中国实验诊断学２０１０年７月第ｌ４卷第７期 ・－－——１０９７－－—— 文章编号：１００７—４２８７（２（】１０）【）７—１０９７—０３ 产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌多重耐药性 与Ｉ类整合子的相关性研究 郭红阳，朱光泽，连树林 （长春中医药大学附属医院，吉林长春１３００２１） 摘要：目的了解来源于不同临床标本的肺炎克雷伯菌的耐药性、携带第１类耐药整合子的特征及基因盒的种 类。方法使用常规方法分离肺炎克雷伯菌；运用法国梅里埃ｖ ＩＴＥＫ细菌分析系统进行鉴定；应用ＰＣＲ法扩增第１ 类整合子；应用纸片扩散法对２２种抗生素进行耐药性监测和分析。结果 １９１株产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌中检测出Ｉ 类整合子１７８株，检出率为９３．２％，Ｉ类整合子阳性菌对氨基糖苷类、喹诺酮类及头孢菌素类药物表现出较高的耐药， 其多重耐药率明显高于Ｉ类整合子阴性菌株。结论Ｉ类整合子广泛地存在产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌中，Ｉ类整合子对 细菌多重耐药性的产生和传播起着重要作用。 关键词：肺炎克雷伯菌；ＥＳＢｋｓ；整合子；多重耐药 中图分类号：Ｒ３７８．９９ ６ 文献标识码：Ａ ＥＳＢＬｓ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｃｌａｓｓ Ｉ ｉｎｔｅｇｒｏｎ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ＧＵＯ Ｈｏｎｇ－ｙａｎｇ，ＺＨＵ Ｇｕａｎｇ－ｚｅ，ＬＩＡＮ Ｓｈｕ－ｌｉｎ．（Ｔｈｅ ｚ ｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＣｈａｎｇｃｈｕｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｏＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｅｎ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００２１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｈｔｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｉｔｃ ｏｆ ｃｌａｓｓ １ ｉｎｔｅｇｒｏｎ ｃａｒｉｒｅｄ ｂｙ Ｋ．ｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅ ｆｒｏｍ ｄｉｆ－ ｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ，ａｎｄ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｃａｓｓｅｔｔｅｓ．Ｍｅ￣ｏｄｓ Ｒｏｕｔｉｎｅ ｍｅｔｈｏｄ Ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ Ｋ．ｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅ；ｉｄｅｎｔｉｉｆｄｅ ｂｙ Ｖ ＩＴＥＫ；Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｓｕｓｅｅｐ ｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｗａｓ ｔｅｓｔｄｅ ｗｉｈｔ ｈｔｅ Ｋ—Ｂ ｄｉｆｕｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ；Ｃｌｓａｓ １ ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｙｂ ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｌｓａｓ Ｉ ｉｎｔｅｇｒｏｎ ｇｅｎｅ Ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ９３．２％ｏｆ １７８ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ＥＳＢＬｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅ￣ｉｅＵａ ｐｎｅｕｍ ｏｎｉａ．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｔｒｉａｎｓ ｏｆ ｅｌａｓｓＩ ｉｎｔｅ— ｇｒｏｎｓ ｓｈｏｗｅｄ ｈｉｇｈｅｒ ｍｕｈｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ａｎｄ／ｏｒ ｆｌｕｏｒｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ ａｎｄ／ｏｒ ｅｅｐｈａｌｏｓｏｐｆｉｓｎ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｆｏ ｅｌａｓｓＩ ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｌａｓｓｌ ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ ｗｅｒｅ Ｐ ｒｅｖａｌｅｎｔ ｉｎ ＥＳＢｋｓ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍ ｏｎｉａ ａｎｄ ｐｌａｙｅｄ ａｎ ｉｍｐｏｒ— ｒａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｂｎ ｏｆｍｕｈｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍ ｏｎｉａ；ＥＳＢＬｓ；Ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ；Ｍｕｈｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ （Ｃｈｉｎ．，Ｌａｂ脚，２０１０，１４：１０９７） 本研究从基因水平人手检测产超广谱ｌ３一内酰胺 ｃＡＧｃＡｃＡＴＧ℃ＧＴＧ ＴＡＧＡｌｒｒ＿３’，目的基因长度为４９１ 酶（ＥＳＢ￣）Ｈ￥炎克雷伯菌的Ｉ类整合子，通过分析细 ｂｐ，由宝生物公司合成。 ’ 菌的耐药性，探讨在整合子参与下，细菌间耐药基因 １．４各样品种克雷伯菌的分离鉴定 的水平转移与耐药性的关系。 用法国生物梅里埃公司的Ｖｉｔｅｋ一３２型微生物分 １材料与方法 析仪、ＧＮＩ＋鉴定卡进行菌株鉴定。 １．１样本来源 １．５产超广谱Ｊ３．内酰胺酶菌株表型筛查和确证试 长春中医药大学附属医院２００５年至２００８年临 验 床分离的４１９株产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌。 参照ＣＬＳＩ肺炎克雷伯、产酸克雷伯和大肠杆菌 １．２仪器及试剂 中ＥＳＢＬ ｓ检测的筛查和确证标准，凡抑菌环头孢噻 Ｖｉｔｅｋ．３２型全自动微生物分析仪及ＧＮＩ＋细菌 肟或氨曲南≤２７ １１３ｎ３、头孢曲松≤２５ Ｉ＇ＩＭＴＩ、头孢泊肟 鉴定卡均为法国生物梅里埃公司产品；药敏纸片均 或头孢他啶≤２２ １ＴＩＩＴＩ者为高度可疑株；同时使用头 购自杭州天和微生物试制有限公司；亚胺培南购自 孢噻肟和头孢他啶，单独和联合克拉维酸复合制剂， 法国生物梅里埃公司；Ｍ．Ｈ琼脂为杭州天和微生物 任何一个药物，在加克拉维酸后，抑菌环直径与不加 试剂公司产品。 克拉维酸的抑菌环相比增大值≥５ Ｂｉｎ， 断为产 １．３引物设计 ＥＳＢＬｓ菌株。 根据Ｉ类整合酶序列＿４ｊ设计引物，ＫＰｉｎｔＦ：５． １．６ ＰＣＲ扩增 ＴＧＣＧＧＧＴＴＡＡＧＧＡＴＣＴＡＧＡＴＩＴ－３’： ＫＰｉｎｔＲ： ５． 采用改进的酚／氯仿法抽提ＤＮＡ模版，以Ｏ１群 －・－——１０９８‘－－—— Ｃｈｉｎ Ｊ Ｌａｂ Ｄｉａｔｍ，Ｊｕｌｙ，２Ｏ１Ｏ，、ｒ０ｌ １４。Ｎｏ．７ 霍乱弧菌ＳＫ１０作为Ｉ类整合子阳性对照菌，以纯水 为阴性对照。用引物ＫＰｉｎｔＦ和ＫＰｉｎｔＲ，反应体系 为：１０×ＥｘＴａｑ Ｂｕｆｆｅｒ，２．５ ；ｄＮＴＰ（１０ ｍＭ），０．５ ； ＣＡＦ／ＣＡＲ，各０．５ ｔｄ；ＥｘＴａｑ酶，０．２５ ｔｔｌ；Ｔｅｍｐｌａｔｅ，１ ２．３ Ｉ类整合子阳性菌株与细菌耐药的关系 对 比Ｉ类整合子阳性菌株与阴性菌株对抗菌药物的耐 药率，并做统计分析，结果见表２。除亚胺培南均敏 感外，Ｉ类整合子阳性菌株对头孢曲松、哌拉西林、 ；ｄｄＨａ２０，１９．７５ ；总体积，２５ ｌ。反应条件为： ９４℃预变性４ ｍｉｎ，然后进入循环，９４℃变性３０ ｓ， 丁胺卡那霉素和头孢噻肟的耐药率均在８８％以上， 其中氨苄西林的耐药性达到１００％，对头孢他啶、环 ５６℃退火３０ ｓ，７２ｃ【＝延伸６０ Ｓ，共３Ｏ个循环，最后 ７２￣Ｃ延伸５ ｍｉｎ，１％琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像系 丙沙星、复方磺胺甲硝唑、四环素、左氧氟沙星、氨曲 南、和头孢噻肟的耐药率也高于５５％，而Ｉ类整合子 统观察结果。 １．７药敏测定 采用纸片扩散Ｋ．Ｂ法，依ＣＬＳＩ２００６年标准判读 结果。 ２结果 ２．１ ４１９份临床标本包括痰、腹水、尿、阴拭子、血 液等，结果显示从痰标本中分离出的肺炎克雷伯菌 最多３１２株占７４．４６％，其次是尿液３６株占８．５９％， 具体分布情况见表１。４１９株肺炎克雷伯菌中产Ｅｓ． ＢＬｓ菌株１９１株，占４５．５８％。 表１ ４１９株肺炎克雷伯菌在临床标本中的分布 ２．２ Ｉ类整合子基因检测对１９１株产ＥＳＢＩｚ肺炎 克雷伯菌进行Ｉ类整合酶基因检测，结果有１７８株 菌扩增出４９１ ｂｐ左右的扩增产物，和文献报道ｉｎｔＩ１ 片段大小相符【５Ｊ，确定为Ｉ类整合子阳性菌株，检出 率为９３『２％。部分样本电泳见图１，其中６｛Ｉｊ｝为阳性 对照，１＃为阴性对照，其他４份标本均为产ＥＳＢＬｓ 肺炎克雷伯菌。 １｝｝为阴性对照，２为ＭＬ２０００，３－５＃为临床分离的产ＥＳＢＩｚ ＫＰ ６＃为阳性对照。 图１ Ｉ类整合子基因检测ＰＣＲ凝胶电泳图 阴性菌株对它们的耐药率大多数都低于３０％，有些 甚至低于１０％，如头孢他啶、头孢吡肟、妥布霉素等 第３、４代头孢菌素。 表２ Ｉ类整合子阳性及阴性产Ｆ＿ＳＩＩＬｓ克雷伯菌 耐药表型比较 ３讨论 ＥＳＢＬｓ是近年来国际上研究较为活跃一种重要 的酶＿５， 。ＥＳＢＬｓ大多数由ＴＥＭ．１，ＴＥＭ．２及ＳＨＶ．１ 发生突变的衍生物，能水解青霉素类、头孢菌素类及 单酰胺类，能被克拉维酸等酶抑制剂所抑制，对头霉 素类及碳青霉烯类敏感。作者从４１９株临床标本分 离的肺炎克雷伯菌中检出１９１株产ＥＳＢＬｓ ＫＰ，检出 率高达４５．５８％，与国内文献报道基本一致ｌ７Ｊ。可 见随着近年来大量新广谱抗生素，特别是第三代头 孢菌素的使用率增高，肺炎克雷伯菌的产ＥＳＢＬｓ酶 的比率呈现越来越高的趋势，应引起重视。 中国实验诊断学２０１０年７月第１４卷第７期 整合子介导的多重耐药机制引起耐药基因高 效、快速转移而备受重视。它作为一种可移动基因 元件，通过整合酶的作用，捕获外来的耐药基因（包 括对氨基糖苷类、喹喏酮类、磺胺和消毒剂等耐药的 基因）。整合子一基因盒系统是新的可移动基因元 件，能捕获和整合细菌的耐药基因，是细菌多重耐药 形式和传播的主要内在机制ｌ８ ，而抗菌药物的选 择压力是导致细菌耐药性存在、发展的主要客观因 素，也向临床治疗多重耐药菌株提出了严峻的挑战。 ＪＯＮＥＳ等＿１ｌ＿发现耐药性可通过转化转移给大肠埃 希菌，说明整合子可由质粒携带。杜艳等＿１ ｊ研究认 为克雷伯菌的多重耐药与Ｉ类整合子密切相关。表 明Ｉ类整合子广泛地存在产ＥＳＢＬｓ肺炎克雷伯菌 中，携带Ｉ类整合子的细菌更易表现出对氨基糖苷 类、喹诺酮类及头孢菌素类药物的耐药性。说明整 合子对细菌耐药性的播散确实有一定的作用，因此， 整合子系统介导的细菌耐药机制越来越引起研究者 们的关注，其中对多重耐药性的研究有着非常重要 的意义［１３１。 从表２可以看出，产ＥＳＢＬｓ菌株对抗生素的耐 药率大部分均高于不产ＥＳＢＬｓ菌株，并且与喹诺酮 类、氨基糖苷类等多种抗生素存在交叉耐药。这是 由于ＥＳＢＬｓ的耐药基因常由可结合性大质粒编码， 可携带对喹诺酮类、氨基糖苷类等多种抗生素的耐 药基因形成具有多种耐药表型的泛耐药菌＿ｌ 。样 品中产ＥＳＢＬｓ株耐药率极高，除对亚胺培南和头孢 西丁外几乎对其他所有抗菌药物均耐药，哌拉西林／ 他唑巴坦具有很强的抗菌作用，本组耐药率为 ４３．３％，可能是由于他唑巴坦对ＥＳＢＬｓ酶有灭活作 用，在与哌拉西林联用时，增强了哌拉西林的作 用ｌ１５１。 头孢菌素中以头孢吡肟抗菌作用最强，原因可 能是因为第４代头孢菌素对Ｉ３。内酰胺酶亲和力较 低，应用时问较短，且能快速地通过细菌的外膜屏障 与ＰＢＰ结合而发挥较强的抗菌作用【１６］，本组耐药率 为４４．３％；头霉类抗生素对肺炎克雷伯菌的抗菌活 性优于第一、二代头孢菌素和多数三代头孢菌素，本 组头孢西丁耐药率为２．９％，这可能与其含有对Ｅｓ— ＢＬｓ酶相对稳定的７一ａ甲基侧链有关 １ 。亚胺培南 仍是所有被测药物中对肺炎克雷伯菌抗菌作用最强 的抗生素，本组１９１份菌株对亚胺培南均敏感。可 ＿１０９９一 见对产酶肺炎克雷伯菌的临床经验性用药一般首选 碳青霉烯类，其次是Ｊ３一内酰酶类抗生素和酶抑制剂、 头霉类抗生素及其他敏感抗生素。 参考文献： ［１］ＬｙｄＩＡＢａｓｓ，ＬＩｅｂｅｒｔ ｃＡ，ｌｅｅＭＤ．Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆｉｎｔｅ— ｇｒｏｎｓ，ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｍｕｈｉｐｌｅｄｍｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ｉｎ Ａｖｉａｎ Ｅｓ・ ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ［Ｊｊ．ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９９，４３（１２）：２９２５． １２］Ｒｏｓｓｅｒ ＳＪ，Ｙｏｕｎｇ Ｈ Ｋ．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｎａｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌａｓｓ １ ｉｎｔｅ－ ｇｒｏｎｓ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ａｑｕａｔｉｃ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｌ Ｊｊ．Ａｎｔｉｍｉｅｒｏｂ Ｃｈｅｍｏ山一 ｅｒ，１９９９，４４（１）：１１． ３］Ｂｏｕ Ｇ，Ｏｌｉｖｅｒ Ａ，ｏｊｅｄａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＦＯＸ一４，ａ ｎｅｗ ＡｍｐＣ—－ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｄ・ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｅｔａ－ｌａｃｔａｍａｓｅ ｆｒｏｍ ａｌｌ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｓｔｒａｉｎ ｉｓｏｌａｔｄｅ ｉｎ Ｓｐａｉｎ［Ｊ］．Ａｎｔｉ—ｍｉｃｍｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２ＯＯＯ，４４（９）： ２５４９． １４］Ｅｓｓａｃｋ ＳＹ，Ｈａｌｌ ＬＭ，ＰｉｌｌａｙＤＧ，ｅｔａ１．Ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆⅪｅｈ— ｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｈｔ ｅｘｔｅｎｄｅｄ—ｓｐｅｃｔｎｌｌｎ ｂｅｔａ－ｌｃａｔａｍａｓｅｓ ｉｓｏｌａｔｄｅ ｉｎ １９９４ ａｎｄ １９９６ ａｔ ａ ｔｅａｃｈｉｎｇ ｈｏｓｐｉｔｌａ ｉｎ Ｄｕｒｂａｎ，Ｓｏｕｔ｝ｌ Ａｆｉｒｃａ【Ｊｊ．Ａｎ— ｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００１，４５（１）：８８． ［５］沈定霞，罗燕萍，曹敬荣等．肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌ＡｍｐＣ 内酰胺酶的表型检测［Ｊ］．临床检验杂志，２００７，２５（１）：４． 【６］Ｈ Ｂｙｅｏｎ ＪＨ，ＹＵ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ ｓｅｒｏｖａｒ ｔｙｐｈｉｓｔａｉｎｓ ｉｓｏｌｔａｄｅ ｉｎ ｋｏｒｅａ ｃｏｎｔｉａｎｉｎｇ ａ ｍｕｌｔｉｄｍｇ ｒｅｓｉｓｔｎａｃｅ ｃｌａｓｓ ｌｉｎｔｅｇｒｏｎ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００３，４７（６）：２００６． １７］Ｋａｎｇ ＳＧ，Ｌｅｅ ＤＹ，Ｓｈｉｎ ＳＴ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｎｇｅｉｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ＳＵＳ— ｃｅｐ ｔｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｃｌａｓｓ １ ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｅｔ Ｓｅｅ，２００５，６（３）：２０１． ［８］Ｇａｚｅｗ Ｈ，ＡｉｌｄｏｕｓｌａｌＴｌ Ｎ，Ｈａｗｋｅｙ ＰＭ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｃｌａｓｓ １ ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ ｉｎ ｓｑｕａｔｅｍａｒｙ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｃｏｍｐｏｕｎｄ－ｐｏｌｌｕｔｄｅ ｅｎｖｉｏｒｍｅｎｔ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏ山ｅｒ，２００５，４９（５）：１８０２． １９ ＪＪＯＮＥＳＭ Ｅ，ＰＥＴＥＳ Ｅ，ＷＥＥＲＳＩＮＫＡＭ，ｅｔ ａ１．Ｗｉｄｅｓｐ ｒｅａｄ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ ｃａｕｓｉｎｇｍｕｈｉｐｌｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔｎａｃｅ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ， １９９７，３４９（９０６７）：１７４２． ［１０］杜艳，陈玲玲，邵天波等．克雷伯菌临床菌株中Ｉ类整合子相 关基因的分析［Ｊ］．昆明医学院学报，２００５，２６（１）：１７． ［１１］顾兵，童明庆，刘根焰等．整合子介导大肠埃希菌和克雷伯菌 多重耐药机制的研究［Ｊ］．中华检验医学杂志，２００６，２９（８）：７２５． １１２ ＪＮｕｅｓｃｈ－ｌｎｄｅｒｂｉｎｅｎ Ｍ Ｔ，Ｋａｙｓｅｒ Ｆ Ｈ，Ｈａｃｈｌｅｒ Ｈ．Ｓｕｒｖｅｙ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌｒａ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ＳＨＶ ｂｅｔａ－ｌａｃｔａｍａｓｅｓ ｉｎ Ｅｎｔｅｍｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ ｉｎ Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ： ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｅｎｚｙｍｅｓ，ＳＨＶ一１ ｌａｎｄ ＳＨＶ一１２ ｌ Ｊ ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｍｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９７，４１（５）：９４３． ［１３］王赛芳，潘钦石，周铁丽，等．肺炎克雷伯菌超广谱Ｂ－内酰胺酶和 ＡｍｐＣ酶基因检测及耐药性分析［Ｊ］．中国微生态学杂志，２００６，１８ （６）：４７４． １１４］Ｐｆｅｉｆｌｅ Ｄ，Ｊａｎａｓ Ｅ，Ｗｅｄｅｍａｎｎ Ｂ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＡｍｐＣ￣一ｌａｃｔｎａｍｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｅｎｔｅｒｏｂａｅｔｅｒｃｌｏａｃａｅ ｌＪｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２０００，４（１）：１６９． ［１５］普珍，高山，刘小康 肺炎克雷伯杆菌对头孢菌素类抗生素 耐药机制的研究［Ｊ］．四川生理科学杂志，２００６，２８（１）：２０． （收稿日期：２００８—１０—１３）
