草莓枯萎病菌对16种杀菌剂的敏感性检测

陈宏州;吴祥;杨晨;张蕾;吉沐祥

【摘 要】We determined the indoor toxicity of 16 kinds of fungicides to Fusarium oxysporum f.sp.fragariae by using myceli-um growth rate method .The results indicated that the EC 50 values of Tebuconazole , Diniconazole , Phenazine-1-carboxylic acid , Difenoconazole, Myclobutanil, Phenamacril, Pyraclostrobin, Triadimefon, Harpin protein, Azoxystrobin, Hymexazol, Ethylicin, Oligosaccharins, Carbendazim, Kasugamycin and Jinggangmycin against Fusarium oxysporum f.sp.fragariae were 0.1544, 0.1658, 0.4455, 0.71, 2.9167, 3.0657, 3.3535, 3.4188, 5.0728, 6.5805, 7.0021, 16.6701, 21.2633, 24.2783, 35.3456 and 101.1356 μg/mL

respectively.Therefore, the tested Fusarium oxysporum f.sp.fragariae was differently sensitive to 16 fungicides , and was the most sensitive to Tebuconazole .%采用菌丝生长速率法在室内测定了16种杀菌剂对草莓枯萎病菌的毒力。结果表明，戊唑醇、烯唑醇、申嗪霉素、苯醚甲环唑、腈菌唑、氰烯菌酯、吡唑醚菌酯、酮、超敏蛋白、嘧菌酯、恶霉灵、乙蒜素、氨基寡糖素、多菌灵、春雷霉素和井冈霉素对草莓枯萎病菌的EC50值分别为0．1544、0．1658、0．4455、0．71、2．9167、3．0657、3．3535、3．4188、5．0728、6．5805、7．0021、16．6701、21．2633、24．2783、35．3456和101．1356μg/mL。供试草莓枯萎病菌对不同杀菌剂的敏感性差异较大，对其中的戊唑醇最敏感。

【期刊名称】《江西农业学报》

【年(卷),期】2014(000)009 【总页数】5页(P47-51)

【关键词】草莓;枯萎病菌;杀菌剂;毒力;测定 【作 者】陈宏州;吴祥;杨晨;张蕾;吉沐祥

【作者单位】江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，江苏 句容212400;江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，江苏 句容212400;江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，江苏 句容212400;江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，江苏 句容212400;江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，江苏 句容212400 【正文语种】中 文 【中图分类】S481.9

草莓(Fragaria ananassa Duch)以果实柔软多汁、味道鲜美、营养丰富、生育期短、结果早和产量高等特点而备受欢迎,在国际市场上占有重要的经济地位[1]。由尖孢镰刀菌草莓专化型(Fusarium oxysporum f. sp. fragariae)从根部侵染引起的草莓枯萎病,是危害草莓的主要土传病害,该病可导致草莓结果减少、果实无法正常膨大、果实品质低,甚至全株枯死。在草莓的生产中,大棚连作现象很普遍,从而导致草莓枯萎病的发生越来越严重[2],植株发病率可达.2%[3]。由于连作障碍危害严重,因此草莓种植户拆棚的事例频频发生,这严重阻碍了草莓种植业的健康发展。目前对草莓枯萎病仍以化学防治为主,常用百菌通、代森锰锌、特克多、多菌灵和甲基托布津等杀菌剂,但因连续多年使用这些药剂,它们的防效逐年降低,甚至达到无法控制该病的程度[4]。因此,必须调整对草莓枯萎病的防治策略,合理使用杀菌剂,同时也急需筛选出更多能有效防治草莓枯萎病的杀菌剂。

笔者采用菌丝生长速率法测定了草莓枯萎病菌对16种杀菌剂的敏感性,研究了多种杀菌剂对草莓枯萎病菌的抑菌效果,以期为开发防治草莓枯萎病的新药剂和科学合理地使用杀菌剂提供依据。

1.1 供试菌株 草莓枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. fragariae),由江苏丘陵地区镇江农业科学研究所植保研究室分离,并保存于4 ℃冰箱中备用。

