2996年第13期中国饲料!迈蛋返冀竣葺夏蒸退勇困亘亘妇硕:.侧曰厕嘟娜叫口班勇滩龚蒸饲料原料及配合饲料中叶黄素的测定广东省农科院畜牧研究所饲料中的叶黄素含量直接影响到肉鸡皮肤及禽蛋蛋黄的着色效果因此对于原料及配郭吉余苏基双刘汉林:胡萝卜6+4)素洗脱溶剂己烷一丙酮(9总叶黄素洗脱溶剂(80+10+10).9:己烷一丙酮一甲醇合饲料中叶黄素的检测意义重大AOAC先后多次颁布了关于叶黄素的检测方法最近一次所颁布的为高压液相色谱法液相色谱法由于设备昂贵及操作的繁琐性很难在企业中推广1一苯基毗咯一2一蔡酚标准液的制备:原液(1晶将0:毫克分子浓度mM)用热无水酒精0℃真空干燥箱中干燥结重结晶标准品在70因此我们在AOAC(1984)所颁布的柱层析结124191)的结晶体溶于50ml丙酮一异合分光光度计分析叶黄素的基础上略加改进易方法丙醇(1+形成了目前这种饲料中叶黄素含量检测的简该方法自1992年以来经过不同人的:工作液(004mM)用丙酮一异丙醇(l+多年实践证明是一种简易可靠重复性好的检测方法1)将Zomll原液稀释到so3l存于阴暗处m样品的浸提与皂化仪器a将样品磨碎过4051mmX30cm(内径宽X目筛准确称取适量样—的硬质玻璃管硼硅酸玻璃制造色层柱长)品(29玉米蛋白粉或草粉叶粉49配合饲料3oml浸下部带2x01cm(宽X长)的细颈与20oml体积的抽滤~或玉米)于10oml棕色容量瓶中加入提液塞上塞子并旋转振摇1分钟对于湿度较瓶相连b“低的样品如万寿菊花粉或玉米数(非空气干燥样品)以lml/29样计加适量水塞上塞子旋转振摇a真空抽气装置271与—分光光度计色层柱相连1分钟对高湿度(空气干燥)样品省2试剂a去加水步骤正己烷丙酮无水乙醇甲苯分析纯热皂化(用于迅速提取和含叶黄素醋高用移液管加入KOHb:浸提液己烷一丙酮一乙醇一甲苯(10的样品)加4+7+6+7)c—ml)%40Zml(49配合饲料甲醇溶液到容量瓶中旋转甲醇化氢氧化钾溶液(40%):将振摇1分钟将容量瓶于56℃水浴上加热2040gKOH溶于甲醇冷却并用甲醇稀释至‘分钟接上空气冷凝装置或冷却容量瓶颈部以防止溶剂损失冷却样品让其于暗处放置100ml1小dZ一。肠NaSO溶液将:109无水NaZSO4时加入3oml己烷旋转振摇110%分钟以1溶于10ml蒸馏水中制成eNaZSO溶液定容猛烈振摇分钟于暗处放:吸附剂机械混合硅胶G(柱层析用置1小时后进行色谱分离上层液体积为50一140目)与硅藻土(Hgflo/w)super一eel)i一250ml小时土)1+1(w(或使用活性氧化镁与硅藻b冷(过夜)皂化(适用不含叶黄素酷的样6小时加Zm让混合物于暗处放置1品)f洗脱溶剂40%KOH甲醇溶液并旋转振摇—l1分钟再于暗一32一小时然后加入己烷按中国饲料a1996年第13期处放置4a1进行5检测立即检测洗脱液的光密度值A以使异构色谱分离将吸附剂装入色层柱装时将色层柱与化和自身氧化的损失减少到最小469nm首先在真空抽气装置相连并抽气以有柄木塞压紧吸cm高即可再在吸附剂上面装入附剂装至7和479nm之间每隔Inm波长读出工作标准液的值以校正分光光度计若最大值不在474nm无水NaSO压紧至Zem高即可474nm则要重新校正仪器当仪器在b胡萝卜素的洗脱loml)处显示最大光密度值且峰宽为0030用抽滤瓶接收洗脱液并与真空抽气机相l如色素含量低则连吸取5m(时工作液的读数应是561(474nm)因仪器皂化后的误差因素需校正下列等式的计算值在474nm上层液注入色层柱同时开动真空抽气机在色层柱上部的待分析液快要流完之前徐徐加入胡萝卜素洗脱溶剂直至胡萝卜素带全部洗入接收抽滤瓶;关掉真空抽气机胡萝卜素被处检测叶黄素洗脱液的光密度值6A计算总叶黄素浓度(mgk/g)-Axlo00xf洗脱后叶黄素类色素仍保留在色层柱中。236XbXd总叶黄素的洗脱b~比色池的长度(cm)d一胡萝卜素洗脱后重新安装好实验装置直至收集到全部叶黄素为止使液面高于吸附剂表面开动真空泵并加入叶黄素洗脱溶剂持续洗脱整个操作始终应稀释系数样品重gx柱上的皂化液ml一50ml上相液又最后的稀释液仪器误差=6f~0561/被观察的A447关掉真空泵将叶黄3等式中2的光密度值5100〕是在指定的波长处反式叶黄素素溶液置于暗处当其达到室温后转入25ml棕色容量瓶用洗脱溶剂稀释至刻度混合均匀后立即检测其光密度值A〔通讯地址;广州市天河区五山邮编:维生秦八乙麟礁做粗快逮潞定农高99.7221南宁市粮油饲料总厂国标GB7292一87中测定饲料添加剂维生%;环己烷分析纯:素A乙酸酷微粒中的维生素A含量的方法烦测定步骤称取0069琐复杂采用氢氧化钾的乙醇溶液溶解胶囊(准确至000029)维生素A回流粗提维生素A然后再用乙醚提取用无乙酸酷微粒置于小研钵中.22水硫酸钠过滤提炼得到纯净的维生素A的乙醚溶液最后取滴加少量乙醇润湿维生素A乙酸醋微粒lml用异丙醇定容成为待测并研磨成糊状加入环己烷继续研磨使维生液后用分光光度计测定这种方法不便于操素A完全溶于环己烷中过滤将滤液置于作且时间长现介绍一种用环己烷作溶剂的简捷快速测定维生素A含量方法供参考1.3210ml棕色容量瓶中用环己烷清洗研钵3次倒入过滤漏斗再用环己烷试剂无水乙醇分析纯:洗涤漏斗数次使维生素CHOHA完全转移入容量瓶含量不少于中定容
