6-羟基多巴胺帕金森病模型大鼠氧化应激反应

维普资讯 http://www.cqvip.com 中国组织工程研究与临床康复舅ＩＩ卷舅２　胄　２００７—０６－２４出版　Ｊｏｕｍａ／ｏｆＣ／ｉｎｉｃａ／Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｖｅ　ＴｉｓｓｕｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈ　Ｊｕｎｅ２４，２００７　Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．２５　基砖医学　６一羟基多巴胺帕金森病模型大鼠氧化应激反应　何建成’，袁灿兴　’Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ＴｒａｄｉｔｉｏＲａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　６－ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ　ｄｉｓｅａｓｅ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ．　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　ＭｅｄｉｃａＩ　Ｓｄｅｎｃｅｓ．　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ，／ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｍｅｄｉｄｎｅ．　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｓｈａｎｇｈａｉ　ＡｎＩ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓＵｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　６一ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ（６一ＯＨＤＡ）Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ　ｄｉｓｅａｓｅ（ＰＤ）ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．　ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｃ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒｆａｔｏｒｙ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　２０１２０３．　Ｃｈｉｎａ；　ＺＤｅｐａｔｎ￣ｅｎｔ　ｆｏ　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｌｏｎｇｈｕａ　Ｈｏｓｐ＿曲Ｉ　ａｆ　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｎｏａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．　Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０００３２．Ｃｈｉｎａ　Ｈｅ　Ｊｉａｎ－ｃｈｅｎｇ☆，　Ｄｏｃｔｏｒ，Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ．　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｆｏ　Ｔｒａｄｉｔｉｎｏａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｄｎｅ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ．　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ，／ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．　Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０１２０３．Ｃｈｉｎａ　ｈｅｊｃ８１６３＠１６３　ｃｏｍ　Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ：ｔｈｅ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏ　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｍｕｎｉｄｐａｌ　Ｅｄｕｃａｔｉｎｏ　Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ，　Ｎｏ．Ｏ５ＣＺ：Ｏ４．　Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２０Ｏ６－１１＿０３　Ａｃｃｅｐｔｄｅ：２００７－０．３－０３　’上海中医药大学基　础医学院中医诊断　教研室，上海市　２０１２０３；　上海中医　药大学附属龙华医　院神经内科，上海市　２００ｏ３２　何建成☆，男，１９６６　年生，甘肃省秦安县　人，汉族，２０ｏ２年上　海中医药大学毕业，　博士，教授，主要从　事　脑血管病的基　础与临床以度中医　证候的研究。　