1.2 供试培养基 马铃薯培养基(PDA)[5],用于草莓枯萎病菌的分离、保存以及毒力测定。

1.3 供试药剂 97.09%多菌灵(Carbendazim),上海升联化工有限公司;97.8%腈菌唑(Myclobutanil)、96.6%嘧菌酯(Azoxystrobin),江苏耘农化工有限公司;96.3%苯醚甲环唑(Difenoconazole),江苏辉丰农化股份有限公司;92%烯唑醇

(Diniconazole)、95%戊唑醇(Tebuconazole)、95%酮(Triadimefon),江苏盐城利民农化有限公司;95%吡唑醚菌酯(Pyraclostrobin),德国巴斯夫股份有限公司;98.3%氰烯菌酯(Phenamacril),江苏省农药研究所股份有限公司;99%恶霉灵(Hymexazol),威海韩孚生化药业有限公司;90%乙蒜素(Ethylicin),开封大地农化生物科技有限公司;67.1%井冈霉素(Jinggangmycin),杭州正诚农化有限公司;65%春雷霉素(Kasugamycin),华北制药股份有限公司;95%申嗪霉素(Phenazine-1-carboxylic acid),上海农乐生物制品股份有限公司;80%氨基寡糖素

(Oligosaccharins),潍坊华诺生物科技有限公司;3%超敏蛋白(Harpin protein),江苏省农垦生物化学有限公司。将97.09%多菌灵用适量0.1 mol/L的盐酸溶液溶解；将67.1%井冈霉素、65%春雷霉素、80%氨基寡糖素和3%超敏蛋白分别用适量无菌水溶解；将其它药剂分别用适量丙酮溶解，并加入10%的吐温-80。将各药剂均配制成10000 μg/mL的母液，置于4 ℃冰箱中备用。

1.4 含药培养基的制备 采用倍比稀释法，分别将上述16种供试药剂的母液依次稀释成1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9063、

1.9531和0.9766 μg/mL的药液,然后分别将1 mL药液与9 mL PDA培养基在培养皿内混匀,制成含系列梯度浓度药剂的PDA培养基；以含无菌水的PDA培养基作空白对照。各处理重复4次。

1.5 敏感性检测 采用菌丝生长速率法[6],将保留的草莓枯萎病菌转接到不含药剂的PDA平皿中,在25 ℃下活化96 h；然后在近菌落边缘用打孔器制取直径为5 mm的菌饼,并将其转接到上述含不同浓度药剂或空白对照的PDA平皿中,在25 ℃下培养96 h左右；待对照中菌落长至约平皿直径的4/5时,采用十字交叉法量取菌落的直径。

计算菌落直径的均值,并按照下列公式计算菌丝生长平均抑制率:菌丝生长平均抑制率(%)=[(对照菌落直径均值-处理菌落直径均值)/(对照菌落直径均值-接种菌饼直径)]×100%。采用DPS 13.0专业版数据处理系统,计算出各药剂对草莓枯萎病菌菌丝生长抑制的回归方程、EC50及其95%置信限,并以最敏感药剂的EC50值为基准求出各药剂的相对毒力指数。

2.1 16种杀菌剂对草莓枯萎病菌菌丝生长的影响 当多菌灵、腈菌唑、苯醚甲环唑、烯唑醇、戊唑醇、酮、嘧菌酯、吡唑醚菌酯、氰烯菌酯、恶霉灵、乙蒜素、井冈霉素、春雷霉素、申嗪霉素、氨基寡糖素和超敏蛋白在含药PDA培养基中处理浓度为0.09766～100.00000 μg/mL时,对草莓枯萎病菌菌丝生长的抑制率分别为1.26%～82.85%、6.10%～91.08%、22.07%～100.00%、43.75%～100.00%、47.26%～100.00%、3.%～95.91%、3.45%～84.73%、5.19%～93.40%、3.78%～96.22%、3.06%～86.22%、2.90%～68.60%、2.96%～57.14%、3.00%～69.50%、21.55%～100.00%、5.61%～71.94%和1.56%～92.71%(表1)。这表明草莓枯萎病菌对不同杀菌剂敏感性的差异较大,各药剂对草莓枯萎病菌菌丝生长的最低抑制浓度(MIC值)也有较大差异。 续表1：

