江西农业学报２０１１，２３（９）：１５２—１５４ Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｊｉａｎｇｘｉ 不同稀释液对猪精液常温保存效果的研究 朱永雄 （海南省畜牧技术推广站，海南海口５７０２０３） 摘要：选取杜洛克公猪精液作为试验材料，比较５种稀释液对猪精液的保存效果，结果表明：用葡萄糖一柠檬酸稀释液， 所保存精液的ｐＨ值、精子活率、精子畸形率等品质指标表现良好，且稀释液的成本低廉，自配简单易行，适于农村养猪户推 行；基层常用的葡萄糖稀释液保存３ ｄ时的精子活率性状表现不佳，仅适合于现配现用。ＢＬ＿液（美国）稀释液的保存效果也 比较好，但该稀释液组分复杂，配制较难，成本也较高，可在规模养猪场中推广。 关键词：猪；精液；保存；稀释液；精子活率；精子畸形率 中图分类号：￥８２８文献标识码：Ａ文章编号：１００１—８５８１（２０１１）０９—０１５２—０３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｄｉｌｕｅｎｔｓ ｏｎ Ｂｏａｒ Ｓｅｍｅｎ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｔ Ｎｏｒｍａｌ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ＺＨＵ Ｙｏｎｇ—ｘｉｏｎｇ （Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈａｉｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｈａｉｋｏｕ ５７０２０３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ Ｄｕｒｏｃ ｂｅａｒ ｓｅｍｅｎ ｗａｓ ｃｈｏｓｅｎ ａｓ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ ｍａｔｅｒｉａｌ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ５ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｄｉｌｕｅｎｔｓ ｏｎ ｂｏａｒ ｓｅ－ ｍｅｎ ａｔ ｎｏｒｍａｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｉｎｄｅｘｅｓ（ｐＨ—ｖａｌｕｅ，ｓｅｐｒｍ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｎａｄ ｓｅｐｒｍ ｄｅ－ ｆｏｒｍｉｔｙ ｒａｔｅ，ｅｔｃ．）ｏｆ ｂｏａｒ ｓｅｍｅｎ ｗｈｉｃｈ Ｗａｓ ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｇｌｕｃｏｓｅ—ｃｉｔｉｒｃ ａｃｉｄ ｄｉｌｕｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｗｅｌｌ；ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｇｌｕｃｏｓｅ—ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ ｄｉｌｕｅｎｔ Ｗａｓ ｃｈｅａｐ，ａｎｄ Ｗａｓ ｅａｓｉｌｙ ｐｒｅｐａｒｅｄ，ＳＯ ｉｔ Ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｂｅｉｎｇ ｐｏｐｕｌａｒｉｚｅｄ ｉｎ ｃｏｕｎｔｒｙｓｉｄｅ．