维普资讯 http://www.cqvip.com 天津医药２００７年７月第３５卷第７期 ５０９ 黄芪、水蛭含药血清对大鼠肾小球系膜 细胞产生ＴＧＦ—Ｉ３１的影响 郑宏 翟文生 任现志 汪受传 摘要 目的：观察黄芪、水蛭及其不同比例方剂含药血清，对体外培养大鼠系膜细胞（ＭＥ）产生的转化生长因子 （ＴＧＦ）一１３１的影响。方法：将大鼠系膜细胞随机分为９组：阴性对照组、阳性对照组、空白组、黄芪高剂量组、低剂量组、 水蛭高剂量组和低剂量组、水蛭低剂量黄芪高剂量组、水蛭高剂量黄芪低剂量组。每组设５个复孔，取培养上清液，采 用ＥＬＩＳＡ法检测各组大鼠ＭＣ分泌ＴＧＦ一１３１的含量。结果：阳性对照组ＴＧＦ一１３１含量明显升高，与阴性对照组相比差 异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。中药各含药血清ＴＧＦ一１３１表达量均低于空白血清组（Ｐ＜０．０１），以水蛭高剂量黄芪低剂量 组最低，其次是水蛭高剂量组，水蛭高剂量组低于水蛭低剂量组（Ｐ＜０．０１）。结论：水蛭和以水蛭为主药的方剂在抑制体 外培养的大鼠ＭＣ分泌ＴＧＦ一１３１作用方面强于黄芪和以黄芪为主药的方剂。 关键词黄芪水蛭肾小球转化生长因子Ｂ血瘀 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｒａｄｉｘ Ａｓｔｒａｇａｌｉ ａｎｄ Ｓａｎｇｕｉｓｕｇｅ Ｓｅｒｕｍ ｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ ＦａＣｌＯｒ—Ｂ１ ｏｆ Ｍｅｓａｎｇｉａｌ ＣｅｌＩｉｎ Ｒａｔｓ ＺＨＥＮＧ Ｈｏｎｇ，ＺＨＡＩ Ｗｅｎｓｈｅｎｇ，ＲＥＮ Ｘｉａｎｚｈｉ，ＷＡＮＧ Ｓｈｏｕｃｈｕａｎ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｗｉｅ Ｃｏｌｌｎｅｇｅ，Ｈｅｎａｎ ４５０００３，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｄｉｘ ａｓｔｒａｇａｌｉ ａｎｄ ｓａｎｇｕｉｓｕｇｅ ｓｅｒｕｍ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｎｓａｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－１３１（ＴＧＦ一１３１）ｏｆ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌ（ＭＣ）ｉｎ ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒａｔ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｎｉｎｅ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ，ｂｌａｎｋ，ｈｉｇｈ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｒａｄｉｘ ａｓｔｒａｇａｌｉ，ｌｏｗ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｒａｄｉｘ ａｓｔｒａｇａｌｉ， ｈｉｇＩｌ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｓａｎｇｕｉｓｕｇｅ，ｌｏｗ ｄｏｓａｇｅ ｆ ｏｓａｎｇｕｉｓｕｇｅ，ｌｏｗ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｓａｎｇｕｉｓｕｇｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｈｉｇｈ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｉ ａｎｄ ｌｏｗ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｉ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｈｉｓｈ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｓａｎｇｕｉｓｕｇｅ ｇｒｏｕｐ．Ｆｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｌｉｑｕｉｄ ｗａｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＴＧＦ一１３１ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｉｎ ＭＣ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴＧＦ－１３１ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｏｌｒｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｈ ｔｈｔａｔ ｉｎ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌｓ（Ｐ＜０．０１）．ＴＧＦ－１３１ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｈａｎ ｔｈａｔｔ ｉｎ ｂｌａｎｋ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓａｎｇｕｉｓｕｇｅ ａｎｄ ｆｏｒｍｕｌａ ｗｉｔｈ ｍａｉｎ ｓａｎｇｕｉｓｕｇｅｍ ａｒｅ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｈａｎ ｔｈｏｓｔｅ ｏｆ ｒａｄｉｘ ａｓｔｒａｇａｌｉ ｎｄ ａｆｏｒｍｕｌａ ｗｉｈｔ ｍａｉｎ ｒａｄｉｘ ａｓｔｒａｇａｌｉ ｏｎ ＴＧＦ一１３ １ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ａｓｔａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ ｌｅｅｃｈｓ ｋｉｒｄｎｅｙ ｇｌｏｍｅｒｕｌｕｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ—Ｂ ＢＬＯＯＤ ＳＴＡＳＩＳ 系膜细胞（ＭＣ）增生、细胞外基质增加是多种肾 小球疾病的基本病理特征。系膜细胞增生同时可产 生大量的细胞外基质，细胞外基质积聚可导致肾小 球硬化。研究证实，转化生长因子一Ｂ１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ—Ｂ１，ＴＧＦ—Ｂ１）表达增加与细胞外基质 （ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）沉积增加相一致，ＴＧＦ— Ｂ１是肾小球硬化的主要介质【 ２】。本研究旨在通过观 察中药水蛭、黄芪及其不同比例方剂含药血清对体 外培养大鼠ＭＣ产生ＴＧＦ—Ｂ１的影响，观察益气、化 瘀中药防止肾小球硬化的可能机制。 ｌ 材料与方法 １．１材料黄芪１ ５００ ｇ【内蒙黄芪，ｒｏｏｔｓ ｏｆ ａｓｔｒｇａｌａｕｓ ｍｅＩｎ－ ｏｎｉｐａ ｗｈｉｔｍａｎ，滑石粉炒制），由南京中医药大学提供。大鼠 系膜细胞株（ＨＢＺＹ一１）购自武汉大学生物系。脂多糖 （１ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ，Ｓｉｇｍａ产品，批号ＤＨＩ８３—１）。ＴＧＦ— Ｂ１定量ＥＩＡ试剂盒（购自上海森雄科技实业有限公司），批 号０４０８０９８。 １．２方法参照文献【３】培养大鼠系膜细胞（ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌ， ＭＣ），第３代ＭＣ用于实验。 １．２．１含药血清的制备 以临床成人用药量的大鼠等效剂 量的１倍、２倍定为低、高剂量，将中药黄芪水煎并浓缩至含 生药１．５ ｇ／ｍＬ，水蛭用高速粉碎机研粉，配成０．３ ｇ／ｍＬ的混悬 液。每日灌服药液４ ｍＬ，每日２次，连续５ ｄ，在灌服最后１ 基金 资助项 ０３ＫＪＢ３６ｏｏ９５ 河南省自然 作者单位：４５ｏ００３郑州市，河南中医学院第一附属医院（郑 宏翟文生）；南京市，南京中医药大学（任现志，ｉ￣ｑ２） ，ｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ．）ｂｕｎｇｅ１、水蛭３００ ｇ（日本医蛭，ｈｉｒｕｄ。