ａｈｊｃ８１６３＠１６３．ｃｏｒｎ　上海市教委科研基　全资助项目　（０５ＣＺ０４　’　中豳分类号：Ｒ７４２．５　文献标识码：Ｂ　文章簟号：１６７３　２２５　（２００７）２５－０４９２０－０３　收璃日期：２００６－１１＿０３　修回日期：２００７－０３－０３　（０６－５０－１　１－７９５６／Ｍ・Ｙ、　４９２０　ＴｒａｄｉｔｉｏｎａＩ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｆｍｍ　Ｊｕｎｅ　ｔｏ　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　ｉｎ　２００５．　Ｅｉｇｈｔｅｅｎ　Ｗｉｓｔａｒ　ｍａｌｅ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ＰＤ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ．６－ＯＨＤＡ（ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｓａｌｉｎｅ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　０．２　ｇ，Ｌ　ａｎｔｉｓｃｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄ）ｗａｓ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｒｉｇｈｔ　ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ　ｎｉｇｒａ（ＲＳＮ）．Ｔｅｎ　ｄａｙｓ　ｌａｔｅｒ，０．５　ｍｇ／ｋｇ　ａｐｏｍｏｒｐｈｉｎｅ　ｆＡＰＯ）ｗａｓ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ＩａｔｅｒａＩ　ｒｏｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｔｓ．Ｆｉｎａｌｌｙ　ｔｈｅ　ｒｏｔａｔｉｏｎ　ｃｉｒｃｌｅｓ　ｆｒ０ｍ　ｔｈｅ　ｓｔａｒｔｉｎｇ　ｐｏｉｎｔ　ｔＯ　３０　ｍｉｎｕｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ。ａｎｄ　ｔｈｏｓｅ　ｗｉｔｈ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　７　ｃｉｒｃｌｅｓ　ｐｅｒ　ｍｉｎｕｔｅ　ｏｎ　ａｖｅｒａｇｅ　ｗｅｒｅ　ｒｅｇａｒｄｅｄ　ａｓ　ｑｕａｌｉｉｆｅｄ　ＰＤ　ｍｏｄｅ１．Ｅｘｃｅｐｔ　ｆｏｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｍｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｎｏｒｍａＩ　ｓａｌｉｎｅ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　０．２　ｇ／Ｌ　ａｎｔｉｓｃｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄ。ｏｔｈｅｒ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｃｔｌｙ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅＩ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｏｎｌｙ　ｄｏｎｅ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｔｈｅ　ＡＰＯ．ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒｏｔａｔｉｏｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ。ｔｈｅ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｇｉｖｅｎ　ｗａｔｅｒ　ａｎｄ　ｆｏｏｄ　ｉｎｔａｋｅ　ｆｒｅｅｌｙ　ｆｏｒ　４５　ｄａｙｓ．Ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｄｅｃａｐｉｔａｔｅｄ．　Ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｉｎ　ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ　ａｒｅａ。　ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ），ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ），ＧＳＨ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＧＳＨ—Ｐｘ），ａｎｄ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈｒｏｍａｔｏｍｅｔｙｒ．　ＲＥＳＵＬＴＳ：　ＡＩＩ　ｔｈｅ　１　８　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ａｎａｌｙｓｉｓ．①Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＰＤ　ｍｏｄｅＩ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｅｌｅｖａｔｅｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅｓｅ　ｏｆ　ｎｏｒｍａＩ　ｏｃｎｔｒｏＩ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ【（４５１．１３＋７３．４２），（１３５．６２＋　５３．４６），（１６１．１５＋６１．１６）Ｕｌｍｇ，Ｐ＜０．０１］．￣）Ｔｈｅ　ＧＳＨ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＰＤ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｉｗｔｈ　ｔｈｅｓｅ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ【（４．２６＋０．７５），（７．０３＋１．３９），（７．０３＋１．４２）ｍｇ／ｇ，Ｐ＜０．０５］．③　Ｔｈｅ　ＧＳＨ—Ｐｘ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＰＤ　ｍｏｄｅＩ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅｓｅ　ｏｆ　ｎｏｒｍａＩ　ｃｏｎｔｒｏＩ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ【（３．０５±０．３８），（３．９６±０．３９），（３．７７±０．３８）ＮＵ／ｇ，Ｐ＜ｏ．ｏ１１．￣Ｔｈｅ　Ｓ０Ｄ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＰＤ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　Ｉｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　ｎｏｒｍａＩ　ｃｏｎｔｒｏＩ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ　【（１　３７＿７４±４．６５），（１　９ｏ＿７７±８．４７），　（１９９．７３＋８．２３）ＮＵ／ｍｇ，Ｐ＜０．０１】．（　ｈｅ　ＭＤＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＰＤ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｅｓｅ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ【（１０．９０＋２．１７），（４．１８￣２．８８），（４．５２￣２．４５）ｉ￣ｍｏｌ／ｇ，Ｐ＜ｏ．Ｏｌ】．　Ｃ０ＮＣＬＵＳＩｏＮ：Ｔｈｅ　ｍａｎｙ　ｓｉｇｎｓ　ｏｆ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｒａｔ　ｍｏｄｅＩ　ｏｆ　ＰＤ　ａｒｅ　ｓｕｇｇｅｓｔｉｖｅ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｏｃｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｅｔｉｏｌＯｇｙ　ｏｆ　ＰＤ．　Ｈｅ　ＪＣ，Ｙｕａｎ　ＣＸ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　６－ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ　ｙｕ　Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ　Ｋａｎｇｆｕ　２００７；１　１（２５）：４９２０－４９２２（Ｃｈｉｎａ）　［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ／ｚｇｌｃｋｆ／ｅｊｏｕｍａｌ／ｕｐｆｉｌｅｓ／０７－２５／２５ｋ－４９２０（ｐｓ）．ｐｄｆ］　摘要　目的：观察６一羟基多巴胺帕金森病大鼠模型的氧化应激反应及其可能的机制。　方法：实验于２ｏ０５—０６，１２在上海中医药大学科研实验中心完成。实验分组：Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠１８只，随机分为正常对照组、假　手术组、模型组，每组６只。实验干预：采用６一羟基多巴胺（溶于０．２　ｇ／Ｌ抗坏血酸的生理盐水中）注射于脑右侧黑质，１０　ｄ后以　腹腔注射阿朴吗啡０．５　ｍｇ／ｋｇ诱发大鼠向一侧旋转，记录开始旋转至３０　ｍｉｎ内的旋转圈数，以平均每分钟旋转圈数超过７次　者为合格的帕金森病模型。假手术组６只大鼠只注射含０．２　ｇ／Ｌ抗坏血酸的等量生理盐水，其余条件与造模组手术相同。正常　对照组６只大鼠只进行大鼠固定，不进行任何处理。在旋转诱发实验完成后，动物每天自由饮水与进食，共４５　ｄ。实验评估：应　用化学比色法测定大鼠中脑黑质纹状体部位活性氧、丙二醛、谷胱甘肽含量，谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶的活性。　结果：１８只大鼠均进入结果分析。①活性氧含量：模型组明显高于正常对照组和假手术组［（４５１．１３￣７３．４２），（１３５．６２￣５３．４６），　（１６１．１５￣６１．１６）Ｕｌｍｇ，Ｐ＜０．０１】。（　谷胱甘肽含量：模型组明显低于正常对照组和假手术组【（４．２６￣０．７５），（７．０３￣１．３９），　（７．０３￣１．４２）ｍｇ／ｇ，Ｐ＜０．０５】。③谷胱甘肽过氧化物酶活性：模型组明显低于正常对照组和假手术组【（３．０５￣０．３８），（３．９６￣　０．３９），（３．７７￣０．３８）ＮＵ／ｇ，Ｐ＜０．０１】。④超氧化物歧化酶活性：模型组明显低于正常对照组和假手术组【（１３７．７４￣４．６５），　（１９０．７７￣８．４７），（１９９．７３￣８．２３）ＮＵ／ｍｇ，Ｐ＜０．０１】。（　丙二醛含量：模型组明显高于正常对照组和假手术组【（１０．９０￣２．１７），　（４．１８￣２．８８），（４．５２￣２．４５）ｉ￣ｍｏｌ／ｇ．Ｐ＜０．０１１。　结论：帕金森病模型大鼠的氧化反应被激活，处于氧化应激状态，氧化应激反应增强可能是帕金森病的发病机制之一。　关键词：帕金森病；６一羟基多巴胺；氧化应激；疾病模型；大鼠　何建成，袁灿兴．６一羟基多巴胺帕金森病模型大鼠氧化应激反应【Ｊ】．中国组织工程研究与临床康复，２００７，１１（２５）：４９２０－４９２２　［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ／ｚｇｌｃｋｆ／ｅｊｏｕｍａｌ／ｕｐｆｉＩｅｓ『０　＿２５，２５ｋ＿４９２ｏｆｐｓ）．ｐｄｆ］　巴胺能神经元丧失、纹状体多巴胺含量显著减　０引言　少为其特点。最近的临床研究表明，帕金森病　患者处于氧化应激状态，氧化应激反应是帕金　帕金森病是以震颤、肌强直、运动减少和　森病的发病机制之一【１＿　。本实验观察６一羟基　姿势异常为特征的慢性神经系统变性疾病，多　多巴胺帕金森病大鼠模型的氧化应激反应，并　发生于中老年人。病理上以选择性中脑黑质多　探讨其可能机制。　Ｐ．０．Ｂｏｘ　１２００．Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１　１０００４　ｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ　ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｒｎ　维普资讯 http://www.cqvip.com 胂　２眦　Ｄ２　叠　ｋ册　ｆ２ｃＮ３３８　１５．０８　３。＠　Ｒｓｉｎａ．ｃ　ｏｒｎ　何建成，何建成，等６一羟基多巴胺帕金森病模型大鼠氧化应激反应　一羟基多巴胺帕金森藕模型大鼠氧化业撤及业　素，待动物清醒后放回饲养笼中饲养。　１材料和方法　蓦　曩　假手术组只注射含０．２　ｇ／Ｌ抗坏血酸的等　用６－羟基多巴胺　设计：完全随机分组设计。　单位：上海中医药大学基础医学院中医诊　内科。　断教研室，上海中医药大学附属龙华医院神经　诱发大鼠向一侧旋转，记录开始旋转至　间选择偏向不能　材料：实验于２００５—０６／１２在上海中医药　大学科研实验中心完成。实验动物：Ｗｉｓｔａｒ雄　性大鼠１８只，体质量１８０～２２０　ｇ，由上海中医　量生理盐水，其余条件与造模手术相同。正常　曩蓑釜妻薯量　对照组只固定大鼠，不进行任何处理。　摹、纹　掌　１０　ｄ后，以腹腔注射阿朴吗啡０．５　ｍｇ／ｋｇ　毒　冀弄　薹　３０　ｍｉｎ内的旋转圈数，以平均每分钟旋转圈　．发　蓥　数超过７次者为合格的帕金森病模型【７－引。从　曼　磊　蓥　囊　模型测试成功开始，大鼠共饲养４５　ｄ。　蠢　量蓑　行为学测试：４５　ｄ后，用阿朴吗啡再次诱　曩　羹　毳　药大学实验动物中心提供（动物合格证：沪动　导，观察大鼠旋转行为并记录。测试完毕后，立即　合证字１５２号）。随机分为正常对照组、假手术　断头取脑，４、心分离黑质，制备脑组织匀浆液。　组、模型组，每组６只。　脑组织匀浆液的制备：①取脑组织块０．５　ｇ　试剂：６一羟基多巴胺、阿朴吗啡、抗坏血酸　在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭　（美国Ｓｉｇｍａ公司）；活性氧、丙二醛、谷胱甘　干，放入１０　ｍＬ的小烧杯内。②在烧杯中加冷　肽过氧化物酶、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶试　的０．８６％盐水０．６５　ｍＬ，并用眼科剪尽快剪碎　剂盒由南京建成生物工程研究所提供。　脑组织块。③将剪碎的脑组织块悬液倒入匀　仪器：大鼠脑立体定位仪（ＴＯＷ－３Ａ型，广　浆管中，并加入冷的０．８６％生理盐水０．３　ｍＬ　东汕头市教育医学仪器厂）；旋涡混合器　进行充分匀浆。将匀浆液以４　０００　ｒ／ｍｉｎ离心　（ＸＷ－８０Ａ，上海医科大学仪器厂）；电热恒温　１５　ｍｉｎ。④将上清液置一２０℃冰箱中备用。　水温箱（ＨＨ・Ｗ２１・６００，上海跃进医疗器械　氧自由基检测方法：取适量上清液，按南　厂）；７２１型分光光度计（上海第三分析仪器　京建成生物工程研究所试剂盒说明书步骤进　厂）；离心机（８０－２，上海手术器械厂）；分析天　行测试。　平（Ｓ￣ｒｔｏｒｉｕｓ　ａｎｇｌｙｔｉｃ，９１０３２４）；微量进样器　主要观察指标：活性氧、丙二醛、谷胱甘肽　（５　Ｌ，上海第三分析仪器厂）；秒表（上海秒表　含量，谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶　厂，９２６２６６）。　活性。　设计、实施、评估者：为全部作者，均受过　统计学分析：所有资料均用　±ｓ表示，由　专业训练，采用盲法评估。　第一作者采用ＳＰＳＳ　１　０．０软件进行齐性检验。　方法：　模型制备【　】：雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，术前按常　２结果　规进行行为测试，确认无异常旋转行为后，氯　胺酮（８０　ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射麻醉。然后将大鼠固　２．１　实验动物数量分析　１８只大鼠均进入结　定于脑立体定位仪上，头部去毛，新洁尔灭常　果分析。　规消毒。无菌条件下，沿正中线切开大鼠颅顶　２．２帕金森病大鼠氧化应激反应指标的变化　皮肤，剥离骨膜，暴露前囟。以前囟为准，根据　见表１。　包新民等【５－。ｌ著大鼠脑立体定位图谱，确定右　侧黑质二坐标：①前囟后５．２　ｍｍ，正中线右侧　１．０　ｍｍ，硬膜下９．０　ｍｍ。（　前囟后５．２　ｍｍ，正　中线右侧２．５　ｍｍ，硬膜下８．５　ｍｍ。用颅骨钻于　手术要求部位小心钻开颅骨，用５　Ｌ微量进样　器将６一羟基多巴胺（溶于０．２　ｇ／Ｌ抗坏血酸的　生理盐水中）注入右侧黑质部（以１．０　ｍｍ／ｍｉｎ　速度缓慢进针），每孔３　，注射速度为１　Ｎ－／ｍｉｎ，　组别　．趣气　酶　（蠹　）　注射完毕后留针５　ｍｉｎ，然后以１．０　ｍｍ，ｍｉｎ　正常对麒组　伯Ｏ．７７±８．４　４．１８±２．８铲　假手未组　１９ｇ７３士８２　４．５２￣．４　速度缓慢退针。手术完成后，用医用明胶海绵　摸型组　１　３７．７４女４，６５　１Ｏ．９０　１７　填塞颅骨孔，缝合切口皮肤，肌肉注射庆大霉　与模型组比较．‘Ｐ《０．０５．　Ｐ，Ｏ．０１　沈阳１２００邮政信箱１１０００４　ｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ　ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ　机制，可以为・临　蓑震妻　入研　４９２１　维普资讯 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ＩＳＳＮ　１６７３－８２２５　ＣＮ　２１－１５３９１Ｒ　何建成。等６一羟基多巴胺帕金森病模型大鼠氧化应激反应　ｗｗ￣．ｚｇ／ｃｋｆｃｏｍ触　∞ｍ　从表１中可见，模型组活性氧与丙二醛含　解产物。丙二醛的高低间接反应了机体细胞受　癸誓言囊囊差差　量明显升高，谷胱甘肽过氧化物酶活性、谷胱　自由基攻击的严重程度。本实验结果表明，模型　应用要府　实验发　釜　蓑　主　甘肽含量、超氧化物歧化酶活性明显下降，与　动物丙二醛含量明显升高，与正常对照组及假　０１）。　三詈　塞凳嚣簧　正常对照组、假手术组比较，差异均有显著性　手术组比较，差异有显著性意义（Ｐ＜０．总之，由于帕金森病对自由基的清除功能　藁　裂　装　意义（尸＜０・０５，尸＜０・０’）。　据。同行　帕金　森病发病机制的　示帕金森病大鼠清除自由基的能力降低，导致　妻轰　耋　．　豢　先形成超氧阴离子，詈　蠹　皂　墼化星　景　反应。氧的吸收、不饱和脂类双键的重排以及　积累实验资料。　４９２２　降低，自由基的生成增多，最终导致了氧化应　３讨论　激反应。氧化应激反应可能是帕金森病的发病　机制之一。　在生物体内，脑组织更易受氧化反应及其　产生的自由基的损害，这是因为：①它含有大　４　参考文献　量的、高浓度的不饱和脂肪酸（其是脂质过氧　１　冯卫红．帕金森病与氧自由基【Ｊ】．中国药理学通报，２０００，１６（５）：　化反应的底物）。②大脑需要相对多的Ｏｚ供　４８１－４８４　２　Ｈｅ　ＪＣ．Ｙｕａｎ　ＣＸ．Ｗｅｉ　ＨＣ．Ｐｒｅｓｅｎｔ　Ｓｉｔｕａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ　应。③脑内自由基清除功能相对缺乏，例如它　０ｆ　ＴＣＭ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ‘ｓ　Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｚｈｏｎｇｙｉ　Ｚａｚｈｉ　几乎不含过氧化氢酶，与肝脏相比，它的谷胱　（Ｙｉｎｇｗｅｎｂａｎ）２００４，２４（４）：３０３・３０６　３　刘道宽，蒋雨平，江澄川．锥体外系疾病【Ｍ】．上海：上海科学技术　甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶及维生素Ｅ含量明　出版社．２０００：７孓８８　４　Ｕｎｇｅｒｓｔｅｄｔ　Ｕ．６－Ｈｙｄｒｏｘｙ－－ｄｏｐａｍｉｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　显为少。④有些脑区内铁的含量较高。以上几　ＣｅｎｔｒａＩ　ｍｏｎｏａｍｉｎｅ　ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｅｕｒ　Ｊ　ＰｈａｒｍａｃｏＩ　１９６８；５（１）：　１０７－１１０　点在黑质中表现的最为突出【。，　。　５　包新民，舒思云．大鼠脑立体定位图谱【Ｍ】、北京：人民卫生出版　本实验结果显示，６一羟基多巴胺模型组活　杜．１９９１：５３　６　何建成，袁灿兴，卫洪昌．６－羟基多巴胺制备帕金森病大鼠模型　性氧、丙二醛含量升高，谷胱甘肽、谷胱甘肽过　的神经行为学特点【Ｊ】ｌ中国临床康复杂志，２００５，９（２９）：６８－７０　７　Ｃａｒｍａｎ　ＬＳ．　Ｇａｇｅ　ＦＨ．　Ｓｈｕｌｔｓ　ＣＷ．ＰａｒｔｉａＩ　Ｉｅｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　氧化物酶、超氧化物歧化酶含量降低，提示帕　ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ　ｎｉｇｒａ：　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｅｘｔｅｎｔ　ｏｆ　ｌｅｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｏｔａｔｉｏｎａＩ　ｂｅｈａｖｉｏｒ．