续表1：

2.2 草莓枯萎病菌对16种杀菌剂敏感性的比较 敏感性检测结果表明:戊唑醇、烯唑醇、申嗪霉素、苯醚甲环唑、腈菌唑、氰烯菌酯、吡唑醚菌酯、酮、超敏蛋白、嘧菌酯、恶霉灵、乙蒜素、氨基寡糖素、多菌灵、春雷霉素和井冈霉素对草莓枯萎病菌的EC50值分别为0.1544、0.1658、0.4455、0.71、2.9167、3.0657、3.3535、3.4188、5.0728、6.5805、7.0021、16.6701、21.2633、24.2783、35.3456和101.1356 μg/mL。在16种供试杀菌剂中,戊唑醇对草莓枯萎病菌菌丝生长的抑制活性最强,而井冈霉素的抑制活性最低。以最敏感药剂戊唑醇的EC50值(0.1544 μg/mL)为基准，计算得出了不同杀菌剂的相对毒力指数,烯唑醇、申嗪霉素和苯醚甲环唑的相对毒力指数在1.0～6.0之间；腈菌唑、氰烯菌酯、吡唑醚菌酯、酮、超敏蛋白、嘧菌酯和恶霉灵的相对毒力指数在18.0～46.0之间；乙蒜素、氨基寡糖素、多菌灵、春雷霉素和井冈霉素的相对毒力指数分别为107.97、137.72、157.24、228.92和655.02(表2)。说明戊唑醇、烯唑醇和苯醚甲环唑等类杀菌剂以及农用抗菌素类杀菌剂申嗪霉素对草莓枯萎病菌具有较强的室内抑菌活性，具有较好的应用前景；而常规药剂多菌灵以及农用抗菌素类药剂春雷霉素和井冈霉素对草莓枯萎病菌的抑制活性相对较低。

草莓连作障碍问题尤其是草莓枯萎病的防治,一直以来都引起了各级植保部门的高度关注。防治草莓枯萎病的措施有农业防治、物理防治、化学防治和生物防治等。农业防治包括作物轮作、移栽脱毒种苗、选育抗病品种以及高架基质栽培等,但由于其提高了劳动强度、生产成本或者解除连作障碍的效果不佳等因素,因此未能在草莓种植中得到广泛应用。物理防治的方法主要是利用高温土壤消毒技术,如袁会珠等采用室外小区实验方法,在草莓栽培过程中利用客土法、人工基质法、太阳能土壤消毒方法防治草莓土传病害,3种防治方法的增产幅度分别高达100%、115%和129%,但该类方法存在劳动强度大和严重环境污染问题[3,7]。对草莓枯萎病等

土传病害进行生物防治，从而解除草莓连作障碍问题是当前研究的热点之一，例如：王占武等研究了拮抗细菌B501在草莓根际的定植及对草莓黄萎病的防治效果,连续两年的田间防效分别达到了93.9%和96.8%[8]；马宝红等发现VAM菌根菌(Glomus mosseae和Glomus versiforme)对草莓有促生、防治黄萎病的效果[1]；冯玉龙等利用拮抗芽孢杆菌发酵液的硫酸铵沉淀物来防治草莓黄萎病[9]；徐淑华等利用两株拮抗细菌和多种植物的提取物来防治草莓黄萎病,并取得了初步成效[10]；甄文超等利用药用植物源土壤添加物控制草莓再植病害,针对草莓再植病害3种主要病原菌(Rhizoctonia solani、Fusarium oxysporum和Verticillium dahliae)筛选了125种药用植物腐解物提取液进行抑菌活性实验,并证明川芎和苦参的等量混合物有望用于草莓黄萎病的防治[11]；赵秀娟等从草莓根围分离的拮抗细菌发酵液对草莓重茬病害有一定的防效[12]；宋志伟等研究表明一种复合微生物制剂对草莓黄萎病的田间防效达76.9%～84.6%[13]；Vosatka等用AMF (arbuscular mycorrhizal fungi)和Pseudomonas putida同时接种草莓根际土壤,发现它们具有增效互作作用[14];利用Agrobacterium radiobacter能够促进AMF在草莓根际的定植[15]； Porras等利用太阳能土壤消毒和木霉菌剂相结合的方法进行试验,发现在太阳高温消毒后再采用添加生物菌剂的方法,两年防效可达84.5%[16]。但在当前的草莓生产中,防治草莓枯萎病等土传病害,仍缺乏高效稳定的生防制剂。

