第３１卷第５期 龙岩学院学报 Ｖｏ１．３１ Ｎｏ．５ ２０１３年１０月 Ｊ０ＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｌ０ＮＧＹＡＮ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１３ 枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ生化指标 及抗体影响 何玉琴・一，林标声・ ，黄素华ｌＩ３，曹红云１，２，洪燕萍 ，， （１．龙岩学院；２．预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室； ３．福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心 福建龙岩 ３６４０１２） 摘要：试验旨在研究枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ的雏鸡血清生化指标及ＩＢＶ抗体水平 的影响。将１０８羽１ ｄ雏鸡随机分为６组，每组３个重复，每个重复６羽。第１４天时，除空白对 照组外，其余５组滴鼻感染ＩＢＶ。攻毒４８ ｈ后分别以０．Ｏ１％ｆｆｑ巴韦林，０．６％、０．８％和１．Ｏ％枇杷 叶提取物进行药物试验，阳性对照组不给药。结果表明：与阳性对照组相比，各药物试验组的尿 素氮、肌酐、天门冬氨酸转氨酶、乳酸脱氢酶及丙氨酸转氨酶差异显著（Ｐ＜Ｏ．０５）；在２８ ｄ时，枇 杷叶提取物各剂量组血清ＩＢＶ抗体水平差异极显著（尸＜０．Ｏ１）。本试验表明枇杷叶提取物对人 工感染ＩＢＶ的雏鸡肝功能及肾功能有显著保护作用，能提高ＩＢＶ抗体水平。且以０．８％的枇杷 叶提取物组为佳 关键词：枇杷叶提取物：鸡传染性支气管炎；生化指标；血清抗体 中图分类号：￥８５８．３１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４６２９（２０１３）０５—００５９—０４ 鸡传染性支气管炎ｆＡｖｉａｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ 毒和抗肿瘤等药理活性。［５－８］前人研究表明，枇 ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，ＩＢ）是由传染性支气管炎病毒（Ａｖｉａｎ 杷叶提取物中的２仪．１９仅一二羟基３一。一乌索 ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ。ＩＢＶ）引起的鸡的一种 酸具有抗ＨＩＶ活性，三萜酸类成分对ＥＢＶ— 急性，高度接触性传染病。ｉ１］该病常导致鸡群生 ＥＡ病毒也显示活性。［９１但有关枇杷叶提取物对 产性能下降。耗料增加，尤以雏鸡最为严重，已 ＩＢＶ的研究未见报道。因此，本试验以人工感染 经成为严重危害养禽业的重大传染病之一。由 ＩＢＶ雏鸡为研究对象。通过饮用不同剂量的枇 于ＩＢＶ毒株具有高度易变异和多血清型的特 杷叶提取物．研究其对人工感染ＩＢＶ雏鸡的血 点，给该病的免疫和防治带来了很大困难。因 清生化指标及ＩＢＶ抗体水平的影响，为枇杷叶 此，研制有效的防治药物具有重要意义。［２－３］枇 提取物防制该病的免疫机理和临床用药提供 杷叶为蔷薇科植物枇杷（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａ ａｐｏｎｉｃａ 理论依据。 （Ｔｈｕｎｂ．）Ｌｉｎｄ１．）的干燥叶。 枇杷叶提取物中含 １材料与方法 乌索酸、三萜酸、挥发油类、黄酮类、倍半萜及 １．１ 材料 糖苷类等化学成分，具有抗炎，止咳平喘、抗病 １ ｄ健康肉用型雏鸡：购自福建森宝食品 收稿日期：２０１３－０７—２４ 作者简介：何玉琴，女，福建福清人，龙岩学院生命科学院讲师，主要研究方向：中西兽医结合、天然药物的研究与应用。 通讯作者：洪燕萍，女，福建同安人，龙岩学院生命科学院教授，主要研究方向：植物天然产物。 基金项目：福建省龙岩市科技计划项目（２０１０ＬＹ３４）；福建省科技计划重点项目（２０１２Ｎ００１９）。 ５９ 枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ生化指标及抗体影响 集团股份有限公司。 （ＡＳＴ）、丙氨酸转氨酶（Ａ ）指标检测。检测方 法按照试剂盒说明书进行。 枇杷叶提取物：枇杷叶采自福建莆田，洗 净阴干粉碎成枇杷叶干粉。枇杷叶干粉用９５％ 工业酒精冷浸提取和用大孑Ｌ树脂ｘ一５初步纯 化获得枇杷叶提取物。 鸡传染性支气管炎病毒：ＩＢＶ标准株 Ｍ４１Ｅ４，由华南农业大学动物医学禽病研究所 馈赠。本毒株在鸡胚上经过５次传代，测定胚 毒的ＥＩＤ５０为１０－５．２／０．１ ｍＬ。 １．２试验方法 １．４．