Ｂｒａｉｎ　Ｒａｓ　１９９１；５５３（２）：２７５．２８３　金森病大鼠的氧化反应被激活，处于氧化应激　８　Ｓａｎｃｈｅｚ－ｌｇｌｅｓｉａｓ　Ｓ．　Ｒｅｙ　Ｐ．　Ｍｅｎｄｅｚ－ＡＩｖａｒｅｚ　Ｅ．　ｅｔ　ａｌ　Ｔｉｍｅ－ｃｏｕｒｓｅ　ｏｆ　ｂｒａｉｎ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｄａｍａｇｅ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｒａｓｔｒｉａｔａＩ　状态，与文献报道一致【”　鄹。　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　６－ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ　ｉｎ　ａ　ｒａｔ　ｍｏｄｅＩ　ｏｆ　在脑内最重要的保护机制是谷胱甘肽系　ＰａｒｋＩｎｓｏｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ　Ｒａｓ　２００７；３２（１　１：９９－１０５　９　Ｄｅｘｔｅｒ　ＤＴ．Ｓｉａｎ　Ｊ．Ｒｏｓｅ　Ｓ．ｅｔ　ａ１．Ｉｎｄｉｃｅｓ　ｏｆ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　统。虽然过氧化氢酶亦有和谷胱甘肽系统相似　ａｎｄ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｄａＩ　ｆｕｎｃｌｉｏｎ　ｉｎ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｉｄｅｆｉｔａＩ　Ｌｅｗｙ　ｂｏｄｙ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎ　ＮｅｕｒｏＩ　１９９４　３５（１１：３　的功能，但在脑内的含量极低，故作用没有谷　１０　Ｓｉａｎ　Ｊ．Ｄｅｘｔｅｒ　ＤＴ．Ｌｅｅｓ　ＡＪ．　ｅｔ　ａ１．ＧＩｕｔａｔｈｉｏｎｅ．ｒｅｌａｔｅｄ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｉｎ　ｂｒａｉｎ　ｉｎ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎ　ＮｅｕｒｏＩ　１９９４；３６　胱甘肽系统明显【　。谷胱甘肽是抗氧化的小分　（３）：３５６－３６１　子物质，谷胱甘肽含量的多少是衡量机体抗氧　１１　Ｈ０　ＷＡ，　Ｔｕｒｅｔｚｋｙ　ＪＭ．　Ｊｏｎｇ　ＹＪ．　ｅｔ　ａ１．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ－ｔｒｉｇｇｅｒｄｅ　ｕｎｆｏＩｄｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｓ　ｕｐｓｔｒｅａｍ　ｏｆ　化能力的重要指标，谷胱甘肽能与Ｈ　反应生　ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ　ｃｅｌＩ　ｄｅａｔｈ　ｅｖｏｋｅｄ　ｂｙ　ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ　ｍｉｍｅｔｉｃｓ．　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ　２００６：９９（１）：５４．６９　成氧化型谷胱甘肽，从而清除氧自由基【仃　。　１２　Ｋｅｅｎｅｙ　ＰＭ，Ｘｉｅ　Ｊ．Ｃａｐａｌｄｉ　ＲＡ．ｅｔ　ａｌ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　本实验发现，模型动物脑中谷胱甘肽的含量降　ｂｒａｉｎ　ｍｉｔｃｏｈｏｎｄｄａｌ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｌ　ｈａｓ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅｌｙ　ｄａｍａｇｅｄ　ｓｕｂｕｎｉｔｓ　ａｎｄ　ｉｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ　ｉｍｐａｉｒｅｄ　ａｎｄ　ｍｉｓａｓｓｅｍｂｌｄｅ．　Ｊ　低，因而增加了细胞对氧自由基的易感性，且　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　２００６；２６（１９）：５２５６・５２６４　１　３　Ａｓａｎｕｍａ　Ｍ．　Ｍｉｙａｚａｋｉ　Ｉ．Ｄｉａｚ－Ｃｏｒｒａｌｅｓ　ＦＪ．ｅｌ　ａＩ．Ｑｕｉｎｏｎｅ　降低了突触囊泡对多巴胺的摄取，从而使自由　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｓ　ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ　ｎｅｕｒｏｎ．ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓ￣ｅｓｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｓｐｏｒａｄｉｃ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　基生成增加【伯ｌ。