ｎｉｐ一 维普资讯 http://www.cqvip.com ５１０ 剂后２ ｈ，经眼球取血，灭活补体后０．２２ ｍ无菌滤器过滤， 分装，一２０ 冰箱保存。 １．２．２分组与培养将ＭＣ以１．２ｘｌ 孔接种于２４孔板，每 组设复孔５个。３７℃、５％Ｃ０ 培养箱中培养，２４ ｈ后用含 ０．５％胎牛血清（１ｅｔａｌ ｃａｌｌｓｅｍｍ，ＦＣＳ）的ＭＥＭ培养液培养２４ ｈ 使细胞同步化。同步化后按实验随机分组分别加入含药血 清，具体加样情况见表１，继续培养４８ ｈ。吸取上清，装入１ ｍＬ 离心管中一７０℃冰箱保存待测。ＴＧＦ一１３１含量的测定按ＥＩＡ 试剂盒（上海森雄科技实业有限公司）说明书操作。 表１分组及加样情况 ０．７５％ＦＣＳ ０．６ ｇ／Ｌ ＬＰＳ ＭＥＭ含药鼠血清或无药鼠 分组 ＭＥＭ（ Ｌ） （ ｜Ｌ） （ Ｌ） 血清（ Ｌ） １．３统计学处理实验结果以 表示。应用ＳＰＳＳ １０．０统 计分析软件对实验数据进行统计学处理，组间比较行单因素 方差分析，各组之间的比较采用ｑ检验。 ２结果 见表２。阴性对照组大鼠ＭＣ中只产生少量的 ＴＧＦ—Ｂ１，阳性对照组ＴＧＦ—ｐ１含量明显升高，与阴 表２各组大鼠ＭＣ上清液ＴＧＦ—ｐ１的含量 （ｎ ，ｎ＝５， ＋ｊ） 统计学处理 分组 哪一Ｂ 面 ＿ 阴性对照组① ５Ｏ．４５±４．８６０①：②６２．９“ ④：⑨１７．０６“ 阳性对照组② ３２９．８Ｏ±５．０７０③：④ ５．７２“⑤：⑨６４．０４“ 空白血清对照组③３０４．５６±６．０９７ ⑥：⑨５．０９“ 黄芪低剂量组④ ２７９．１２±６．５６１③：⑤ ７．５１“⑦：⑨１４．８６“ 黄芪高剂量组⑤ ２７１．８２±７．５６５③：⑥１７．７０“⑧：⑨１０．１３“ 水蛭高剂量组⑥ ２２５．９６±５．３１５③：⑦ ７．９３“④：⑥１１．９７“ 水蛭低剂量组⑦ ２６９．３４±７．５６５③：⑧１２．６７“⑤：⑥１ １．３３“ 水蛭低剂量、黄芪高２４８．３２±９．２１０③：⑨２２．９７“⑥：⑦９．７７“ 剂量组⑧ 水蛭高剂量、黄芪低２０３．３４±３．５６７④：⑤ １．６４ ⑥：⑧５．０４“ 剂量组⑨ Ｆ ６６７．６５ ｒｉａｎｉｉｎ Ｍｅａｌ Ｊ，Ｊｕｌ ２００７，Ｖｏｌ ３５ Ｎｏ ７ 性对照组相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），说明造 模成功。中药各含药组血清ＴＧＦ—Ｂ １表达量均低于 空白血清组（Ｐ＜０．０１）。以水蛭高剂量黄芪低剂量组 最低，与黄芪高剂量组、黄芪低剂量组、水蛭高剂量 组、水蛭低剂量组、水蛭低剂量黄芪高剂量组差别 均有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；其次是水蛭高剂量组， 与黄芪高剂量组、黄芪低剂量组、水蛭低剂量黄芪 高剂量组相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；水蛭高 剂量组低于水蛭低剂量组（Ｐ＜０．０１）；黄芪高剂量组 与低剂量组ＴＧＦ—Ｂ１的含量差异无统计学意义（Ｐ＞ ０．０５）。 ３讨论 ＴＧＦ—Ｂ１是介导肾脏细胞外基质沉积的重要因 子。ＴＧＦ—Ｂ１通过两个途径导致肾小球硬化：（１）可 促进系膜细胞增殖，调节ＥＣＭ降解机制中最重要 的两个系统：纤溶系统（ＰＡ）／纤溶酶系统和基质金 属蛋白酶（ＭＭＰ）系统促进细胞外基质合成，抑制 ＥＣＭ的降解，加速其在肾小球系膜区的积聚。（２） ＴＧＦ—Ｂ本身有自我放大作用，以自分泌方式形成一 个自分泌活化增生环，刺激系膜细胞合成和分泌更 多的ＴＧＦ—Ｂ，从而促进其基因表达水平升高 。林文 生等［５１采用转基因技术发现ＴＧＦ—Ｂ】可通过对大鼠 系膜细胞增殖及组织纤溶酶原激活剂／纤溶酶原激 活剂抑制物一１（【＿ＰＡ／ＰＡＩ一１）表达的影响而促进肾 小球纤维化的发生。而反义ＴＧＦ—Ｂｌ基因可抑制 ＴＧＦ—Ｂ１的表达，减少ＥＣＭ的沉积。Ｉｓａｋａ等［６１利用 基因转染技术，利用脂质体将ＴＧＦ—Ｂ１ ｅＤＮＡ经肾 动脉转导入正常鼠肾小球内，在正常的肾小球内即 出现ＴＧＦ—Ｂ１的过度表达，导致ＥＣＭ沉积，１周内 肾小球就发生硬化，这是支持ＴＧＦ—Ｂ １致肾小球硬 化的最直接证据。因此，对抗ＴＧＦ—Ｂ１的作用以阻 止肾脏纤维化、硬化具有重要意义。 增生性肾小球肾炎是常见的肾脏病，肾小球 ＭＣ增生及由此所导致的ＥＣＭ积聚，从而进一步导 致肾小球硬化，已被人们所熟识。