据杨焕青等报道,草莓枯萎病菌对类杀菌剂十分敏感,烯唑醇、戊唑醇、腈菌唑和苯醚甲环唑对草莓枯萎病菌的毒力是多菌灵的238.85 ～58.13倍,其中又以烯唑醇和戊唑醇的毒力最高。类药剂除抑菌作用优异外,还对植物生长具有调节作用,应是取代多菌灵等常用杀菌剂防治草莓枯萎病的高效药剂[4]。本文室内毒力测定结果表明，16种杀菌剂对草莓枯萎病菌的毒力大小顺序为戊唑醇>烯唑醇>申嗪霉素>苯醚甲环唑>腈菌唑>氰烯菌酯>吡唑醚菌酯>酮>超敏蛋白>嘧菌酯>恶

霉灵>乙蒜素>氨基寡糖素>多菌灵>春雷霉素>井冈霉素。本研究结果与相关的报道[4,17]有一定的差异,这可能是由病原菌菌株之间的差异造成的。本研究只进行了室内毒力测定，还有待于在田间进一步开展药剂防治试验；同时对各类药剂的应用技术和残留动态还需进一步研究,以确保草莓的绿色无公害生产。

【相关文献】

[1] 马宝红,甄文超,曹克强,等. VAM真菌对草莓促生、防草莓黄萎病效应初探[J].河北农业大学学报,2004,27 (4) :71-73.

[2] 贾冬梅.大棚草莓的主要病害及防治[J].河北果树,2000(1):38.

[3] 袁会珠,曹坳程,胡玉清,等.破坏臭氧层物质溴甲烷在草莓土壤消毒上的替代技术研究[J].农业环境保护,2000,19(3):159-160,163.

[4] 杨焕青,王开远,范昆,等.草莓枯萎病菌的生物学特性及7种杀菌剂对其抑制作用[J].植物保护学报,2008,35(2):169-174.

[5] 赵斌,何绍江.微生物学实验[M].北京:科学出版社,2002:251.

[6] Schwinn F. Recommended methods for the detection and measurement of resistance of plant pathogens to fungicides: method for fungicide resistance in Tate blight of potato[J]. Plant Protection Bulletin, 1982, 30: 69-71.

[7] Mass J L. Compendium of strawberry disease[M]. Minnesota: American Phytopathological Society, 1998.

[8] 王占武,李晓芝,葛建国,等.拮抗菌B501在草莓根际的定植及对其他根际微生物的影响[J].河北农业科学,2002,6(3):15-18.

[9] 冯玉龙,阳丽,王银定,等.草莓病害生物防治初探[J].河北农业大学学报,1999,22(3):59-61. [10] 徐淑华,蒋继志,姚克文,等.两株拮抗细菌对草莓根腐病的抑制作用[J].河北农业大学学报,2005,28(3):81-83.

[11] 甄文超,曹克强,代丽,等.利用药用植物源土壤添加物控制草莓再植病害的研究[J].中国农业科学,2005,38(4):730-735.

[12] 赵秀娟,徐文桥,张凤巧,等.土壤拮抗微生物对几种草莓病原菌的拮抗作用测试[J].中国农业科技导报,2007,9(2):77-81.

[13] 宋志伟,陈世昌,王小琳,等.复合微生物制剂对重茬草莓生长及产量品质的影响研究[J].土壤通报,2006,37(3):560-562.

[14] Vosatka M, Gryndler M, Prikryl Z， et al. Effect of rhizosphere bacterium

Pseudomonas putida, arbuscular mycorrhizal fungi and substrate composition on the growth of strawberry[J]. Agronomie, 1992, 12: 859-863.

[15] Vosatka M, Gryndler M, Jansa J, et al. Post vitro mycorrhization and bacterization of micropropagated strawberry, potato and azalea[J]. Acta Hort, 2000, 530: 313-324. [16] Porras M, Barrau C, Romero F. Effects of soil solarization and Trichoderma on strawberry production [J]. Crop Protection, 2007, 26: 782-787.

[17] 林才华,王开运,顾春波,等.山东省草莓枯萎病菌对四种类杀菌剂的敏感性检测[J].植物保护学报,2009,36(1):55-60.