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江西中医学院学报２ ０ ０ ７年８月第１ ９卷第４期 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦＪＩＡＮＧＸＩ ＵＮＩＶＥＲＳ １ ＯＦＴ口Ⅵ２００７ Ｖｏｌ １９ Ｎｏ．４ Ｊｉａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３０００６ ＡＩＮＩＩＩＡＣＴ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｂｅ ＨＰＬＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｏｆ Ｆｕｐｅｎｚｉ ｃｒｕｄｅ ｄｒｕｇｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ ｃ１８ｃｏｌｍｎｎ；ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ：１％ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ—ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｏｌ，ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｅ；ｆｌｏｗ ｒａｔｅ：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；ｗａｖｅ— ｌｅｎｇｔｈ：２６６ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｂｏｔｈ ｔｈｅ ＲＳＤ ｏｆ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ａｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ５％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｏｆ Ｆｕｐｅｎｚｉ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｆｕｐｅｎｚｉ ｃｒｕｄｅ ｄｒｕｇｓ． Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ：Ｆｕｐｅｎｚｉ；ＨＰＬＣ；Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ；Ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ 覆盆子为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子 图，考察了２０种市售药材ＨＰＬＣ谱图的相关性，建 立了覆盆子药材指纹图谱检测方法，为进一步完善 覆盆子质量标准奠定了基础。 １实验材料 Ｒｕｂｕｓ ｃｈｉｎｇｉｉ Ｈｕ的果实，因叶裂如掌也称掌叶覆 盆子，具有补肾固精，助阳缩尿的功效，除用于阳痿 早泻、遗精、。肾虚缩尿等症的治疗外，尚用于食疗和 保健。近年来有关药理实验证明，覆盆子具有抗诱 变［１ｌ，改善学习记忆能力，延缓衰老ｌ ２ｌ，增强免疫的 作用ｌ＿３ Ｊ。然而，国内外学者对覆盆子的成分和质量 １ １仪器色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ Ｃ】８色谱柱（４．６ ｒｎｌＴｌ×２５０ ｍｍ，５ ｐｔｍ）；美国Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱 仪（５１０泵，二极管阵列检测器），Ａｇｉｌｉｅｎｔ １１００液相 控制研究较少，并且均未从整体上表征覆盆子药材 品质特性。质量控制是中药现代化的第一步，而指 纹图谱技术是质量控制的关键。本文采用ＨＰＬＣ 法，研究了覆盆子药材甲醇提取物的高效液相色谱 色谱仪（紫外一可见检测器），Ａｇｉｌｉｅｎｔ １１００色谱工作 站；ＭＥ ｒＥＲ ＡＥ２４０电子天平；指纹图谱分析软 件：ＦＰＣＡＳＥ（Ｆｉｎｇｅｒ Ｐｒｉｎｔ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｓｓｉｓｔ Ｓｉｍｉｌａｒｉ— ｔｙ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ），中南大学化学化工学院中药现代化 基金项目：国家“十五”攻关项目资助（２００４ＢＡ７２１Ａ２３） ・４７・ 维普资讯 http://www.cqvip.com 江西中医学院学报２００７年第ｌ９卷第４期 研究中心（梁逸 教授小组）编写， 计算机运行环 境：赛扬１．