中药治疗增生性 肾小球肾炎具有较好疗效，并且可以减少复发，其 中益气、化瘀之品是最常用的治疗药物。传统认为 增生性肾小球肾炎以气虚等本虚为本，血瘀等邪实 为标，但临床上血瘀似乎占有更重要的地位，活血 化瘀几乎是治疗小儿增生性肾小球肾炎的基本方 法同，而水蛭则是其代表药物。国内外对水蛭的研究 颇多，已从水蛭中分离出水蛭素、水蛭肽等活性成 维普资讯 http://www.cqvip.com 天津医药２００７年７月第３５卷第７期 ５１１ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｎａｌ Ｐｈｙｓｉｄ．２００５．２８９（５）：Ｆ９９８—１００４． 分，其应用范围有较大的拓宽。本实验研究结果显 示水蛭高、低剂量组均可以抑制大鼠系膜细胞分泌 ＴＧＦ一１３１，并且水蛭高剂量组的作用明显强于水蛭低 剂量组，说明水蛭可以剂量依赖地抑制大鼠ＭＣ产 生ＴＧＦ一１３１，是其可以防治肾小球硬化的机制之一， 亦是中药活血化瘀药治疗增生性肾小球肾炎的作 用机制之一。此外，本实验结果也证实黄芪也可以 抑制大鼠ＭＣ产生ＴＧＦ一１３１，但是水蛭和水蛭为主 【２】Ｋｗａｋ ＤＨ，Ｌｅｅ Ｓ，Ｋｉｍ ＳＪ，ｅｔ ａ１．Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ ＧＭ３ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈ Ｓｌｕｃｏ￣ｅ—ａｎｄ ＴＧＦ－ｂｅｔａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔ ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．２００５．７７（２０）：２５４０—２５５ １． 【３】Ｈａｒｐｅｒ ＰＡ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＪＭ，Ｈｏｏｖｅｒ ＲＬ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｒａｔ ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＫｉｄｎｅｙＩｎｔ，１９８４，２６：８７５． 【４】Ｔａｍａｋｉ Ｋ，Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ Ｊ，Ｏｋｕｄａ Ｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｋｉｄｎｅｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎ：ＴＧＦ－ｂｅｔａ（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ）【Ｊ】． Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ，２００６，６４（Ｓｕｐｐｌ ２）：２９７－３０１． 【５】林文生，张农，张颂文，等．ＴＧＦ—ｐｌ对大鼠系膜细胞增殖和纤溶酶 原激活物及其抑制剂表达的影响【Ｊ１．复旦学报（医学科学版）， ２００１，２８（３）：２１３—２１５． 【６】Ｉｓａｋａ Ｙ，Ｆｕｊｉｗａｒａ Ｙ，Ｕｅｄａ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｅｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｉｎ ｖｉｖｏ ｔｒｎｓｆａｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ ｏｒ ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅ－ 药的方剂在抑制体外培养大鼠ＭＣ产生ＴＧＦ一１３１的 作用方面，明显强于黄芪和以黄芪为主药的方剂。 本文从实验的角度说明了活血化瘀法在增生性肾 小球肾炎治疗中的重要地位。 参考文献 【１】Ｓｕｇａｒｕ Ｅ，Ｓａｋａｉ Ｍ，Ｈｏｒｉｇｏｍｅ Ｋ，ｅｔ ａ１．