第２７卷２０１３．０３ 第１期 沈阳化工大学学报 Ｖ０ｌ＿２７ Ｎｏ．１ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＳＨＥＮＹＡＮＧ ＵＮＩＶＥＲＳⅡＹ ＯＦ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｍａｒ．２０１３ 文章编号：２０９５—２１９８（２０１３）０１—００２５—０５ 萝卜籽中活性成分提取及抑菌效果的研究 李东华 ，叶春苗 （１．沈阳化工大学制药与生物工程学院，辽宁沈阳１１０１４２； ２．辽阳职业技术学院化工系，辽宁辽阳１１１０００） 摘要： 实验以水为提取剂，利用超声波辅助提取的方法对萝卜种子进行破碎提取，在单因素实 验基础上，实验选定温度、水料质量比、提取时间和超声功率４个因素进行正交实验，确定最佳提取 条件为超声波功率７０ ｗ、破碎时间３０ ｍｉｎ、破碎温度４０℃、水料质量比１５．对萝卜籽提取液的抑 茵效果实验结果表明，提取液的抑茵效果随硫苷含量的增加而增加，对比实验表明最优的提取条 件下所得提取液抑茵效果最好． 关键词：萝卜籽；硫代葡萄糖苷；提取；抑菌 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５—２１９８．２０１３．０１．００６ 中图分类号：ＴＳ２０１．１；ＴＳ２２９ 文献标识码：Ａ 萝卜又名莱菔，是十字花科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒｏｕｓ）植 物的一种，在中国根菜类蔬菜中，占有极为重要 的地位¨ ｊ，其硫代葡萄糖苷含量非常丰富，硫 代葡萄糖苷是十字花科蔬菜中重要的次生代谢 产物，到目前为止已发现有近１２０种 ］，广泛 存在于十字花科植物如萝卜、甘蓝、黑芥子和辣 根等中．据资料报道蔬菜在破碎时硫苷可被内源 芥子酶（ｍｙｒｏｓｉｎａｓｅ）水解成异硫氰酸酯盐．异硫 氰酸酯盐是抗癌效果较好的生物活性物质之一， 具有较强的抗菌、抗氧化作用． １实验部分 １．１实验材料 萝卜种子（购买于沈阳农业大学种子公司） 进行消毒处理，具体方法为：用体积分数７５％的 酒精冲洗２次消毒，然后用无菌去离子蒸馏水清 洗２次，置于干燥箱（４０℃）烘干，备用 ． 将灭菌烘干处理的萝卜种子置于干燥箱内， 在９０℃下烘２ ｈ，使萝卜种子中的硫代葡萄糖苷 酶失活，再用粉碎机粉碎，过４０目筛，以石油醚 目前对于硫苷活性的研究主要集中在提取、 纯化、活性研究等方面，对硫苷的各种研究都要 以提取为前提，因此很多学者致力于高提取率的 脱脂，烘干，密封备用． １．２实验方法 硫苷成分的研究，李洁，谭正林等 利用正交旋 转设计方法进行水提硫苷，提取液浓度可达到 ０．９ ｇ／Ｌ以上，但这种方法的影响因素较多，分析 过程也较复杂．本实验拟寻找一种简单、方便的 提取方法，利用超声波辅助，以水为提取剂，通过 正交实验优化萝卜籽硫苷的提取工艺，并对粗提 物的抑菌效果做了探讨，为萝卜籽中硫苷的抗菌 １．２．１ 真菌的分离提取与继代繁殖方法 实验菌种从脚癣、手癣患者身上直接取样． 首先用酒精对患癣部位消毒，接着用灭菌棉棒沾 取患癣部位的脓水，涂于土豆培养基平板上，培 养４ ｄ后从长满菌落的平板上刮取部分菌落，置 于２０ ｍＬ无菌去离子蒸馏水中，摇匀过滤菌丝， 菌液涂布在土豆培养基平板上，培养４ ｄ左右用 划线法分离菌株，结果见图１和图２． 研究奠定一定的理论基础． 收稿日期：２０１２—０９—１１ 作者简介：李东华（１９８１一），女，辽宁大连人，讲师，博士，主要从事食品质量控制和农产品无损检测方面的研究 第１期 李东华，等：萝卜籽中活性成分提取及抑菌效果的研究 ２７ ，２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９魍 ２．２萝卜籽中硫苷最佳提取条件确定 单因素实验确定破碎温度为４Ｏ℃时，破碎 时间３０ ｍｉｎ，加水量为１５ ｍＬ／ｇ，超声功率为６０ ｗ时，提取效果达到最佳．根据单因素的实验结 果，选用Ｌ（３ ）正交设计表（见表１）进行正交实 验，结果见表２．由表２可知，按照极差Ｒ的大 小，影响种子中硫苷提取率的因素主次顺序为Ｂ ＞Ｃ＞Ｄ＞Ａ，即水料质量比＞提取温度＞提取 件对正交实验数据进行方差分析，找出这些因素 中起主导作用的变异来源ｕ卜 ］．由表３可知，４ 因素对硫苷提取率的影响都很显著（Ｐ＜０．０５）， 其中Ｂ、Ｃ的影响最显著，其次是Ｄ、Ａ，证明正交 实验设计正确合理，综上所述，实验最终确定的 提取条件为：Ａ３Ｂ１ Ｃ３Ｄ２． 表１ Ｌ９（３ ）因素水平表 Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆｔｅＳｔ 时间＞超声波功率；根据 值可知因素最优组 合条件为Ａ３Ｂ，ｃ Ｄ：，即超声波功率７０ ｗ、破碎 时间３０ ｍｉｎ、破碎温度４０℃、水料质量比为１５． 为进一步判断上述４类受控制的因素对实 验结果的影响是否存在，运用ＤＰＳ数据处理软 表２正交结果处理表 Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ １ １ １ １ ０．６５８ ｌ １ ２ ２ ３ ｌ ２ ３ １ ２ ３ ２．Ｏ６１ １．８８１ １．４６４ ２ ３ ２ ２ ０．６２９ ０．５０１ ０．６８２ ０．６５３ ０．４７１ ３ ３ １ ２ ２ ３ １ １．８０３ ２ ２ ３ ３ ３ １．７８８ ３ １ ３ １ ２ ０．７２１ Ｏ．６ｏ４ Ｏ．４９２ １．