气相色谱法测定头孢妥仑匹酯中N,N-二甲基甲酰胺残留量

王晨; 李东伟; 崔晨辉; 王晶; 王彦广 【期刊名称】《《中国抗生素杂志》》 【年(卷),期】2019(044)010 【总页数】4页(P1163-1166)

【关键词】头孢妥仑匹酯; N;N-二甲基甲酰胺; 气相色谱法 【作 者】王晨; 李东伟; 崔晨辉; 王晶; 王彦广

【作者单位】浙江大学 杭州310027; 浙江华方药业股份有限公司 台州318020 【正文语种】中 文 【中图分类】R978.1

头孢妥仑匹酯是日本明治制果株式会社研发的口服头孢菌素[1]，于1994年4月在日本上市，2001年4月在中国上市，商品名为美爱克(Meiact)。头孢妥仑对革兰阳性菌及革兰阴性菌具有广泛而强大的抗菌作用，对临床主要感染病菌的体外活性要优于头孢地尼和头孢呋辛，具有抗菌谱宽、临床疗效确切，安全稳定，口服吸收好、血药浓度高、体内分布广等特点，临床应用广泛[2-4]。

头孢妥仑匹酯已经收录于日本药典(JP)17[5]和韩国药典第十版[6]，但是并没有对其残留溶剂进行规定，中国药典2015年版也没有对头孢妥仑匹酯进行规定。在头孢妥仑匹酯的生产工艺中主要使用了二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、DMF等多种有机溶剂[4,7-9]，根据中国药典的要求—“如生产过程中引入或产品中残留

有机溶剂，均应按通则‘残留溶剂测定法’检查并应符合相应溶剂的限度规定”[10]，有必要对头孢妥仑匹酯的的残留溶剂进行检测。DMF在中国药典和《残留溶剂的指导原则》(ICH Q3C)中被定义为第二类溶剂，为应使用，能导致动物非遗传毒性致癌或可能导致其他不可逆毒性反应的试剂，规定其限度为0.088%[11-12]。原料药中DMF残留量的检测方法已经有较多的研究和报道，主要运用气相色谱法进行检测，由于DMF的沸点较高，基本采用直接进样的方式[13-16]，但目前尚未见头孢妥仑匹酯中DMF残留量检测方法的报道。本文参考中国药典2015年版通则0861残留溶剂检查法[11]和相关文献[17-18]，建立了气相色谱法测定头孢妥仑匹酯中DMF残留量的方法，该方法简便、准确、灵敏。 1 仪器与试药

Agilent 70B气相色谱仪(美国Aglient公司)；ME204E电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)。

头孢妥仑匹酯(浙江华方药业股份有限公司提供，批号：180501、180502和180503)；N,N-二甲基甲酰胺(DMF，Merck，色谱纯)；二甲基亚砜(DMSO，Honeywell，色谱纯)。 2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱：DB-624(30m×0.53mm,3.0μm)；检测器：FID；柱温：程序升温，初始柱温110℃，保持5min，再以30℃/min的速率升至200℃，保持5min；进样口温度：230℃；检测器温度：250℃；载气：N2；载气流速：3.0mL/min；进样体积：1.0μL；分流比：2:1。 2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液的配制

精密称取DMF 44.4mg，置于100mL量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀，作

为对照品储备液；精密量取对照品储备液5mL，置于50mL量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 2.2.2 供试品液的配制

取供试品500.0mg，精密称定，置于10mL量瓶中，加DMSO使其溶解，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2.2.3 供试品和对照品混合溶液的配制

取供试品500.0mg，精密称定，置于10mL量瓶中，加对照品溶液使其溶解，稀释至刻度，摇匀，作为供试品和对照品混合溶液。 2.3 专属性考察

取对照品溶液、供试品溶液、供试品和对照品混合溶液以及空白溶剂DMSO分别进样，记录色谱图。结果表明，空白溶剂对供试品测定无干扰，各色谱峰之间的分离度均大于1.5，各组分分离良好，供试品中其他组分对测定结果不影响，方法专属性好，色谱图见图1。 2.4 检测限和定量限的测定