２ ＩＢＶ抗体测定 雏鸡于２５、２８ ｄ时，每组随机选取２羽，翼 根静脉采血，分离血清，采用ＥＬＩＳＡ方法检测 血清中１ＢＶ抗体水平，方法和步骤严格参照试 剂盒说明书进行。计算抗体滴度，当抗体滴度大 于３９６为ＩＢＶ抗体阳性，小于３９６为ＩＢＶ抗体 阴性。 １．５ 数据统计与处理 将１ ｄ雏鸡１０８羽随机分为６组，空白对 照组，阳性对照组，利巴韦林试验组，低、中、高 不同浓度枇杷叶提取物试验组。每组６羽，设３ 用统计软件包ＳＰＳＳ１７．０软件对数据进行 分析，Ｐ＜０．０５为差异显著，结果以平均数±标准 差（Ｘ＿＋ＳＤ）表示。 ２ 结果 ２．１ 批杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ雏鸡生化 指标的影响 个重复。试验雏鸡饲养至１４ ｄ时，除空白对照 组外，其余５组均用１００ＥＩＤ∞ＩＢＶ滴鼻染毒处 理，每羽攻毒０．３ ｍＬ。待攻毒４８ ｈ出现轻微咳 嗽、精神不振等症状后。给染毒鸡饮水给药 ０．５ ｍＬ，药物浓度分别为０．０１％利巴韦林， ０．６％、０．８％和１．０％枇杷叶提取物，２次／ｄ，连用 ７ ｄ．阳性对照组不给药。 １．３饲养管理 由表１可看出，与空白对照组相比，阳性 对照组的ＢＵＮ、ＣＲＥ、ＡＳＴ、ＡＬＴ和ＬＤＨ均极显 著提高（尸＜Ｏ．０１）。与阳性对照组相比，利巴韦 林试验组和不同浓度枇杷叶提取物试验组的 ＢＵＮ、ＣＲＥ、ＡＳＴ、ＡＩＪｒｒ和ＬＤＨ均能显著降低 （Ｐ＜０．０５）。与利巴韦林治疗组相比，０．６％枇杷 以稻壳作为垫料，肉鸡饲养在环境相似、 通风良好的场地，空白对照组隔离饲养。每栏装 有室内温度计与保温灯，通过鸡群反应和温度 计来调整保温灯与鸡群距离。自由饮水和采食。 １．４测定指标与方法 叶提取物组的ＣＲＥ、ＡＳＴ、ＡＬＴ和ＬＤＨ差异不 显著（Ｐ＞０．０５），０．８％枇杷叶提取物组的ＡＳＴ和 Ａ 差异显著（Ｐ＜０．０５）。０．８％和１．０％枇杷叶 提取物组之间相比，ＢＵＮ、ＣＲＥ、ＡＳＴ和ＬＤＨ虽 １．４．１生化指标的测定 雏鸡于２８ ｄ时。每组随机选取２羽．翼根 差异不显著。但以０．８％的枇杷叶提取物组降低 效果更好。 ２．２枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ雏鸡抗体 水平的影响 静脉采血，分离血清，用于尿素氮（ＢＵＮ）、肌酐 （ＣＲＥ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、天门冬氨酸转氨酶 表１ 枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ雏鸡生化指标的影响 注：同一列不同上标表示差异显著（Ｐ＜０．０５），表２同。 ６０ 枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ生化指标及抗体影响 由表２可得．空白对照组中ＩＢＶ抗体滴度 为阴性，阳性对照组ＩＢＶ抗体滴度虽然显著增 加，但只在２８ ｄ时为阳性。雏鸡感染ＩＢＶ并给 以枇杷叶提取物试验后，０．８％和１．０％枇杷叶 性低且含量相对稳定。在本试验中阳性对照组 的ＬＤＨ、Ａ 和ＡＳＴ等指标较空白对照组均显 著升高（Ｐ＜０．０５），说明ＩＢＶ可损伤肝细胞。而与 阳性对照组相比枇杷叶提取物试验组，能显著 提取物试验组的血清ＩＢＶ抗体滴度升高明显， 均为抗体阳性，且各日龄与阳性对照组相比均 差异极显著（Ｐ＜０．０１）。但０．６％枇杷叶提取物 组的抗体只在２８ ｄ表现为阳性。各药物试验组 降低ＬＤＨ、ＡＬＴ和ＡＳＴ等指标（Ｐ＜０．０５），这说明 枇杷叶提取物中的三萜酸和齐墩果酸具有抗 炎性反应作用．可以减轻损伤后炎性反应对肝 细胞的损害，能够保护肝脏的合成、代谢功能。 间．０．８％和１．０％枇杷叶提取物试验组明显高 于利巴韦林组试验组和０．６％枇杷叶提取物试 验组．但０．８％和１．０％枇杷叶提取物组之间差 异不显著（Ｐ＞０．０５）。 表２枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ雏鸡抗体 水平的影响 ３ 讨论 ３．１ 枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ雏鸡生化 指标的影响 尿素氮（ＢＵＮ）和肌酐（ＣＲＥ）是反映肾脏功能 的两个重要指标，因此，ＢＵＮ和ＣＲＥ浓度在一 定程度上可反映肾功能的损害程度。＿ｌ０ｌ本试验 中阳性对照组鸡的ＢＵＮ和ＣＲＥ与空白对照组 相比均有显著升高（Ｐ＜０．０５），说明当鸡感染ＩＢＶ 后．鸡的‘肾实质受损，滤过增多，血液中ＢＵＮ和 ＣＲＥ含量升高。与阳性对照组相比枇杷叶提取 物组能显著降低血液中ＢＵＮ和ＣＲＥ含量（Ｐ＜ ０．０５１，这说明枇杷叶提取物能促进尿中尿素 氮、尿酸的排泄，改善了鸡只的肾小球过滤功 能，对鸡的肾脏损害起到很好疗效。 丙氨酸转氨酶（ＡＩＪＴ１、天门冬氨酸转氨酶 （ＡＳＴ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）等血清酶类主要分布 于机体的肝和肾中。