７２８ １．０８６ １．８１２ １．８０３ １．８７２ ０．Ｏ４８ １．８２１ １．７８２ ０．０１３ ０．００８ ０．１９９ ２．３抑菌实验 实验分别在正交实验获得的最优提取方案 Ａ３Ｂ。Ｃ，Ｄ （硫苷含量６５．５９￣ｍｏｌ／ｇ）、任意两组 组合Ａ２Ｂ２Ｃ２Ｄ３（硫苷含量５７．２２ ｉ￣ｍｏｌ／ｇ）和 Ａ硫１淼Ｂ Ｃ提２Ｄ２取（ 上分别加入上述３个提取条件下的提取液１００ ，在２８℃下培养４ ｄ，抑菌效果见图４一图７． 第１期 ４８１． 李东华，等：萝卜籽中活性成分提取及抑菌效果的研究 ２９ 萄糖苷组分及含量分析［Ｊ］．中国蔬菜，２０１０（１８）： ４３—４６． ［６］ 李洁，谭正林，王清章，等．正交旋转设计优化萝卜 籽硫苷提取工艺［Ｊ］．食品科学，２００８，２９（１２）：２６４ —［１０］李秋云，戴绍军，陈思学，等．萝卜芥子油苷组分及 含量的分析［Ｊ］．园艺学报，２００８，３５（８）：１２０５— １２０８． ２６９． ［７］ 王向阳，周蓉，姜丽佳．西兰花中提取的萝卜硫苷 的稳定性研究［Ｊ］．食品科技，２００９，１２（３４）：５０— ２５７． ［１１］Ｐａｄｉｌｌａ Ｇ，Ｃａｒｔｅａ Ｍ Ｅ，Ｖｅｌａｓｃｏ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ ｉｎ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｃｒｏｐｓ ｏｆ Ｂｒａｓｓｉｃａ Ｒａｐａ ［８］ 胡新文，郭建春，郑学勤．抗真菌蛋白Ｒｓ—ＡＦＰｓ生 物学特性的研究［Ｊ］．热带作物学报，２００５，１９（２）： ３６—４２． ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｒｎｉｓｔｒｙ，２００７，６８（４）：５３６—５４５． ［１２］单毓娟，吴坤．十字花科蔬菜的癌症预防作用［Ｊ］． 国外医学卫生学分册，２００５，３２（５）：２６９—２７３． ［９］ 张丽，何洪巨，陈静华，等．不同萝卜品种中硫代葡 Ａｃｔｉｖｅ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ａｎｄ ＢａＣｔｅｒｉＯｓｔａｔｉｃ Ｏｆｆｅｃｔ ｉｎ Ｒａｄｉｓｈ Ｓｅｅｄ ＬＩ Ｄｏｎｇ．ｈｕａ ，ＹＥ Ｃｈｕｎ—ｍｉａｏ （１．Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０１４２，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｌｉａｏｙａｎｇ １ １ １０００，Ｃｈｉｎａ） ＡｂｓｔｒａＣｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔＯ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｆｒｏｍ ｒａｄｉｓｈ ｓｅｅｄｓ，ｗａｔｅｒ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ。 ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａｕｘｉｌｉａｒｙ ｍｅａｎｓ．Ｏｎ ｔｈｅ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ．ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔｓ。ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｗａｓ ｃａｒｄｅｄ ｏｕｔ ｗｉｈ ｆｏｕｒ ｆａｃｔｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｗａｔｅｒ—ｍａｔｅｒｉａｌ ｒａｔｉｏ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｔＯ ｓｔｕｄｙ ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｒａｄｉｓｈ ｓｅｅｄｓ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉ－ ｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｐｏｗｅｒ ７０ Ｗ，ｔｔｉｍｅ ３０ ｍｉｎ。ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ４０ ｏＣｗａｔｅｒ—ｍａｔｅｒｉｌ ｒａａｔｉｏ １５．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ，ｂａｃｔｅｄｏｓｔａｓｉｓ ｔｅｓｔ ｓｈｏｗｅｄ ｈａｔｔ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｗｉｈ ｔｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｒａｄｉｓｈ ｓｅｅｄｓ； ｇｌｕｃｏｓｉｎｏｌａｔｅｓ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ； ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔ
