微生物学通报 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｔｏｎｇｂａｏ＠ｉｍ．ａｃ．ｃａ ＮｏＶ ２０，２００８，３５（１１）：１７５５￣１７５９ ＠２００８ ｂｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．ＣＡＳ 苹果浓缩汁中嗜酸耐热茵的分离与鉴定 王峰李建科 郭玉蓉刘海霞 （陕西师范大学食品工程与营养科学学院西安７１００６２） 摘 要：为了解和控制浓缩苹果汁中的嗜酸耐热菌，采用酸化的凯氏培养基对苹果浓缩汁中的耐 热菌进行分离、培养和鉴定，并与标准菌株Ａｌｉｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ＤＳＭ３９２２进行了比较分 析。结果表明，分离到的２株污染菌均可以在２１。ｃ一５５。ｃ温度范围及２．４—６．２的ｐＨ值范围内生长， 符合脂环酸芽胞杆菌属嗜酸耐热的特点。经与标准菌株的细胞、菌落形态观察、生长条件和生理 生化反应等方面的比较表明，２株分离菌与标准菌株Ａｌｉｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ＤＳＭ３９２２有明显 的相似特征。 关键词：苹果浓缩汁，嗜酸耐热菌，脂环酸芽胞杆菌，分离与鉴定 Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｉｆｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒｍｏａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍ Ａｐｐｌｅ Ｊｕｉｃｅ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ＷＡＮＧ Ｆｅｎｇ ＬＩ Ｊｉａｎ—Ｋｅ ＧＵＯ Ｙｕ—Ｒｏｎｇ ＬＩＵ Ｈａｉ—Ｘｉａ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＦｏｏｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａａｎｘｉＮｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ ７１００６２） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ａｐｐｌｅ Ｊｕｉｃｅ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ（ＡＪＣ１ ｗａｓ ｉｎ． ｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ａｌｉｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ＤＳＭ３９２２ ｕｓｉｎｇ Ｋｉｒｉｎ—ｍｅｄｉｕｍ ａｃｉｄｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ｍａｌｉｃ ａｃｉｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｓ ｔｈｅ ｔｗｏ ｐｏｌｌｕｔｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ＡＪＣ ｃａｎ ｇｒｏｗ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ２１。Ｃ￣５５。Ｃ ａｎｄ ｐＨ ｏｆ ２．４－６．２．ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ－ ｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏ—ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｃ Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．．Ｆｕｒｔｈｅｒ ｍｏｒｅ，ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ， ｃｕｌｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｔｅｓｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈｅ ｔｗｏ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｔｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ ｈａｖｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｓｉｍｉｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ａｌｉｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ＤＳＭ３９２２． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｐｐｌｅ Ｊｕｉｃｅ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ，Ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ，Ａｌｉｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉＣａｔｉ０ｎ 酸土环脂芽胞杆菌（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒ— 沉淀等质量危害 卜 ，以目前的杀菌方法尚不能消 除，严重影响到我国浓缩苹果汁的国际化发展。因 此，控制和快速检测耐热菌是目前的很多苹果汁生 产厂家遇到的较为棘手的问题，同样是亟待解决的 问题 ］。 ｒｅｓｔｒｉｓ），俗称为耐热菌、嗜酸耐热菌、耐热耐酸菌 等。该菌可以引起巴氏灭菌果汁（如苹果汁、桔汁、 芒果汁等）的，使苹果汁发生后浑浊、浊度升高、 产生难以接受的气味，乃至在包装物底部形成白色 基金项目：农业部现代苹果产业技术体系基金项目 通讯作者：函：ｊｉａｎｋｅｌ＠ｓｎｎｕ．ｅｄｕ．ｃａ 收稿日期：２００８．０３．２５；接受日期：２００８—０７．０７ １７５６ 微生物学通报 ２００８，Ｖｏ１．３５，Ｎｏ．１１ 目前，国内在浓缩苹果汁中耐热菌方面的基础 和应用研究都比较缺乏。因此，在我国开展源于苹 果浓缩汁的新菌株的分离鉴定及其特性研究，对有 效控制其危害具有十分重要的现实意义。本研究从 苹果浓缩汁中进行采样，对污染浓缩苹果汁的嗜酸 耐热菌进行分离、筛选、纯化，依据《常见细菌系 统鉴定手册》隅 对其进行了初步鉴定，旨在为实现浓 缩苹果汁中耐热菌的控制提供必要的数据。 １材料与方法 １．１菌种和培养基 １．１．１ 标准菌：Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ＤＳＭ ３９２２，购自德国菌种保藏中心。 １．１．２ 凯氏培养基（Ｋ氏培养基）：０．２ ｇ吐温８Ｏ，０．２ ｇ 葡萄糖，０．５ ｇ酵母粉，１．０ ｇ蛋白胨，３．０ ｇ琼脂粉，溶 于２００ ｍＬ蒸馏水中，混匀，备用。调酸时，混入 ０．３３６ ｇ苹果酸和１０ｍＬ蒸馏水。 １．１．３ ＬＢ培养基：１０ ｇ胰蛋白胨，１０ ｇ酵母粉，５ ｇ ＮａＣ１，１５ ｇ琼脂，１ Ｌ蒸馏水，混匀，备用。 １．２样品来源 苹果浓缩清汁：ｐＨ值３．５～４．５，可溶性固形物含 量为７１。－４－１。Ｂｒｉｘ，由陕西恒兴果汁有限公司提供， 从苹果浓缩汁中分离得到２株嗜酸耐热菌，即分离 菌Ｉ和分离菌Ⅱ。 １．３苹果浓缩汁中嗜酸耐热菌的分离 １．３．１ 分离及保藏培养基的制备：嗜酸耐热菌的分 离及保藏均采用酸化的凯氏培养基。１￣１０ Ｐａ高压 灭菌２０ ｍｉｎ，冷却至５０。Ｃ～６０。Ｃ，混入浓度为１．６８％ （ ’／）的苹果酸溶液１０ ｍＬ进行酸化处理，备用。 １．３．２嗜酸耐热菌的分离方法：参照美国库克实验 室的方法对嗜酸耐热菌进行分离【９】。 １．４嗜酸耐热菌的耐酸耐热特性鉴定 １．４．１耐酸特性鉴定试验：将镜检为纯培养的嗜酸 耐热菌菌株划线接种于ＬＢ平板培养基 （ｐＨ ７．Ｏ）， ４５。Ｃ恒温培养箱中培养４８ ｈ，保留不能在ＬＢ平板 长出的菌。 １．４．２耐热特性鉴定试验：将镜检为纯培养的嗜酸 耐热菌菌株制成菌悬液，进行热休克处理 ”，再 采用涂布法（用无菌吸管吸取菌悬液０．１ ｍＬ～０．２ ｍＬ） 接种于Ｋ氏平板培养基上４５。Ｃ培养２４ ｈ，保留可以 生长的菌落。 ｈｔｔｐ：／／ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｉｍ．ａｃ．ｃｎ／ｗｓｗｘｔｂｃｎ １．５嗜酸耐热菌菌株细胞形态观察 对经过耐热、耐酸性检验的菌株进行细胞形态、 菌落形态的初步观察，同时进行微观鉴定。 １．５．１革兰氏染色：选取培养１８ ｈ～２４ ｈ内斜面嗜酸 耐热菌菌株进行革兰氏染色处理 Ｊ，处理后进行显 微镜观察其繁殖体细胞形态。 １．５．２ 芽胞染色：选取培养１ ｄ￣２ ｄ的斜面嗜酸耐热 菌菌株，进行芽胞染色处理隅】，然后进行显微镜观 察其芽胞形态。 １．６菌株培养的生长条件确定 １．６．１ ｐＨ值的确定：采用苹果酸溶液调整培养基的 ｐＨ值，测定耐热菌生长的ｐＨ值范围。配制ｐＨ分别 为２．０、３．０、４．０、５．０、６．０和７．０的培养基，将标准 耐热菌、分离菌Ｉ和分离菌Ⅱ分别接种于不同ｐＨ 值的培养基上，培养２ ｄ～５ ｄ观察其生长情况ｆｌ“，初 步确定菌株生长的ｐＨ值，再将其精确到０．１，将菌接 种于微调后的不同ｐＨ值培养基中，培养２ ｄ～５ ｄ观察 各菌的生长情况，最终确定各菌适宜生长的ｐＨ值。 １．６．２生长温度的确定：液体培养基采用葡萄糖胰 蛋白胨培养基（ＧＰ）。以苹果酸溶液酸化后分装试管， 分别接入标准耐热菌、分离菌Ｉ和分离菌Ⅱ的菌悬 液，置于２０。Ｃ、３０。Ｃ、４０。Ｃ、５０。Ｃ、６０。Ｃ和７０。Ｃ 不同温度条件下培养２ ｄ一５ ｄ，观察培养液的浊度及 液面产生的菌膜等生长特征，最初确定生长温度范 围，再将此温度精确到ｌｏＣ，再将菌置于微调后的 不同温度下，培养２ ｄ～５ ｄ观察各菌的生长情况，确 定各菌的适宜生长温度。 １．７嗜酸耐热菌的培养及生理特征 参照《常见细菌系统鉴定手册》哺 的方法观察其 菌落的形态，参照《微生物学实验技术》ｌ１ 】采用悬滴 法对３株菌的运动性进行观察。 １．８生理生化反应 接触酶试验、氧化酶试验、明胶液化、淀粉水 解、Ｎ源利用试验、Ｖ－Ｐ试验、产吲哚、脲酶试验 等试验均参照文献［１２】的方法进行。为了保证耐热 菌生长所需要的酸性条件，一般采用以苹果酸酸化 的培养基进行以上生理生化试验。 １．９标准耐热菌、分离茵Ｉ和分离菌Ⅱ生长曲线 的确定 将标准菌和２株分离菌接入灭菌的液体培养基 中，于４１。Ｃ温度下培养，每隔２ ｈ取样１次，测定菌 王峰等：苹果浓缩汁中嗜酸耐热菌的分离与鉴定 １７５７ 体的吸光度值，观察２４ ｈ后，分别建立标准耐热菌、 分离菌Ｉ和分离菌Ⅱ在４１。Ｃ温度下的生长曲线。 ２．２苹果浓缩汁中耐热菌的分离及细胞形态的 观察 按１－３方法分离培养可以得到大量的耐热菌， 这些耐热菌用通常的细菌检测方法难以检出，在 ４１。Ｃ条件下常需２ ｄ－３ ｄ可形成明显的菌落。从其 形态学特征来看，苹果浓缩汁中的耐热菌并不是一 种单一形态的菌，而是表现为多形态的产芽胞杆 菌。标准菌、分离菌Ｉ和分离菌Ⅱ的显微镜形态如 图１和图２所示。由此可知，标准菌和分离菌Ｉ的 显微形态十分相似，为杆状，而分离菌Ⅱ为椭圆状。 ２结果与讨论 ２．１ 菌种的分离纯化及嗜酸耐热菌检验 通过分离、筛选及纯化，得到了２株嗜酸耐热 菌，即分离菌Ｉ和分离菌Ⅱ。分离获得到的这２株 菌，经过８０。Ｃ １３ ｍｉｎＬ９ 的热处理，均可以很好的生 长，表明其有很好的耐热性；在Ｋ氏培养基上生长 良好，但在ＬＢ培养基上均不能生长，这说明其具有 嗜酸性。因此可以证明，本试验分离得到的２株菌 为嗜酸耐热菌。 标准耐热菌、分离菌Ｉ和分离菌Ⅱ的细胞形态 观察如表１所示，几株菌均为Ｇ 菌。３株菌经过悬 图１各菌株繁殖体显微镜形态的观察结果（１０×１００） Ｆｉｇ．１ Ｍｉｃｒｏ－ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ ｆｏｒｍ（１０￣１００） 注：Ａ：标准菌：Ｂ：分离菌Ｉ；ｃ：分离菌ｌＪ Ｎｏｔｅ：Ａ：Ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｔｒａｉｎ；Ｂ：Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎ Ｉ：Ｃ：Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎ ＩＩ 图２各菌株芽胞显微镜形态观察结果Ｏｏ×１００） Ｆｉｇ．２ Ｍｉｃｒｏ－ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｐｏｒｅ（１０ Ｘ １００） 注：Ａ：标准菌；Ｂ：分离菌Ｉ；ｃ：分离菌ＩＩ Ｎｏｔｅ：Ａ：Ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｔｒａｉｎ；Ｂ：Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎ Ｉ：Ｃ：Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎ ＩＩ 注：＋：阳性：一：阴性 Ｎｏｔｅ：－Ｉ－：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔ；一：Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔ ｈｔｔｐ：／／ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｉｍ．ａｃ．ｃｎ／ｗｓｗｘｔｂｃｎ １７５８ 微生物学通报 ２００８，Ｖｏ１．３５，Ｎｏ．１１ 滴法ｎ 镜检观察，结果表明，３株菌都不运动。另外， ３株菌的芽胞均为次端生。 ２．３．２培养生长条件的确定：标准菌、分离菌Ｉ和 分离菌Ⅱ培养的生长试验结果见表３。由表３可知， 各菌在温度条件在２１。Ｃ～６０。Ｃ范围内、ｐＨ值在 ２．４～６．４范围内均能良好生长，且本试验分离得到的 分离菌Ｉ和分离菌Ⅱ两株菌与标准菌的生长条件基 本相同。从它们的生长温度和ｐＨ值范围可以看出， 这些耐热菌不仅可以耐受酸性条件，并且还表现出 对酸性条件的嗜好性和依赖性，均符合脂环酸芽胞 杆菌特有的耐酸耐热的生长条件特性。 ２．３培养及生理生化反应结果 ２．３．１ 菌落形态观察：标准耐热菌、分离菌Ｉ和分 离菌Ⅱ的菌落形态观察结果见表２。由表２可知，标 准菌和分离菌Ｉ的菌落形态特征十分相似，表面有 褶皱，边缘不整齐呈发射状；而分离菌Ⅱ表现出与 标准菌和分离菌Ｉ不同的菌落特征，菌落较大且边 缘光滑，突起，粘稠，易挑起且呈拉丝状。 ２．３．３生理生化反应结果分析：标准菌、分离菌Ｉ 和分离菌Ⅱ的生理生化反应结果如表４所示。 由表４结果表明，分离菌Ⅱ的氧化酶为阳性、 而分离菌Ｉ的淀粉水解为阴性，这两个特征与标准 菌株特征不同，其余各项生理生化特性与标准菌相 同。由此可见，这两株菌与标准耐热菌株 Ａｌｉｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ＤＳＭ３９２２有明显的相 似特征。 注：＋：阳性：一：阴性 Ｎｏｔｅ：＋：Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔ；一：Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔ ｈｔｔｐ：／／ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｉｍ．ａ（２．ｃｎ／ｗｓｗｘｔｂｃｎ 王峰等：苹果浓缩汁中嗜酸耐热菌的分离与鉴定 １７５９ ２．４各菌株生长曲线结果 标准菌、分离菌Ｉ及分离菌Ⅱ的生长曲线见图 ３。由图３可见标准菌和分离菌Ｉ的生长趋势比较一 致，且均在６ ｈ后由调整期进入对数期，１２ ｈ时进入 稳定生长期；当生长到２０ ｈ之后菌体浊度缓慢降低， 进入衰亡期，而分离菌Ⅱ４ ｈ后就由调整期进入对数 ［２】蔡福带．苹果浓缩汁生产中耐热菌的分离鉴定及控制 技术研究．杨凌：西北农林科技大学，２００５，ＰＰ．１８—３１． ［３］陈颖．臭氧对耐酸耐热菌杀灭作用的研究．食品工业 科技，２００４，２５（１）：５１—５２． ｆ４】岳田利，胡贻椿，袁亚宏，等．脂环酸芽胞杆菌 （Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ）分离鉴定研究进展．食品科学，２００８， 期，１８ ｈ之后菌体浊度显著降低，进入了衰亡期。 １．６ １．４ ８ １．２ １．０ 苔０．８ 蛊０．６ ０．４ ０．２ ０ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ（ｈ） 图３耐热菌的生长曲线 Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ａｎｄ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｔｈｅｒｍｏ－ ｔｏｌｅｒａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ ３结论 １）在制备Ｋ氏培养基时涉及到灭菌后调酸问 题，一些文献上报道用１．２５ ｇ苹果酸再加１０ ｍＬ蒸 馏水调酸。在实验过程中发现，这样调酸后ｐＨ过低， 不利于耐热菌生长，经过大量预试验，我们发现当 配制２００ ｍＬ培养基时用０．３３６ ｇ苹果酸再加１０ ｍＬ 蒸馏水可以使其ｐＨ达到３．７±Ｏ．１，在这种条件下耐 热菌生长良好。 ２）采用酸化的Ｋ氏培养基可以对苹果浓缩汁 中的耐热菌进行有效地分离培养。从标准耐热菌 Ａｌｉｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ＤＳＭ３９２２、分离菌Ｉ和 分离菌Ⅱ的形态特征、生长及生理生化特性来看， 分离得到的２株耐热菌与标准菌有明显的相似性， 但这些还不足以作为分类的依据，需进一步鉴定。 由于实验中发现分离菌Ｉ与标准菌特征更为相似， 目前已对分离菌Ｉ进行了保存，等待进一步鉴定。 参考文献 ［１】李静嫒．果汁中的嗜酸耐热菌．食品与发酵工业，２００２， ２９（３）：８４－８８． ２９（０２）：４８７－４９２． 【５】陈世琼，胡小松，石维妮，等．浓缩苹果汁生产过程中 脂环酸芽胞杆菌的分离及初步鉴定．微生物学报，２００４， ４４（６）：８１６－８１９． ［６】Ｙｉｎｒｏｎｇ Ｌｕ，Ｌ Ｙｅ印Ｆｏｏ．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｊｏｒ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｉｎ ａｐｐｌｅ ｐｏｍａｃｅ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｙｒ， １９９７，５９（２）：１８７－１９４． ［７】高修功，王 超，章克昌．数学统计法快速优化假单胞 菌脂肪酶发酵条件．微生物学通报，１９９８，２５（２）：９４—９７． ［８】东秀珠，蔡妙英．常见细菌系统鉴定手册．北京：科学 出版社，２００１，ＰＰ．３５３—３８４． ［９】ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｆ１．ｃｏｍ／ａｔｂ．ｈｔｍ１． ［１０］Ｉ Ｗａｌｌｓ，Ｒ Ｃｈｕｙａｔｅ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉ－ ｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ ｆｒｏｍ ｆｒｕｉｔ ｊｕｉｃｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡＯＡＣ ｌｎｔｅｒｎａ－ ｔｉｏｎａｌ，２０００，８３（５）：１１１５－１１２０． ［１１］焦中高，王思新，段丛梅，等．苹果浓缩汁中耐热菌的 分离及其生长特性的初步研究．食品科学，２００３，２４（９）： ８５－８７． ［１２］程丽娟，薛宏泉．微生物学实验技术．西安：世界图书 出版公司，２０００，ＰＰ．２２１－２２２． ［１３］Ｋｅｉｉｃｈｉ Ｇｏｔｏ，Ｋａｏｒｕ Ｍｏｃｈｉｄａ，Ｍｉｋａ Ａｓａｈａｒａ，ｅｔ ａ１．Ａｌｉｃｙ— ｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｍｏｒｕｍ ｓｐ．ｎｏｖ．，ａ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒｍｏ—ａｃｉｄｏｐｈｉｌｉｃ， ｅｎｄｏｓｐｏｒｅ—ｆｏｒｍｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈａｔ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｐｏｓｓｅｓｓ ∞－ａｌｉｃｙｃｌｉｃ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ．ａｎｄ ｅｍｅｎｄｅｄ ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕ— ｔｉｏｎａｒｙ，２００３，５３（５）：１５３７－１５４４． 【１４】姚培鑫，马小魁．浓缩苹果汁生产厂中嗜酸耐热菌的跟 踪检测．饮料工业，２００１，４（３）：４２—４４． 【１ ５】Ｃｅｒｎｙ Ｇ’Ｈｅｎｎｌｉｃｈ Ｐｏｒａｌｌａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｓｐｏｉｌａｇｅ ｏｆ ｆｒｕｉｔ ｊｕｉｃｅ ｂｙ ｂａｃｉｌｌｉ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｐｏｉｌｉｎｇ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ．Ｚ Ｌｅｂｅｎｓｍ Ｕｎｔｅｒｓ Ｆｏｒｓｃｈ，１９８４， １７９（３）：２２４－２２７． 【１６】ＭｃＩｎｔｙｒｅ Ｓ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ａｎ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｉｃ Ｂａｃｉｌｌ— ｓｕｕｔｒａｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｈｅｌｆ－ｓｔａｂｌｅ ｊｕｉｃｅｓ．Ｊ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔ， １９９５，５８（３）：３１９－３２１． 【１７】Ｗａｌｌｓ Ｉ，Ｃｈｕｙａｔｅ Ｒ．Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ：ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ｐｅｒｓｐｅｃ— ｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ．Ｄａｉｒｙ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏ Ｓａｎｉｔａｔｉｏｎ，１９９８，１８（８）：４９９－５０３． ｈｔｔｐ：／／ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｉｍ．ａｃ．ｃｎ／ｗｓｗｘｔｂｃｎ
