｃ ｆｅｒｔｉｌｉｆｚａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｔｏｂａｃｃｏ；Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ；Ｎｉｔｒｏｇｅｎ 烟草青枯病（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ￥ｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）是我国南方烟区普遍发生的重要细菌性病害之一，引起烟草青枯病 的病原菌为劳尔氏菌属细菌，目前该病造成的损失已居各类病害的第４位口 ］。在安徽省皖南烟区烟草青 枯病发生面积较大，为害较重，且有向北扩展的趋势。硝态氮对烟草生长有利，铵态氮对烟草生长不利，故 施用铵态氮的地块一般较施用硝态氮的地块发病重＿３ Ｉ４］。有关烟草青枯病菌对硝态氮、铵态氮和酰胺态 氮利用的差别方面研究甚少。因此，本文初步探讨烟草青枯病菌对不同种类氮源的利用，不同地区烟草青 枯病菌对相同氮源利用的差别，以期更好地了解烟草青枯病菌生物学特性，为科学施肥提供理论依据。 １材料与方法 １．１试验材料 １．１．１仪器显微镜、ＹＸＱ—ＬＳ—ＳⅡ全自动电热压力蒸汽灭菌箱、１０１Ａ一２Ｃ立式循环通风干燥箱、ＲＸＺ 收稿日期：２０１３—０５—２１ 基金项目：安徽省烟草公司项目资助。 作者简介：黄保宏（１９６６一），男，安徽省凤阳县人，博士，教授，主要从事植物保护学研究。 通讯作者：高正良。研究员，Ｅ—ｍａｉｌ ｇａｏｚ１６３＠ｓｏｈｕ．ｃｏｒｎｏ ２０ 安徽科技学院学报 １０６Ｌ—Ａ智能人工气候箱、ＳＷ—ＯＪ一２Ｆ洁净工作台、分析天平等。 １．１．２试剂钠、钙、钾、氯化铵、硫酸铵、尿素、甘油、蔗糖、葡萄糖、酪朊水解物、磷酸氢二 钠、硫酸十二烷基钠等，均为国产分析纯试剂。 １．１．３供试菌种１．２试验方法 从安徽宣州黄渡乡西扎采集典型烟草青枯病菌株为供试菌株。 将１５ｇ琼脂、１ｇ酪朊水解物、ｌＯｍＬ甘油、１０ｇ蔗糖、５ｇ １．２．１ 含不同氮源的甘油酪朊水解物培养基制备氯化铵、２．３ｇ磷酸氢二钠和０．６ｇ硫酸十二烷基钠溶于１０００ｍＬ蒸馏水，熔化后酸度调至ｐＨ ６．８配制成含 氯化铵氮源的甘油酪朊水解物培养基，灭菌后熔化倒人直径９ｃｍ培养皿中，摇匀冷却后备用。 同理，按甘油酪朊水解物培养基制备方法，按照５ｇ氯化铵的纯氮量分别将７．９４４ｇ钠、９．４３９ｇ硝 酸钾、１１．０２８ｇ钙、６．１６８ｇ硫酸铵和２．８０４ｇ尿素等其它氮源替换甘油酪朊水解物培养基中氯化铵配 制成含有其它５种氮源的培养基。 １．２．２硝态氮对烟草青枯病菌生长的影响将烟草青枯病原菌株接种于３种硝态氮（钠、钾、硝 酸钙）甘油酪朊水解物培养皿，以不加氯化铵等其它氮源的甘油酪朊水解物培养基为对照（ＣＫ）。重 复３次。并倒置于２８ｑＣ智能人工气候箱培养。每２４ｈ观察一次，连续观察到第１２ｄ。采用十字交叉法记 录菌落生长变化情况和计算菌落平均生长速率。 １．２．３铵态氮对烟草青枯病菌生长的影响将烟草青枯病原菌株接种于２种铵态氮（硫酸铵和氯化铵） 将烟草青枯病原菌株接种于酰胺态氮（尿素）甘油酪朊 甘油酪朊水解物培养皿。其它同１．２．２。 １．２．４ 酰胺态氮对烟草青枯病原菌生长的影响水解物培养皿。其它同１．２．２。 ２结果与分析 ２．１ 硝态氮对烟草青枯病菌生长的影响 由图１可知，烟草青枯病原菌对硝态氮利用率与对照间达到差异，但在３种硝态氮之间差异不显著， 其中利用率大小顺序为ＣＫ＞钾＞钠＞钙。 ｉ 群 ｌ ： ２ ３ ４ ５ ３・ 。‘ ． ．． ．． ６ ７ ８ ９ １Ｏ ｌ１ １２ 图１ 硝态氮对烟草青枯病菌生长的影响 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｉｔｒａｔｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ Ｒａｌｓｔｅｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅｎａｒｕｍ 瑚 Ｌ 露 ０． ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ 图２铵态氦对烟草青枯病菌生长的影响 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｍｍｏｎｉａｃａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ Ｒａｌｓｔｅｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ 第２７卷第６期 黄保宏，等烟草青枯病菌对不同氮源利用研究 ２ｌ ２．２铵态氮对烟草青枯病菌生长的影响 由图２可知，烟草青枯病原菌对铵态氮利用率与对照间达到差异，但在２种铵态氮之间差异不显著， 其中利用率大小顺序为ＣＫ＞硫酸铵＞氯化铵。 Ｌ ４ ５ ３ ５ ２ ５ ３ ｌ ５ Ｏ ４ ５ ３ ２ ５ ２ ｌ ５ １ Ｏ ５ ０ ２．３ 酰胺态氮对烟草青枯病原菌生长的影响 由图３可知，烟草青枯病原菌对酰胺态氮（尿素）利用率与对照间达到差异，其中利用率大小顺序为 尿素＞ＣＫ。 穹 矗 ０ 甜 鞠 露 Ｂ卜 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ ｌ１ １２ 图３ 酰胺态氮对烟草青枯病菌生长的影响 Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｍｍｏｎｉａｃａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ Ｒａｌｓｔｅｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ２．４ ６种氦源对烟草青枯病原菌生长的影响 由图４可知，烟草青枯病原菌对６种氮源利用率大小顺序为尿素＞ＣＫ＞硫酸铵＞氯化铵＞钾 ＞钠＞钙。其中酰胺态氮（尿素）利用率最高，铵态氮次之，硝态氮最差，且酰胺态氮利用率与铵 态氮和硝态氮差异显著；但铵态氮和硝态氮之间差异不显著。 ＼ Ｅ 鞠 １ ２ ３ ４ ｂ ６ ｙ ８ １０ １１ １２ 图４ ６种氮源对青枯病菌生长速率的影响 Ｆｉｇ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｍｍｏｎｉａｃａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ Ｒａｌｓｔｅｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ３结论与讨论 烟草青枯病原菌对酰胺态氮（尿素）利用最好，且与铵态氮（硫酸铵）和硝态氮（钠，钾， 钙）利用差异显著；但病菌对铵态氮和硝态氮利用差异不显著，本试验研究结果与陈瑞泰 研究结果有所 不同。因此，本试验结果可为烟草青枯病田间防治和科学合理施肥提供一定的理论依据，在烟田施肥时一 定要避免施用酰胺态氮，尽量少施用铵态氮，最好采用硝态氮。 参考文献 ［１］吴力游，戴良英，徐顺成．烟草病虫害防治彩色图册［Ｍ］．长沙：湖南科学技术出版社，１９９９：１—３４． ［２］陈瑞泰．烟草病虫害防治［Ｍ］．济南：山东科学技术出版社，１９８９：１２—２３． ［３］陈瑞泰，朱贤朝，王智发，等．全国１６个主产烟省烟草侵染性病害调研报告［Ｊ］．中国烟草科学，１９９７（４）：１—７． ［４］孙思，王军．青枯病发病率与土壤条件关系的研究进展［Ｊ］．江西植保，２００５，２８（１）：１７－２０． （责任编辑：李孟良）
