一、实验目的
了解病毒感染力测定的几种常用方法,掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。 二、测定病毒感染力的方法
半数致死量LD50( 50% lethal dose):用动物或鸡胚来检测 半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose):用鸡胚来检测
半数细胞培养物感染量TCID50(50% tissue culture infective dose):用细胞来检测 蚀斑形成单位(plaque forming unit,PFU):用细胞来检测 三、材料
1、长满单层的细胞1瓶 2、胰酶、吸球、吸管、生长液 3、96孔细胞培养板 4、加样器、头 5、病毒液(PRV) 四、TCID50的操作步骤
1、在青霉素瓶或离心管中将病毒液作连续10倍的稀释,从10-1-10-10。 2、将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中,每一稀释度接种一纵排共8 孔,每孔接种100µl。
3、在每孔加入细胞悬液100µl,使细胞量达到2~3×105个/ml。
4、设正常细胞对照,正常细胞对照作两纵排。(100µl生长液+100µl细胞悬液) 5、逐日观察并记录结果,一般需要观察5-7天。 6、结果的计算,按Reed-Muench两氏法或Karber法 五、TCID50的计算方法
1、Reed-Muench两氏法
2、Karber法
含义:将该病毒稀释103.875接种100µl可使50%的细胞发生病变。