取对照品溶液，逐步稀释至相关浓度，使DMF的信噪比(S/N)为3.0时，即为DMF的检测限，浓度为0.777μg/mL，换算样品浓度后为0.002%；使DMF的信噪比约为10.0时，即为DMF的定量限，浓度为2.6μg/mL，换算样品浓度后为0.005%。取定量限溶液，连续直接进样6针，峰面积RSD为0.47%，符合要求，色谱图见图2。

图1 专属性考察色谱图Fig.1 Chromatograms of specificity testA：空白溶剂；B：对照品溶液；C：供试品溶液；D：供试品和对照品混合溶液 2.5 线性与范围试验

精密量取对照品储备液0.5、2.5、4.0、5.0、6.00和7.5mL，分别置于50mL量瓶中，加DMSO稀释，配制成10%、50%、80%、100%、120%和150%浓度

的溶液，摇匀，进样分析，记录色谱图。以峰面积Y为纵坐标，浓度X(μg/mL)为横坐标，进行线性回归，得线性方程：Y=1.1867X+0.77739，r=0.9993，表明DMF浓度在4.44～66.60μg/mL范围内，峰面积与浓度线性关系良好，结果见表1和图3。

2.6 准确度(回收率)试验

图2 定量限测定色谱图Fig.2 Chromatograms of the limit of quantitation 表1 线性试验结果Tab.1 Linear test result编号 浓度X/(μg/mL)峰面积Y 回归方程及相关系数1 4.44 5.4249 Y=1.1867X+ 0.7773 r=0.9993 2 22.20 27.4855 3 35.52 42.8258 4 44.40 54.6225 5 53.28 63.9922 6 66.60 79.0181 图3 DMF的标准曲线Fig.3 Standard curve of DMF

精密量取对照品储备液0.8、1.0和1.2mL，分别置于10mL量瓶中(约相当于限度的80%、100%和120%)，加入已测定DMF残留量的供试品(180503，未检出)约500.0mg，精密称定，用DMSO溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率测试液，每个浓度配制3份，直接进样，记录色谱图，计算DMF的量、回收率，平均回收率和RSD，结果见表2。表明DMF的回收率都在95%～105%，平均回收率为100.72%，回收率的相对标准偏差为1.76%，符合要求。 2.7 精密度(重复性)试验

按对照品溶液的配制方法配制对照品溶液，进样测定分析，平行操作6次，结果DMF峰面积的RSD为1.09%(n=6)，表明该方法精密度良好，结果见表3。 2.8 耐用性考察

在其他条件不变的情况下，考察了流速为2.8和3.2mL/min，起始柱温为105和115℃，更换同一型号不同编号的色谱柱时，测试结果的变化。结果表明，在以上条件下，获得的色谱图中各溶剂峰理论塔板数均大于5000，各色谱峰之间的分离度均大于1.5，对照品溶液中DMF峰面积RSD均符合规定，方法耐用性良好，结

果见表4。 2.9 样品的测定

按供试品溶液的配制方法配制供试品溶液，进样测定，记录色谱图，采用外标法计算样品中DMF的残留量，结果见表5。 3 讨论

表2 DMF回收率数据Tab.2 Results of recovery test of DMF编号 加入量/mg测得总量/mg供试品含量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%1 35.52 35.85 0 35.85 100.93 100.72 1.76 2 35.52 34.65 0 34.65 97.55 3 35.52 36.45 0 36.45 102.62 4 44.40 45.21 0 45.21 101.82 5 44.40 44.79 0 44.79 100.88 6 44.40 44.6 0 44.6 100.45 7 53.28 53.79 0 53.79 100.96 8 53.28 52.42 0 52.42 98.39 9 53.28 54.8 0 54.8 102.85

表3 精密度试验数据Tab.3 Results of precision test组分名称 DMF 1-峰面积 49.4903 2-峰面积 50.5709 3-峰面积 50.0080 4-峰面积 50.9125 5-峰面积 50.1262平均峰面积 50.2216峰面积RSD/% 1.09

表4 耐用性试验结果Tab.4 Results of durability test项目 流速/(mL/min)起始柱温/℃ 更换同类型色谱柱2.8 3.2 105 115峰面积 1 51.6297 52.2746 46.7447 50.3145 47.1631 2 50.4331 49.0582 48.4056 48.87 48.7515 3 50.5757 49.6807 48.0088 49.1602 48.9533 4 49.9217 49.4797 49.3907 51.2957 52.0608 5 52.2066 51.9113 47.2950 50.7790 48.8503 6 53.7934 50.1158 49.46 51.0850 49.2454平均 51.4267 50.4200 48.2185 50.2518 49.1707 RSD/% 2.78 2.67 2.28 2.02 3.24理论塔板数N 37341.0408 19179.8806 33812.6947 22474.5911 14162.2220

