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混合发酵法制备烟用米酒香料的研究

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经验交流 中 国 酿造 2017年第36卷第8期 总第306期 ・153・ 混合发酵法制备烟用米酒香料的研究 徐达,苏加坤 ,倪悦,张晓旭,田耀伟,罗娟敏,罗凌超,蔡继宝 (江西中烟工业有限责任公司技术研发中心,江西南昌330096) 摘要:以糯米、红枣、无花果为主要原料,采用混合发酵法制备烟用米酒香料,以卷烟感官评价为考察指标进行工艺优化。通过正交 试验优化得到最佳制备工艺条件为糯米:红枣:无花果质量比5:1:1,接种量1%,糖化温度30℃,糖化时间48 h,后发酵时间72 h。对比 米酒香料KB,添加了混合发酵米酒香料的卷烟香气、吃味品质均明显提升,评吸得分为90.3分。在最优工艺条件下,对混合发酵米酒 和米酒KB的理化指标及致香物质进行分析。结果发现,混合发酵米酒中的总糖、总酸含量均高于米酒KB,而酒精度差别不大;混合 发酵米酒香料中致香物质种类可达26种,多于米酒香料KB(11种),其中苯甲醇、苯乙醇、4一羟基一3一甲氧基苯乙醇含量均达到了 20 mg/L,提高该米酒香料的香气质量。 关键词:烟用香料;混合发酵法;米酒;正交试验 中图分类号:TS262.7 文章编号:0254—5071(2017)08—0153—05 doi:l0.11882/j.issn.0254—5071.2017.08.033 Preparation office wine spice by mixed fermentation for cigarette application XU Da,SU Jiakun ,NI Yue,ZHANG Xiaoxu,TIAN Yaowei,LUO Juanmin,LUO Lingchao,CAI Jibao (TechnologyResearch andDevelopmentCenter,China TobaccoJingxiIandustrialCo.,Ltd.,Nanchang330096,China) Abstract:Using glutinous rice,red date and ig as fthe main raw materials,rice wine spice for cigarette application was prepared by mixed fermenta- tion with smoke sensory evaluation as indexes,the preparation technology was optimized by orthogonal experiments.The optimum preparation tech- nology conditions were determined as follows:glutinous rice:red date:fig 5:1:1,inoculum l%,sacchafification temperature 30 oC,time 48 h and post-fermentation time 72 h.Compared to the rice wine spice KB,the tobacco aroma and smoke quality ofcigarette with addition ofmixed fermenta— tion rice wine spice were improved signiicafntly,and the smoking score was 90.3.Under he optitmum technology conditions,the physicochemical in— dexes and aroma components of mixed fermentation rice wine and rice wine KB were analyzed.The results showed that the contents of total sugar and total acids in mixed fermentation rice wine were higher than that of rice wine KB,but the difference in alcohol content was not obvious.There were 26 kinds ofaromatic substances in mixed fermentation rice wine spice,which was more than hatt office wine spice KB(1 1 kinds),the contents of phenylcarbinol,phenethylalcoholand4・・hydroxy--3・-methoxyphenylethanolallreached20mg/Landthearomaqualiyoftthericewinespicewasimproved. Key words:cigarette spice;mixed fermentation;rice wine;o ̄hogonal experiments 糯米富含维生素、淀粉、纤维素等[1],以糯米为原料发 究通过选用红枣、无花果这类在卷烟中应用广泛的天然产 物与糯米进行混合发酵,提升发酵产物“甜”、“润”吃味,从 酵制备的米酒是我国传统的特色饮品,口味醇厚甜润,清 凉去火,健脾养胃,除了提供特征香气的短链醇、酯类外, 还含有大量的糖分、有机酸、维生素等营养物质[2-4]。目前,有 研究者通过在糯米发酵过程加入桂花、枸杞、黄精等多种 天然产物进行混合发酵制备米酒型风味饮品或保健品,提 高了其营养价值和感官品质 砌,具备一定的市场认同度。 卷烟单体香料感官评价的角度对其进行筛选和酿造工艺 优化,并分析其酒精度、总糖、总酸等理化指标、挥发性致 香物质组成,以期为烟用天然产物香精香料的开发提供 一定的参考。 1材料与方法 1.1材料与试剂 米酒混合发酵工艺研究注重米酒香气和酸甜吃味, 多见于食品领域【“ 4],鲜见于卷烟香精香料领域。在烟草行 业,无花果发酵烟用香料、葡萄发酵烟用香料、槐花发酵 烟用香料等一系列天然发酵型香料由于增香保润功效明 糯米(产地湖北)、红枣、无花果(产地):市售;果 胶酶Rapidase C 80 MAX(酶活≥168 000 U/g):帝斯曼生 物技术有限公司;安琪甜酒曲:安琪酵母股份有限公司; O/。淀粉酶(酶活≥2 000 U/g)、多种氨基酸、葡萄糖、无水硫 显,近年来逐渐受到烟草研究者青睐,基于米酒类发酵产 物“甜”、“润”、“酿香”等特点,将其应用于烟草加工的烟丝 加料工序中,可用于提高卷烟感官品质和香气质量。本研 收稿日期:2017 03—21 酸钠、丙二醇、氨水、二氯甲烷等(均为分析纯):国药集团 化学试剂有限公司。 基金项目:江西中烟工业有限责任公司科技项目(赣烟工科计2014—5) 作者简介:徐达(1987一),男,工程师,硕士,主要从事烟用香料、烟草生物技术方面的研究。 通讯作者:苏加坤(1981.),男,工程师,博士,主要从事烟草化学方面的研究。 ・1 54・ 201 7 VOI.36 No.8 Serial No.306 China Brewing Experience Exchanges 1.2仪器与设备 酵温度为30℃,糖化时间为36 h,糖化发酵结束后,按照后 发酵温度为20 cC,发酵时间为48 h。将发酵完成后的米酒 香料进行卷烟感官评价和筛选,根据香气特征、口感特征、 7890.5973C型气相色谱-质谱联用(gas chromatography— mass spectrometer,GC.MS)仪:安捷伦科技有限公司;RE.52A 型旋转蒸发器:上海亚荣生化仪器厂;DH5000BII培养箱: 天津泰斯特仪器有限公司;CP2245电子天平:德国Sartorius 公司;LDZM一80KCS ̄_式压力灭菌锅:上海申安医疗器械厂。 1.3方法 1.3.1混合发酵米酒香料的制备工艺流程 天然发酵底物一洗净切片一浸泡 上 糯米一淘洗一浸泡一混合蒸煮一淋饭一拌曲入缸一糖化发 酵一后发酵一压榨过滤一灭菌一成品(卷烟应用) 操作要点: 淘洗:除去砂石等杂质,糯米应洗至无白浊,以保证 酿出的米酒色泽澄清,无异味。 浸泡:糯米在去杂洗净后放入清水中,保持水面高出约 2 crn左右。浸泡糯米的过程要注意换水2~3次,以防止发酸。 浸米的质量标准是以米粒浸透无白心,手碾即碎为适度。 混合蒸煮:将浸好的米滤去白浆后,与天然发酵底物混 合后置于蒸锅内蒸煮,待冒蒸汽后,每隔5min向米层中撒入 适量的温开水以防止米粒粘在一起,再蒸20 ̄30 min即可。 淋饭:以温开水迅速冲淋米饭,温度降至28~32℃, 淋饭要求均匀彻底。 拌曲入缸:将淋饭后的米饭放在摊晾板上,加入安琪 甜酒曲,同时加入一定量的温开水,搅拌均匀,装入缸内, 中间挖一个4,TL,然后放入培养箱中培养。 糖化发酵:将缸放在28 ̄32 oC恒温培养36 h后,将小 孔中的部分糖化液均匀的洒在酒醪的表面,从而使得表面 充分发酵,以至酒醪全部漂浮在糖化液的表面。 