ＳＭＰ－５３４ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＴＧＦ—ｂｅｔａ— ｉｎｄｕｃｅｄ ＥＣＭ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｃｅＨｓ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｓ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｉｒｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｇｅｎｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｒａｔ ｋｉｄｎｅｙ【Ｊ１．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ， １９９３，９２：２５９７—２６０１． 【７】翟文生，郑宏，任现志．血瘀在增生性肾小球肾炎中的地位【Ｊ１．陕 西中医，２００４，１２（６）：ｌ１ｌ１． （２００６—０４—１７收稿２００６—１０—１８修回） 李淑杰） （本文编辑ｍａｔｒｉｘ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｌｏｍｅｒｌｏｎｅｐｈｒｕｉｔｉｓ【Ｊ】．Ａｍ Ｊ 国内外研究快讯 大鼠大脑中动脉阻塞模型中ｚｎ２＋囊泡的释放 ｚｎ 堤基因表达和很多酶活性所必须的微量元素，脑组 织中含有丰富的锌（１０ 每克湿重组织），其中有１０％存在 于谷氨酸能神经元的突触囊泡中。虽然体外实验已经证实 ｚｎ“的释放依赖于神经元的兴奋，但对脑缺血过程中ｚｎｚ＋变 化的研究不多，缺血过程中是否有ｚｎｚ＋的释放尚不清楚。本 实验用脑微量透析方法研究大鼠大脑中动脉闭塞脑缺血模 型的Ｚｎ 囊泡的释放情况。 反应消失，提示缺血过程中ｚｎ“的释放。但是最近在沙鼠脑 缺血模型应用微量透析分析证实在皮质区胞外Ｚｎ２＋浓度降 低，和以前的组织化学实验结果相反。造成这种偏差的原因 还不清楚，但动物物种的不同、缺血模型方法的不同可能是 其原因。在活细胞中，Ｚｎ 域是紧密的和金属硫蛋白结合在一 起，或是松散的和一些金属蛋白和核酸结合，或是以游离态 存在。本实验用微量透析方法证实ＭＣＡＯ后脑皮质胞外Ｚｎ“ 浓度的变化与高钾刺激引起的细胞去极化胞外Ｚｎ２＋浓度变 化的结果一致。 雄性ＳＤ大鼠在戊巴比妥麻醉下，将微透析探针植入右 侧脑皮质区，林格液（对照组）和高钾林格液（高钾刺激组）以２ ￣Ｌ／ｍｉｎ的流速持续灌注，每１５ ｍｉｎ收集一次透析液。实验结 束后，取出探针并浸入标准ｚｎ“溶液中计算其恢复率。渗析 液中的Ｚｎ 馓度用原子吸收分光光度法进行分析。探针的定 已有报道，在脑缺血或脑外伤时组织化学方法显示的 ｚｎ“反应的积累先于神经元的死亡。用乙二胺四乙酸二钠钙 （ＣａＥＤＴＡ）预处理可以抑制这种积累和神经元的死亡。提示 ｚｎ ＋从突触囊泡中转位释放并在突触后神经元中积累，然后 位在实验结束后用免疫组织学方法确定。大鼠右侧大脑中动 脉用经处理过的４＿ｏ的外科尼龙线通过颈总动脉进入阻塞 导致神经元的死亡。但是，ｚｎ 转运体缺失的鼠（在突触囊泡 中缺乏ｚｎ 姐化反应阳性）对红藻氨酸盐诱导的癫痫发作比 （ＭＣＡＯ），６０ ｍｉｎ后，恢复血液再灌注，室温下恢复知觉。 结果发现用高钾（１００ ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣ１）灌注组脑皮质的胞外 ｚｎ 馓度从刺激开始即增加，到３０ ｍｉｎ时达基础值的２倍； 此后开始降低并在１５ ｍｉｎ后回到基础水平。ＭＣＡＯ后的脑皮 质胞外ｚｎ 浓度１５ ｍｉｎ内持续增加，３０ ｍｉｎ后达到最高浓 度，最高浓度大约是基础水平的２倍。胞外Ｚｎ２＊￣度随后开 始下降，再灌注１５ ｍｉｎ后ｚｎ 馓度恢复到基础水平。 曾有实验用荧光染色的方法证实海马脑片神经元兴奋 较敏感。尽管缺乏囊泡ｚｎ“，但依然会有锌离子的积累和神 经元的死亡。然而，Ｚｎ２ｑｔｊ／￣乏的鼠（缺少Ｚｎ２壤泡）尽管红藻氨 酸盐诱导可达正常生理控制组的ｚｎ“水平，但是依然会引起 神经元的死亡。这些结果揭示可能囊泡中的ｚｎ 埘过度刺激 引起的神经元死亡的作用不大。本实验证实了在缺血过程中 有Ｚｎ２３￣度的增加。Ｚｎ“释放的效应有待进一步研究。 （徐兰举摘杨卓审校译自ＢｒａｉｎＲｅｓＢｕｌｌ，２００６，６９：６２２－６２５） 时ｚｎ“的释放及脑皮质缺血区域神经末梢ｚｎ 蛆化活性阳性