７Ｇ，ＷＪＮＸＰ： 图谱整体性和模糊性的特点。从图１和图２可以看 出，供试液中主要成基本完全分离，并且，第１号峰 至第ｌ０号峰为各样品的共有峰。 １．２药材及试剂 甲醇为色谱纯，双蒸水（自制）， 其余试剂均为分析纯；共收集不同地区的２０个覆盆 子产地或市售药材，购买于同一地区的药材是在不 同时问购于 同药店，所购药材经我院褚小兰教授 鉴定为华东覆盆子（Ｒｕｂｕｓ ｃｈｉｎｇｉｉ Ｈｕ）。详见表１。 标准样品来源：中国药品生物检定所。 表１ 覆盆子样品来源 《 ：～ ．． 。 ： ．－÷ －… ０ 一 一 ｛ ‘ ｆ 一’’ 嘎 『 ３ ４ ５～．５０ － 。 图１ 不同地区２０个覆盆子样品ＨＰＬＣ指纹图谱 图２覆盆子ＨＰ１ 指纹图谱 ２方法与结果 ２．１供试液的制备取覆盆子粗粉０ ５ ｇ，精密称 定，加甲醇３（）ｍｌ， 流提取１、５ｈ，放冷，滤过，滤液 蒸ｆ，残渣片ｊ甲醇溶解并定容至ｌ０ ｍｌ，过０．４５ ｇｍ 微孔滤膜，为供试液 在２０个样品色谱图中，第７号峰保留时问和峰 面积均较其它峰相对稳定，故选定第７号峰为参照 峰，其他各峰的保留时间和峰面积分别与参照峰的 保留时间和峰面积相比，比值作为各峰的相对保留 时间（ＲＴ）和相对峰面积（ＲＳ），以考察方法的精密 度和稳定性。 本实验刖上述２（）个样品按本法制得２０个供试 品液进行ＨＰＩ （ 检测，得到１～２０号图谱。结果见 图１。 ２．４精密度及稳定性考察取供试液，进样６次， 依法检测ＨＰＬＣ色谱图，色谱图中第１～１０号峰的 流动相：甲醇（Ａ）和１％的醋酸水 ２ ２ 色谱条件相对保留时间和相对峰面积的ＲＳＤ见表３。表明 本方法精密度良好，１２ｈ内稳定性良好。 ２．５重现性试验精密称取上海１号药材６份，按 溶液（Ｂ）系统；柱温：３ｕ℃；流速：ｌｍｌ／ｍｉｎ；检测波 长：２６６ ｎｍ；进样量：ｌ０ ｌ；梯度洗脱条件见表２。 表２梯度洗脱条件 ２．１供试液制备方法制得供试液６份，依法检测分 别得色谱图。以第７号峰为内标，计算各峰的相对 保留时间和相对面积，色谱图中第１～１０号峰的相 对保留时间和相对峰面积的ＲＳＤ见表４。结果表 明，该方法重现性令人满意。 ２．３特征共有峰研究 比较２０个不同来源的覆盆 子药材甲醇提取物的ＨＰＬ（？图谱，可以看到各个图 谱所表现的峰形大致相同又有所不同，体现了指纹 － ２．６相似度分析将所得到的２０个样品的ＨＰＬＣ 图谱数据，采用国家药典委员会所推荐的中南大学 梁逸曾教授小组编写指纹图谱相似度评价软件进行 ４８ ・ 维普资讯 http://www.cqvip.com
评价。计算出相关系数和相合系数指标进行评价。 结果见表５。 表３覆盆子｝｛Ｉ，ＬＣ指纹图谱精密度和稳定性考察结果 表４覆盆子ＨＰＬＣ指纹图谱重现性试验结果 表５不同地点覆盆子指纹图谱的相似度分析结果 脱。 由于仪器的稳定性和试剂的差异性，即便是相 同仪器相同条件下的色谱也不可避免的存在漂移的 可能，因此，不同样本的同一组分很可能在保留时间 上有所差别。 本方法未采用外加内标或外标物为参照物，而 是以药材ＨＰＬＣ特征图谱中出峰时间稳定、面积适 中的某个共有峰为参照物建立特征共有峰群。尽管 目前尚不能确定该参照峰为何种化学成分，但以此 建立的特征峰群特征性强、稳定性好，可用于覆盆子 药材及其制剂的鉴别与质量评价，也可克服目前中 药研究中缺乏标准品的问题。 参考文献 ［１］付德润，钟承民，郭伟，等．覆盆子抗诱变作用的实验研究［Ｊ］．中 国全科医学杂志，１９９８，１（１）：３５－３７ ［２］朱树森，张炳烈，李文彬，等．覆盆子对衰老模型小鼠脑功能的影 由相似度数据可知：相关系数的中位数在 ０．９２８ １－－０．９９６ ４之问，相关系数的均值在０．９２２ ８ －响［Ｊ］．中医药学报，１９９８（３）：４２－４３ ［３］陈坤华，方军，宫斌，等．覆盆子提取成分促进淋巴细胞增殖作用 及与环核苷酸的关系［Ｊ］．上海免疫学杂志，１９９５，１５（５）：３０２～ ３０４ ０．９９７ ８之问，相合系数的中位数在０．９２３ ６～０． ９９７ ６之间，相合系数的均值在０．９１７ ５～０．９９８ ５ （收稿日期：２００７—０４—１８） 之问。总体来看，除２号样品外各个产地样品的相 ・４９・
