细菌鞭毛染色及运动性鉴定
摘要：用稀释美蓝对菌体进行染色后在油镜下对菌体的运动性进行观察、鉴定和描述。 鞭毛是细菌的运动器官，用银染液A液B液对菌体的鞭毛进行染色，
并在光学显微镜下对菌体鞭毛的形态特征和着生部位进行观察。
关键词 银染色法 压滴法 微生物制片 镜检
前言 鞭毛是细菌的运动器官，具有鞭毛的不同的细菌其鞭毛的粗细、长短、着生部位不
同，是微生物的一项重要形态特征。
除了少数细菌的鞭毛能够较轻易的观察出来外，一般其他的细菌由于鞭毛微小且透明，一般不能在光学显微镜直接观察到。故要用光学显微镜对细菌的鞭毛进行观察时，要对细菌的鞭毛进行染色处理使鞭毛直径加粗并与背景色形成对比。
通过银法对细菌鞭毛进行染色观察， 能区分细菌的类型，对细菌的结构进行初步了解，在细菌的分类及鉴定上具有一定的重要意义。
材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标准菌株
枯草芽孢杆菌 铜绿假单胞菌
1.1．2溶液和试剂
蒸馏水 95%乙醇 香柏油 0.01%美蓝 银染液A液B液
1.1.3仪器及其他用品
载玻片 盖玻片 镊子 光学显微镜 胶头滴管 酒精灯 接种环
1.2方法
1.2.1压滴法观察细菌的运动性
1）涂片
1．将载玻片用自然水洗干净后，用纸吸除多余水分。
2．在载玻片滴取半滴蒸馏水到载玻片上。
3．在酒精灯形成的无菌区域内用接种环在铜绿假单胞菌的琼脂斜面上小心地（防止因动作过大而使鞭毛从菌体上脱落）挑取适量的菌苔。
4．将沾有菌苔的接种环置于载玻片中的滴有蒸馏水的区域进行涂抹，使菌悬浮在
蒸馏水中。
2）染色
在涂有菌体的部分滴加一滴稀释美蓝使其覆盖整个悬浮液。
3）盖盖玻片
1．用镊子取出一片盖玻片并将盖玻片放在菌体悬浮液的左侧使盖玻片恰好与悬
浮液相接触。
2．将盖玻片用镊子轻轻向左侧移动同时慢慢地盖上盖玻片（注意不要让空气进
入片中）。
4）快速镜检
在观察时应先用高倍镜观察，看不清楚时再用低倍镜观察。在观察时应采用暗视野，并要以较快的速度对菌体进行观察以免菌体过早死亡。 主要介绍油镜的使用方法：
1．将染色好的载玻片置于显微镜下的载物台上，将对准载物台油镜，调节粗调将
载物台合适的高度。
2．将油镜对准所要观察的菌体区域，在所对区域内滴上一滴香柏油后，再调节细
条使成像更为清晰。 3．调节载物台旁的螺母，将载玻片前后左右移动对运动的菌体进行观察。 4．观察后将载物台降下来，取下载玻片，将油镜擦洗干净。
1.2.2银染色法
1）涂片
1．将载玻片用去污粉洗净后，在95%的乙醇溶液中浸泡5min。 2．用镊子取出一载玻片并在酒精灯上点燃以去除残留的乙醇。 3．用胶头滴管在载玻片的一端滴蒸馏水。
4．用接种环在酒精灯形成的无菌区域内分别在铜绿假单胞菌（或枯草芽孢杆菌）营养琼脂斜面上轻轻挑取适量的菌苔，将沾有菌苔的接种环在滴有蒸馏水的区域内进行涂抹。
5．将盖玻片在竖直方向上倾斜，使悬浮液缓缓流向另一端，吸走多余水分。
2）干燥固定
将涂好片的载玻片菌面朝上自然晾干。
3）染色
注意水洗的过程中，要使用较小的水流在没有涂菌的一面进行冲洗，以防菌体被水 流冲走，使菌体能更好的更多的附着在载玻片上同时减少对菌体鞭毛的破坏。 1．在涂菌部分滴上一滴银染液A，染色5min后水洗到洗出的水流为无色为止。 2．再在涂菌区域用银染液B液冲洗30s-1min并在燃烧着的酒精灯上稍加热。
3．在自然水下对没有涂抹菌体的那一面进行冲洗，直至流出液为无色为止。
4）干燥；
将菌面朝上在自然条件下干燥。
5）镜检
在观察菌体的鞭毛时应在暗视野的条件下由密到疏进行观察。
1．将染色好的载玻片置于显微镜下的载物台上，将对准载物台油镜，调节粗调将
载物台合适的高度。
2．将油镜对准所要观察的菌体区域，在所对区域内滴上一滴香柏油后，再调节细
条使成像更为清晰。
3．调节载物台旁的螺母，将载玻片前后左右移动进行观察。 4．观察后将载物台降下来，取下载玻片，将油镜擦洗干净。
2.结果与分析
2.1结果
2.1.1银法对鞭毛染色后不同种类菌种鞭毛的描述 菌体名照片 菌体形鞭毛形称 态 态 铜绿假 细、长 单胞菌 两端钝圆短杆状 着生部位 端生 鞭毛数量 少 油镜 10×100 枯草芽孢杆菌 长杆状，菌体长短不一但宽度一致 油镜 10×100 细、短 周生 多
2.1.2微生物图的绘制
铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌
2.2分析
用银染色法A液对鞭毛进行染色能使鞭毛直径加粗利于人们在光学显微镜下对鞭毛的观察。而不同具有鞭毛的细菌，其鞭毛的形态、数量和着生部位不尽相同，致使鞭毛在光学显微镜下呈现不同形态。
2.2.1对着色效果的影响
1．菌体的活性不同，其鞭毛在菌体上的固着强度不同，能够抵抗的外界干扰程度不同，
从而对染色的效果产生影响，不利于鞭毛的观察。
2．菌种的培养时间不同其鞭毛的形态也不同从而给鞭毛的染色和形态观察带来影响。
3.不同厂家不同批次的染色用的银A液B液不同，会给染色效果带来影响。
3．小结
本次试验基本成功，在这次试验中我们基本掌握了压滴法观察细菌的运动性和银法对鞭毛进行染色的操作步骤，掌握了微生物的制片技术，知道了如何去观察鞭毛的形态，巩固了在油镜下对微生物制片的操作步骤和观察技巧。 4参考资料
沈萍 陈向东 实验室环境和人体表面的微生物检查 微生物学实验【M】 高等教育出版社