后发酵:糖化发酵结束后,加入发酵底物质量的20% 的冷开水冲缸,将糖化醪放于18 ̄22℃条件下保温24~72h, 后发酵结束。 成品(卷烟应用):灭菌后,向米酒中添加2‰的山梨酸 钾和10%的1,2.丙二醇,即得米酒香料。米酒香料是以加料 的形式应用在卷烟中,即通过喷雾器将其喷洒到某款卷 烟叶组上,喷雾量为烟丝质量的2‰,烘丝、打烟,将烟支在 25℃、相对湿度60%的环境中平衡48 h后,首先参照单体 香料在卷烟中作用评价方法对其香气特征、口感特征、烟 气特征三个方面进行描述 ,然后参照GB 5606.4—2o05 《卷烟第4部分:感官技术要求》对其光泽、香气、谐调、杂气、 刺激性和余味六个指标进行评价和计分,满分为100分 。 1-3.2糯米复配物的筛选 以米酒香料KB(以糯米为单一底物发酵制备的米酒) 为对照,选择4种发酵底物模型,模型及配比见表1。发酵工 艺参照1.3.1节,依据预试验和文献调研结果,选择糖化发 烟气特征3个方面进行描述。 表1 4种发酵底物模型及配比 Table 1 Models and proportions of 4 kinds of fermentation substrates 1.3-3制备工艺优化 单因素试验:考察酒曲接种量(0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、 1.0%)、糖化温度(25℃、28 、30 cCl、32℃、35℃)、糖化时问 (12 h、24 h、36 h、48 h、60 h)、后发酵时间(12 h、24 h、48 h、 60 h、72 h)4个因素对混合发酵米酒香料在卷烟中应用效 果的影响。 正交试验:在单因素试验结果的基础上,以参照GB 5606.4—2005《卷烟第4部分:感官技术要求》得到的评吸 分数为评价指标,选择酒曲接种量(A)、糖化温度(B)、糖 化时问(63、后发酵时问(D)4个因素进行L。(34)正交优化 试验,试验因素与水平见表2。 表2制备工艺优化正交试验水平与因素 Table 2 Factors and levels of orthogonal experiments for preparation technology optimization 1.3.4理化指标分析及其致香物质检测 米酒香料的理化指标按照烟草行业标准YC/T 145— 2012畿姻用香精》进行测定。致香物质分析采用GC—MS对实 验样品进行分析检测。预处理:称取约1 mL样品,JJ1]4mL 二氯甲烷萃取,振荡混匀,静置分层后取下层有机相,萃取 三次,合并萃取液,加入50 L十一酸甲酯内标(质量浓度 为400 Ixg/mL),减压浓缩至1.5 mL待测。 GC.MS条件:色谱柱为HP.1NNOWax Polyethylene Glycol (30 mx250 txmx0.25 ixm);电离方式:电子电离(electron ionization,ED源,离子源温度250 cc,检测器为四级杆质谱 仪,载气为氦气(纯度99.999 5%),进样温度为250 oC;分流比 1:20;流速1 mL/min;程序升温:40 cc保持1 min,以4 oC/min 升温至250 oC,保持15 min;传输线温度250 oC;电子能量 70 eV;扫描范围30--400 ainu。 经验交流 中 国 酿造 2017年第36卷第8期 总第306期 ・155・ 定性定量分析:使用Wiley和Minilab谱库进行检索定 性:采用内标法进行定量,定量计算公式如下: 发酵时间48 h为宜。 被测组分・的含量= 生 丝 篙 2结果与分析 2.1糯米复配物的筛选结果 采用红枣和无花果与糯米进行不同比例复配,进行米 酒发酵制备并从香气特征、口感特征、烟气特征三个方面 感官评吸,评吸结果如表3所示。由表4可知,4种复配样品在 赃 卷烟中的应用效果均优于空白样(KB),3 样品(糯米:红 枣:无花果=5:1:1)应用效果最好,2 、4 样品的应用效果次 之。根据KB、2 、3 之间的比较发现,红枣在混合发酵物中 主要起到提升烟气厚实度的作用,无花果则主要是起到提 升烟气甜润感的作用,且红枣的添加量不宜过大,否则会 出现压香、烟气粗糙的问题。故选择3 组合进行后续的混 合发酵工艺条件优化。 表3不同配LI: ̄U备得到的混合发酵物感官评吸结果 Table 3 Results of sensory evaluation of mixed fermentation products prepared by di∞ ferent pr加 opoaions 跎踟 2.2米酒香料制备工艺条件的单因素试验结果 按3 组合进行混合发酵工艺的单因素试验,结果如 图1所示。由图1(a)可知,随着接种量的增加,米酒香料的 评吸分数逐渐增加,这说明当接种量<l%时,增加接种量 提升菌种的生长繁殖的速度,有利于无花果、红枣等底物 的发酵产香,当接种量为0.7%时,评吸得分已接近较大值, 因此选择最佳接种量0.7%为宜。由图1(b)可知,当糖化温 度为30℃时,评吸得分达到最大值,这可能是因为较低的 糖化温度容易导致发酵不彻底产生酸涩,而当糖化温度 达到3O℃后,继续升高将不利于菌种生长和糖化。因此选 择最佳糖化温度30℃为宜。由图1(c)可知,随着糖化时间 的增加,米酒香料的评吸得分逐渐增加到最大值。当糖化 时间>48 h时,评吸得分开始下降,随着糖化时间延长,发 酵体系中产生了一些不需要的代谢产物,影响了该米酒香 料在卷烟应用中的增香效果。由图1(d)可知,随着后发酵 时间的增加,米酒香料的评吸得分逐渐增加到最大值,当 发酵时间为48 h时,评吸得分已接近最大值,因此选择后 O.1 O_3 O 5 O.7 l O 接种量/% 贮 25 28 3O 32 35 铝 昙昌跖 糖化温度/℃ 舳 窨昌 糖化时间/ll 贮 后发酵时间/ll 图1 接种量(a)、糖化温度(b)、糖化时间(c)和后发酵时间(d)对混合 发酵米酒香料在卷烟中应用效果的影响 Fig.1 Effects of inoculum(a),saccharification temperature(b), saccharification time(C)and post-ferment ̄ion time(d)OR mixed ferment ̄ion rice wine spice in cigarette application 2.3正交试验结果分析 根据单因素试验结果,选择酒曲接种量(A)、糖化温 度(B)、糖化时间(o、后发酵时间(D)4个因素,通过卷烟 201 7 Vo1.36 No.8 ・1 56・ Serial No.306 China B rewing Experience Exchanges 感官评吸得分进行制备工艺优化正交试验,正交试验设计 与结果如表4所示。 ~一表 ~~一 一一~一 £。cBA 一:。, 。 , : :邮 ,, 邮 ” 岛  岛R 甜香更突出;在外观、相对密度、折光指数和酸价方面,两 种米酒产物无明显差别;在挥发性成分总量方面,混合发 酵米酒香料略高于米酒香料KB,这是由于混合发酵中引 入的大枣、无花果中含有大量香气物质并通过发酵生香, 导致其挥发性成分总量增加。 将最优工艺下制备得到的混合发酵米酒与米酒KB进 行酒精度、总酸、总糖含量对比分析,结果见图2。由图2可 知,在酒精度方面,混合发酵米酒香料和米酒香料(KB)较 接近,分别为4.7%vol、4.3%vol;在总糖含量方面,混合发酵 由表4可知,极差分析结果表明,对米酒香料在卷烟 中应用效果的影响大小依次为酒曲接种量>糖化时间> 后发酵时间>糖化温度;最优工艺条件组合为A3 ̄C3D3, 即酒曲接种量1%,糖化温度30℃,糖化时间48 h,后发酵 时问72 h。在此最优工艺条件下制备混合发酵型米酒香料, 并添加到卷烟中进行品评,评吸得分为90.3分。可见,在最 优化工艺条件下,该米酒香料应用在卷烟加料中能明显改 善卷烟吸味品质,起到增加甜润感的效果。 2.4混合发酵法制备的米酒香料理化指标分析 在最优工艺下制备得到的混合发酵米酒香料(3号发酵 底物)和米酒香料(KB)的理化指标的分析结果如表5所示。 表5混合发酵米酒产物的理化指标分析结果 Table 5 Analysis results of physicochemical indexes of mixed fermentation rice wine products 由表5可知,在香气方面,混合发酵米酒香料中除了 发酵带来的酒香、甜香外,还有令人愉快的成熟果香,且 米酒香料(206 gm)高于米酒香料KB(124 g/L),这是由于 混合发酵米酒香料中引入了红枣和无花果中大量糖类物 质,经糖化、后发酵过程,还原糖用于合成醛、酮、醇及非还 原糖类,从而为该米酒烟用香料提供了特征性香气;在总 酸含量方面,混合发酵米酒(4.2 gm)高于米酒KB(2.3 gm), 由于米酒中大部分有机酸是由根霉发酵大米淀粉产生, 混合发酵法引入的有机酸是导致混合发酵米酒有机酸升 高的主要因素f21,而有机酸在卷烟中具有降低烟气pH值, 降低刺激的作用,故混合发酵米酒香料中较高的有机酸含 量使得其在卷烟中应用效果优于米酒香料KB 5^ r 1.暑)\4 甾 (3 10 2 \ l O r 。 … …~’一… 200 O 米酒KB 混合发酵米酒 l 雾 150,、 J ● 100 \ 据 50 图2混合发酵米酒酒精度、总糖、总酸含量分析结果 Fig.2 Analysis results of alcohol content,total sugar and total acid content of mixed fermentation rice wine 2.5混合发酵法制备的米酒主要挥发性致香成分分析 对米酒香料中主要挥发性致香成分分析结果见表6。 由表6可知,米酒香料KB检出11种致香物质,而混合 发酵米酒香料检出26种致香物质,有l5种新物质生成。 且混合发酵米酒中致香物质种类多于米酒KB,特别是杂环 酮类、醛类、醇类及有机酸类物质,包括2,3.二氢一3,5.二羟 基 6.甲基 4H.吡喃,4.酮、5.羟甲基糠醛、2.羟基.5 甲基苯 乙酮等与卷烟香气正相关的化学成分[19J。其中,混合发酵 米酒中的苯甲醇、苯乙醇、4.羟基.3.甲氧基苯乙醇含量均 达到了20 mg/L,而这几种对卷烟香气贡献作用明显的物质 在米酒香料KB中未检出 。由于酮类、醛类、醇类等致香 成分阈值较低,这类香气物质对提高米酒香料香气质量、 “津”、“甜”吃味的作用明显。 经验交流 中 国 酿造 2017年第36卷第8期 表6混合发酵米酒主要挥发性致香成分分析结果 Table 6 Analysis results of main volatile aroma components in mixed fermentation rice wine 南 保留 含量I(mg・L-’) 时间/ 化合物 々 . 米酒混合发 mln KB 酵米酒 1 5.436 丙醇 1.499 — 2 6.869 异丁醇 4.456 2.547 3 10.891 异戊醇 1 1.150 0.993 4 13.851 3一羟基.2一丁酮 27.520 . 5 14.483 羟基丙酮 . 1.632 6 20.998 乙酸 5.254 24.96 7 24.427 2,3一丁二醇 18.370 43.140 8 30.446 十一酸甲酯(内标) 20.000 20.000 9 33.183 5-癸酮 . 1.163 1O 35.209 双丙甘醇 一 7.067 ll 36.677 苯甲醇 一 1.386 12 36.966 2一(2一羟基丙氧基)一1一丙醇 26.640 1.637 13 37.835 苯乙醇 . 2O.710 14 43.076 二乙酸甘油酯 一 6.669 l5 46.600 2-羟基一5.甲基苯乙酮 . 6.872 l6 46.624 对乙烯基愈疮木酚 . 9.524 17 48.818 5一乙酰基.2.甲氧基苯酚 . 6.685 18 48.963 2,3.二氢.3,5.二羟基一6一甲基.4H.吡喃一4一酮 一 4.631 19 49.515 3,5.二羟基一2一甲基.4H.吡喃。4.酮4.375 4.083 2O 50.080 甘油 3.728 . 21 50.644 2,4一二叔丁基苯酚 一 17.870 22 52.907 2一甲基.4.庚酮 一 5.5780 23 53.613 N-甲基.2.吡咯羧酸 一 10.420 24 55.218 异长叶烷酮 一 5.436 25 55.556 5-羟甲基糠醛 . 7.023 26 58.097 1,5,5.三甲基.6.(丙.2.烯.1.亚基)环己烯酮20.630 24.030 27 64.805 4.羟基.3.甲氧基苯乙醇 .45.940 28 65.949 棕榈酸 . 29.130 29 70.738 硬脂酸 一 29.610 注:“.’’表示未检出。 3结论 本研究采用糯米、红枣、无花果作为主要的发酵底物, 通过制备工艺优化获得了一种能提升卷烟香气和吃味品 质的混合发酵米酒烟用香料。实验得到的最优生产工艺为: 糯米:红枣:无花果质量 ̄LS:l:1,酒曲接种量1%,糖化温度 30 qC,糖化时间48 h,后发酵时间72 h,在此工艺条件下, 制备得到的烟用米酒香料能够有效增加卷烟“津”、“甜” 吃味,同时对刺激性及杂气具有良好的抑制和掩盖作用, 评吸得分可达90_3分。 经理化分析结果发现,该混合米酒香料中总糖含量为 总第306期 ・157. 206 g门L,总酸含量为4.2 g几,挥发性成分总量69.8%,均大 于米酒香料KB。采用GC.MS对烟用米酒香料进行了定量 分析结果发现,混合发酵米酒香料中致香物质种类可达 26种,明显多于米酒香料KB,包括杂环酮类、醛类、醇类及 有机酸类,特别是混合发酵米酒中的苯甲醇、苯乙醇、4.羟 基-3-甲氧基苯乙醇含量均达到了20 rng/L,起到了提高米 酒香料香气质量的作用。 参考文献: [1]孙俊良.功能性银杏糯米发酵浊酒的研究[J].食品科学,2004,25(11): 144—146. 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