是反映肝肾功能的重要生 化指标。ｌｌ１，ｔｚ１在正常情况下，血清中这些酶活 本试验的结果与前人报道的相似．田丽婷＿１３ｌ等 研究报道枇杷叶中的齐墩果酸具有护肝、解毒 作用，并能对ＣＣＬｑ引起的急慢性肝炎损伤有明 显保护作用，其显著降低ＡＬＴ和ＡＳＴ的活性， 能防止实验性肝硬化的发生。 ３．２枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ雏鸡抗体 水平的影响 抗体水平是反映机体体液免疫在抗御感染 过程的重要指标。＿ｌ４】本试验中在２８ ｄ时，各枇 杷叶提取物治疗组与阳性对照组差异极显著 （Ｐ＜０．０１），提示枇杷叶提取物可以增强鸡的免 疫应答反应，提高机体的抗感染能力，从而对 鸡群产生有效的保护作用。这可能与枇杷叶提 取物含有三萜酸和黄酮类有效成分有关。三萜 酸和黄酮类有效成分可通过激活单核一巨噬细 胞系统，诱生多种细胞因子，如促进干扰素 （ＩＦＮ）和白细胞介素（ＩＬ）生成，表现出良好的抗 病毒活性．促进单核细胞、造血干细胞及粒细 胞等的转化和增殖，促进Ｂ细胞产生血清抗 体。本试验的结果也与前人报道结果相似，葛 金芳 】等研究报道枇杷叶三萜酸给药能改善 环磷酰胺（ｃｖ）诱导的免疫低下小鼠碳廓清指 数和吞噬指数的降低；提高ｃｙ诱导的免疫低 下小鼠血清免疫球蛋白Ｍ（ＩｇＭ）和免疫球蛋白 Ｇ（ＩｇＧ）的生成，增加ｃｙ诱导的免疫低下小鼠脾 细胞溶血素的产生；增强Ｃｙ引起的免疫功能 低下小鼠的迟发性变态反应，提示枇杷叶中三 萜酸具有良好的免疫调节作用。 参考文献： 【１】张丹俊，胡晓苗，程宝艳，等．鸡传染性支气管 ６１ 枇杷叶提取物对人工感染ＩＢＶ生化指标及抗体影响 炎临床症状和病理变化【Ｊ】＿兽医导刊杂志，２００９（１１）： ２８－３０． ｊａｐｏｎｉｃａ ｃａｌｌｉ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２（３）：３１５－３２３． ［１０］何颖，刘伟，陈中伟，等．中药“金花液”防治鸡 传染性支气管炎对鸡血液生化指标的影响…．安徽农 业科学，２００８（１）：２１１—２１３． ［２］李建丽，张金花，尤永军．鸡传染性支气管炎的 分型及防控［Ｊ］．兽医导刊，２０１０（６）：６３—６４． ［３］王靖，任家琰．中药方剂对传染性支气管炎的 疗效研究【Ｊ１＿山西农业科学，２００９（１１）：４８—４９． ［１ｌ】尹秀玲，牛发良，杨玉成，等．中药“双炎散”对 人工感染传支病毒后鸡某些生化指标的影响『Ｊ１．畜牧 与兽医，２００４（１１）：３３—３４． ［１２１赵香汝，苏杰，李喜旺，等．人工感染传染性支 气管炎病毒对鸡血清生化指标的影响…．安徽农业科 学，２００７（１１）：３２６７—３２６８． ［４］何英姿．枇杷叶有效成分提取及药理作用研究 ［Ｊ】．广西工学院学报，２００７（２）：８１—８２． ［５］李婷，林文津，徐榕青，等．枇杷叶的化学成分 和药理作用研究【Ｊ】．中国野生植物资源，２ＯＬＯ（５）：１３—１４． 【６】刘传安，邹盛勤，陈武．枇杷叶化学成分、药理 作用及其应用研究进展【Ｊ］．安徽农业科学，２００５，３３ （１１）：２１１７－２１１８． ［１３】田丽婷，马龙，堵年生．齐墩果酸的药理作用 研究概况［Ｊ］．中国中药杂志，２００２（１２）：８８４． ［１４］邱妍，胡元亮，崔保安，等．怀牛膝多糖对雏鸡 疫苗免疫效果的影响［Ｊ】．畜牧兽医学报，２００７（７）：７２７— ７２７． 【７］Ｃｈｅｎ Ｊ，Ｉｊ ｗ Ｌ，Ｗｕ Ｊ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｌｏｑｕａｔ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８（１５）：９８—１０２． 【１５］葛金芳，李俊，胡成穆，等．枇杷叶三萜酸的免 疫调节作用研究［Ｊ］．中国药理学通报，２００６（１０）： １１９４－１１９８ 【８］葛金芳，李俊，姚宏伟，等．枇杷叶三萜酸的抗 炎作用［ＪＪ＿安徽医科大学学报，２００７（２）：１７４—１７８，２１４． 【９］Ｓｈｏｋｏ Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｙｏｋｏ Ｉｍａｙｏｓｈｉ，Ｅｆｔ Ｋｏｈａｙｓｈｉ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ ｂｙ Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａ ［责任编辑：黄素华］ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｌｏｑｕａｔ Ｌｅａｆ Ｅｘｔｒａｃｔ ｏｎ Ｓｅｒｕｍ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｅｘｅｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｃｈｉｃｋｓ ｂｙ Ａｒｔｉｉｃｉａｌ Ｔｅｓｔ ｗｉｔｈ ｍＶ ｆＨＥ Ｙｕ—ｑｉｎ，ＬＩＮ Ｂｉａｏ—ｓｈｅｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｓｈｕ—ｈｕａ，ＣＡＯ Ｈｏｎｇ—ｙｕｎ，ＨＯＮＧ Ｙａｎ—ｐｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｏｑｕａｔ ｌｅａｆ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｎ ｓｅｒｕｍ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｅｘｅｓ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｈｉｃｋｓ ｂｙ ａｒｔｉｉｆｃｉａｌ ｔｅｓｔ ｗｉｔｈ ＩＢＶ，１０８ ｏｎｅ ｄａｙ－ｏｌｄ ｃｈｉｃｋｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｉｎｔｏ ６ ｇｒｏｕｐｓ，ｗｉｔｈ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｐｅｒ ｇｒｏｕｐ，ｅａｃｈ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｓｉｘ ｂｉｒｄｓ．Ａｔ ｔｈｅ ａｇｅ ｏｆ １４ ｄａｙｓ，ｅｘｃｅｐｔ ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ５ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｉｎｔｒａｎａｓａｌ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｖｉａｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ．Ｉｎ ４８ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ，０．０１％ｒｉｂａｖｉｒｉｎ，０．６％，０．８％ａｎｄ １％ｌｏｑｕａｔ ｌｅａｆ ｅｘｔｒａｃｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｎｏｔ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ＢＵＮ，ＣＲＥ，ＡＬＴ，ＬＤＨ ａｎｄ ＡＳＴ ｉｎ ｅａｃｈ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ａｔ ｔｈｅ ａｇｅ ｏｆ ２８ ｄａｙｓ，ｅａｃｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｌｏｑｕａｔ ｌｅａｆ ｅｘｔｒａｃｔ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｅｖｅｌｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｌｏｑｕａｔ ｌｅａｆ ｅｘｔｒａｃｔ ｈａｄ ａｎ ｏｂｖｉｏｕｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ＩＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｃｋｅｎ ａｂｏｕｔ ｈｅｐａｔｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｎａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｌｅｖｅｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ０．８％ｏｆ ｌｏｑｕａｔ ｅｘｔｒａｃｔ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｂｅｓｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｌｏｑｕａｔ ｌｅａｆ ｅｘｔｒａｃｔ；ａｖｉａｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ；ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ；ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ６２