表5 样品检测结果Tab.5 Results of sample analysis批号 称重/mg DMF残留量/%180501 501.2 0.007 180502 500.6 0.013 180503 500.9 未检出

3.1 色谱柱的选择

头孢妥仑匹酯在生产中曾使用二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、DMF等多种有机溶剂，在选择色谱柱时重点考察了拖尾因子，排除其他溶剂对测定的干扰。实验中先后尝试了HP-5和DB-1毛细管柱，发现拖尾因子均大于3，拖尾严重。使用DB-624色谱柱时，DMF峰形明显改善，其理论塔板数和拖尾因子都好于前两种色谱柱，符合要求。而且二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯和乙醇等有机溶剂对测定无影响，适用于检测DMF的残留量。 3.2 溶剂的选择

头孢妥仑匹酯不溶于水，溶于DMF、N,N-二甲基乙酰胺和二甲亚砜，因测定DMF残留，不能使用DMF作溶剂。采用N,N-二甲基乙酰胺作溶剂时，由于N,N-二甲基乙酰胺中含有DMF，同样会对测定有干扰。因此，选择二甲亚砜作为溶剂。 3.3 柱温的选择

本方法采用程序升温，首先以初始柱温110℃保持5min，再以30℃/min的速率升至200℃保持5min，可以缩短测定时间，较快除去残留溶剂，避免影响后续样品的测定。 参考文献

【相关文献】

[1]张明发.头孢妥仑匹酯的抗菌活性[J].上海医药,2005,26(7):307-310. [2]吕俊玲,刘志鹤,封宇飞.美爱克[J].中国新药杂志,2003,12(3):221-222.

[3]朱希,高浩凌,范钢,等.头孢妥仑匹酯有关物质的合成及其结构确证[J].中国抗生素杂志,2019,44(1):83-87.

[4]戴伟中,谢斌,范钢,等.头孢妥仑匹酯的合成[J].中国医药工业杂志,2015,46(8):803-805.

[5]日本药局方编辑委员会.日本药典(JP XVII)[S].东京:日本厚生劳动局,2016:618-619. [6]韩国食品药品管理局.韩国药典(KPX)[S].韩国食品药品管理局出版社,2012:241-243. [7]赵志全,张乃华,冯晓亮,等.一种头孢妥仑匹酯的制备方法:CN,104513256A[P].2015-04-15. [8]王作弟.一种头孢妥仑匹酯的制备方法:CN,106366097A[P].2017-02-01.

[9]陈林,石克金,李江红.头孢托仑酯合成路线图解[J].国外医药抗生素分册,2009,30(6):280-283. [10]国家药典委员会.中国药典[S].(2015年版四部).北京:中国医药科技出版社,2015:XI. [11]国家药典委员会.中国药典[S].(2015年版四部).北京:中国医药科技出版社,2015:105-109. [12]胡昌勤.药物残留溶剂分析[M].北京:化学工业出版社,2009:4-6.

[13]鲁瑞娟,李立俭,曹晓云.气相色谱法测定盐酸头孢卡品酯中二甲基甲酰胺和苯甲醚残留量方法研究[J].天津药学,2014,26(4):9-10.

[14]阮昊,陈悦.气相色谱法测定比卡鲁胺中残留溶剂二甲基甲酰胺[J].中国执业药师,2015,12(7):9-15.

[15]孙婷,姜建国,刘云.气相色谱法测定比沙可啶原料药中残留的N,N-二甲基甲酰胺[J].华西药学杂志,2016,31(6):629-630.

[16]徐丽萍,吴嵘,翁志斌.克林霉素磷酸酯原料中N,N-二甲基甲酰胺测定的方法学考察[J].抗感染药学,2012,9(1):41-43.

[17]王埕.检测头孢克洛原料中二甲基甲酰胺残留量的气相色谱法的建立[J].中国抗生素杂志,2015,40(10):752-755.

[18]陈国新,刘文华.头孢特仑新戊酯原料药中有机溶剂的残留量分析[J].抗感染药学,2010,7(2):108-110.