有研究也指出，谷胱甘肽的减　ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ－ｉｎｄｕｃａｄ　ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ．Ａｃｔａ　Ｍｅｄ　Ｏｋａｙａｍａ　２００４；　少在帕金森病症状出现之前就已发生【删。谷胱　５８（５）：２２１．２３３　１４　Ｃｈｏｉ　Ｊ．　Ｒｅｅｓ　ＨＤ．　Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ　ＳＴ．　ｅｌ　ａＩ．Ｏｘｉｄａｔｉｅｖ　甘肽过氧化物酶是机体内广泛存在的一种重　ｍｏｄｉｉｆａｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｕ．Ｚｎ・ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ　ａｎｄ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ　要的催化Ｈ２Ｏｚ分解的酶，对细胞结构和功能　ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｊ　ＢＩＯＩ　Ｃｈｅｍ　２００５；２８０（１２１：１　１６４８－１　１６５５　１５　朱晓临，童萼塘，孙圣刚．６－羟基多巴胺诱发大鼠帕金森病的实验　的完整具有重要的保护作用；超氧化物歧化酶　研究【Ｊ】ｌ河南诊断与治疗杂志，２００２，１９（５）：６－８　１６　Ｊｅｎｎｅｒ　Ｐ．　Ｏｌａｎｏｗ　ＣＷ　Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ　ｃｅｌＩ　ｄｅａｔｈ　ｉｎ　能清除Ｏ　，其活力的高低间接反应了机体清　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎ　Ｎｅｕｒｏｌ１９９８；４４（３　Ｓｕｐｐｌ１）：Ｓ７２—８４　除自由基的能力。本实验结果显示，谷胱甘肽　１７　Ｔｒｅｖｉｓａｎ　Ｍ．Ｂｒｏｗｎｅ　Ｒ．Ｒａｍ　Ｍ．ｅｔ　ａＩ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ　ｏｆ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｏｆ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔａｔｕｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａＩ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ａｍ　Ｊ　ＥｐｉｄｅｍｉｏＩ　过氧化　酶、超氧化物歧化酶的含量降低，提　２００１：１　５４（４）：３４８—３５６　１８　徐岩，曹学兵，孙圣刚，等．谷胱甘肽与帕金森病【Ｊ】．国外医学：老　年医学分册，２０００，２１（６）：２６４＿２６６　自由基生成增多。细胞的氧化反应中，通常首　１９　Ｄｒｕｋａｒｃｈ　Ｂ．Ｊｏｎｇｅｎｅｌｅｎ　ＣＡ．Ｓｃｈｅｐｅｎｓ　Ｅ．ｅｔ　ａ１．Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｉｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒａｎｕｌａｒ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｏｆ　ｄｏｐａｍｉｎｅ　ｉｎ　ｒａｔ　ＰＣ　１２　而生物膜中不饱和脂肪酸　ｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ　ｃｅｌｌｓ：　ｉｍｐｌｉａｃｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　０ｆ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　１９９６：１６（１９）：６０３８．６Ｏ４５　的氧化作用则导致了脂自由基的形成和延伸　２０　Ｓｏｔｏ－Ｏｔｅｒｏ　Ｒ．Ｍｅｎｄｅｚ－ＡＩｖａｒｅｚ　Ｅ．Ｈｅｒｍｉｄａ－Ａｍｅｉｊｅｉｒａｓ　Ａ．ｅｔ　ａＩ．Ａｕｔｏ）（ｊｄａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　６．ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｓｏｍｅ　ａｎｔｉｏｙＪｄａｎｔｓ：ｐｏｔｅｎｔｉａｆ　ｉｍｐｌｉａｃｔ／ｏｎ　ｉｎ　最终膜脂的降解，形成了包括丙二醛在内的降　ｒｅｌａ￣ｏｎ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ．　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ　２０（）０：７４（４）：１６０５．１６１２　Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ　１２００．Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１０００４　ｋｆ２３３８５０８３＠ｓ￣ｎａ．ｃｏｍ　ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