Ｔｈｅ ｓｐｅｒｍ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆｂｅａｒ ｓｅ－ ｍｅｎ ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ—ｕｓｅｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｄｉｌｕｅｎｔ ｆｏｒ ３ ｄａｙｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｎｏｔ ＳＯ ｗｅｌｌ，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｄｉｌｕｅｎｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｑｕｉｃｋｌｙ ｕｓｄｅ ｏｆｒ ｔｈｅ ｂｏａｒ ｓｅｍｅｎ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ＢＬ－－ｌｉｑｕｉｄ（ｍａｄｅ ｉｎ Ａｍｅｒｉｃａ）Ｗａｓ ｂｅｔｔｅｒ，ｂｕｔ ｔｈｉｓ ｄｉｌｕｅｎｔ ｈａｄ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄ ｈｉ曲ｃｏｓｔ，ａｎｄ Ｗａｓ ｈａｒｄｌｙ ｐｒｅｐａｒｅｄ，ＳＯ ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｏｎｌｙ ｂｅ ｐｏｐｕｌａｒｉｚｅｄ ｉｎ ｈｏｇｇｅｒｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂｏａｒ；Ｓｅｍｅｎ；Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ；Ｄｉｌｕｅｎｔ；Ｓｐｅｒｍ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ；Ｓｐｅｒｍ ｄｅｆｏｒｍｉｔｙ ｒａｔｅ 采用猪人工授精技术能够充分利用优秀种公猪，发 （３）葡萄糖一卵黄稀释液：葡萄糖２ ｇ，加蒸馏水至 挥其良种优势，快速扩大优良种畜群的优良性状的效应， １００ ｍＬ，过滤，煮沸消毒，冷却后取上液９７ ｍＬ，加新鲜卵 提高种公猪的利用率和效益。我国经过数年的推广，这 黄３ ｍＬ，青霉素与链霉素各５万国际单位。 项技术已得到了广泛的应用，普及率达到８５％以上。但 （４）葡萄糖一柠檬酸钠一卵黄稀释液：葡萄糖５ ｇ， 是，猪精液的保存不像牛精液保存技术那么成熟，保存温 柠檬酸钠０．５ ｇ，加蒸馏水至１００ ｍＬ，过滤，煮沸消毒，冷 度、稀释液种类等影响猪精子的活率，影响母猪受胎率， 却后取上液９７ ｍＬ，加新鲜卵黄３ ｍＬ，青霉素与链霉素各 因此，精液保存时间，精液保存效果是人工授精应用成败 ５万国际单位，充分混合后使用。 的关键性因素。目前，猪精液稀释液种类很多，国内许多 （５）Ｂ卜液（美国）：葡萄糖２．９％，柠檬酸钠ｌ％，碳 学者对稀释液作了大量研究 － ，但保存效果有差异。 酸氢钠０．２％，氯化钾０．０３％，青霉素１０００ Ｕ／ｍＬ，双氢 稀释液多为现用现配，取用操作不便。为了探讨易于推 链霉素０．０１％。 广，药品低廉易得，保存效果良好，简单易行的常温保存 上述试剂均选用分析纯级别试剂。 稀释液，现对５种稀释液进行对比试验。 １．３稀释方法采精之前配制好所需稀释液，并将稀释 １材料与方法 液温度调整到与猪精液温度相一致。精液采取后，进行 １．１试验材料杜洛克种公猪精液３０ ｍＬ。猪精液由 活力检查，并按正常的稀释倍数进行稀释。 海口市灵山种猪场提供。 １．４试验仪器温度计、显微镜、保温箱等常规检验 １．２稀释液配方与试剂 （１）葡萄糖一柠檬酸稀释液： 仪器。 葡萄糖５ ｇ，柠檬酸钠０．５ ｇ，加蒸馏水至１００ ｍＬ，煮沸消 １．５精液的稀释操作规程Ｈ （１）精液采集后应尽快 毒，冷却，使用前加青霉素与链霉素各５万国际单位。 稀释，原精液保存不能太久。 （２）葡萄糖稀释液：葡萄糖５．５ ｇ，加蒸馏水至１００ （２）未经品质检查或检查不合格（活力０．７以下）的 ｍＬ，煮沸消毒，过滤，冷却，用前加青霉素与链霉素各５ 精液不能稀释。 万国际单位。 （３）稀释液与精液要求等温稀释，两者温差不超过１ 收稿日期：２０１１－０８—０９ 作者简介：朱永雄（１９６３一），男，海南澄迈人，兽医师，从事畜牧技术推广工作。 ９期 朱永雄：不同稀释液对猪精液常温保存效果的研究 １５３ ℃，即稀释液应加热至３３～３７℃，以精液温度为标准，来 调节稀释液的温度，绝不能反过来操作。 （４）稀释时，将稀释液沿盛精液的杯壁缓慢加入到 精液中，然后轻轻摇动或用消毒玻璃棒搅拌，使之混合 均匀。 １．７．３精子活率检查方法在载玻片上滴一滴原精液， 然后轻轻放上盖玻片（不要有气泡，盖玻片不游动），在 ３００倍显微镜下观察。精子活动有直线前进、旋转和原 地摆动３种，以直线前进的活力最强。精子活力评定一 般用“十级制”，即计算一个视野中呈直线前进运动的精 子数目。１００％者为１．０级，９０％为０．９级，８０％为０．８ 级，依此类推。 精子活率＝呈直线前进运动精子 总精子数 Ｘｌ０ｏ％ （５）如做高倍稀释时，应进行低倍稀释，待片刻后再 将余下的稀释液沿壁缓慢加人，以防造成“稀释打击”。 １．６试验设计１）。 表１ ５种稀释液组分 种类 组分 １号：葡萄糖一柠檬酸稀葡萄糖、柠檬酸钠、蒸馏水、青霉素、链 释液 霉素 ２号：葡萄糖稀释液 释液 将５种稀释液配方进行分组与编号（表 １．７．４精子畸形率精子畸形评定是通过肉眼６００倍 镜下观察２００个精子中畸形精子所占的比例。精子畸形 类型为：巨型精子、短头精子、双头或双尾精子、顶体膨胀 或脱离、精子头部残缺或尾部分离。 １．７．５ ｐＨ值猪的新鲜精液呈弱碱性，ｐＨ值为７．５ （７．３～７．９），ｐＨ值偏低的精液品质较好，ｐＨ值偏高的精 液，其精子的活率、受胎率及保存效果均显著降低。以精 密ｐＨ试纸（ｐＨ值５．５～９．０）蘸取精液，可见试纸变色， 与比色板比色测出ｐＨ值。 葡萄糖、蒸馏水、青霉素、链霉素 ３号：葡萄糖一卵黄稀葡萄糖、蒸馏水、青霉素、链霉素、卵黄 ４号：葡萄糖一柠檬酸钠葡萄糖、柠檬酸钠、蒸馏水、青霉素、链 卵黄稀释液 霉素、卵黄 一５号：ＢＬ一液（美国） 葡萄糖、柠檬酸钠、青霉素、链霉素、碳 酸氢钠、氯化钾 １．７．６精子密度检查首先测定原精液的品质指标，再将原精液与稀释液 按１：４的比例混合，稀释完毕。进行第一次测定精子品 质指标，然后每隔４ ｈ在进行测定，１ ｄ测定４次，总共测 定３ ｄ。最后比较试验结果。 １．７测定方法 取１小滴精液在清洁的载玻片 上，加上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，不得存在气 泡，也不能使精液外流或溢于盖玻片上，置于显微镜下放 大４００—６００倍观察，按下列等级评定其密度。 密：在整个视野中精子密度大，之间空隙很小，看不 清楚各个精子运动的活动情况，这一级属于“密”，每毫 通过观察及人的嗅觉来主观 通过抗力的测定，可以了解精 １．７．１精液的颜色、气味判断。 １．７．２精子抗力的测定升精液含精子数在ｌ０亿个以上，登记时记以“密”字。 中：精子之间的空隙明显，精子之间的距离约有一 个精子的长度，有些精子的活动情况可以清楚地看到。 子品质好坏。抗力测定时用ｌ％氯化钠溶液来进行，该 这种精液的密度评为“中”，每毫升所含精子数在２—１０ 亿个之间，登记时记以“中”。 稀：精子分散于视野内，精子之间的空隙超过一个 精子的长度，这种精液每毫升所含精子在２亿以下。登 记时记以“稀”。 溶液对精子有一定破坏作用，并因量的增加而增强，精子 如能经受较多的溶液，则抗力较强。测定抗力时保持周 围温度在１８—２５℃，用吸管吸取０．０２ ｍＬ原精液放在玻 璃瓶内，然后，由滴定管滴人消毒的１％氯化钠溶液１０ ｍＬ，轻轻摇动，用玻璃棒取出一滴来镜检，如发现仍有前 行运动的精子，可再滴入１０ ｍＬ １％的氯化钠溶液，直到 精子完全停止前进运动为止。整个测定时间不能超过 １５ ｍｉｎ，最后按下列公式计算抗力指数，抗力指数＝加入 的１％氯化钠溶液总量／０．０２ ｍＬ原精液。猪精液的抗力 指数不能低于１０００。 ２结果与分析 ２．１原精液性状测定与结果分析从表２中可以看出， 原精液的颜色、气味比较正常，其它品质指标比较好。原 精液的抗力指数也不低于１０００，因此该原精液可用于 稀释 。 表２原精液品质指标 ２．２不同稀释液稀释猪精液性状测定与结果分析 ２．２．２不同稀释液对保存精子的畸形率的影响从表 低，为９．２５％；５号稀释液次之，为１０．１５％；３号稀释液 ２．２．１精液ｐＨ值变化从表３中可以看出，随着存放 ４中可以看出，１号稀释液稀释的精液的精子畸形率最 天数的增加，各组稀释液的ｐＨ值也不断的增加。因为 精子不断地从稀释液中吸收养分，精子代谢加剧，有机物 存活 。 最高，为１２．３１％；表明，用１号稀释液稀释精液保存精子 ・ 从表５中可以 ２．２．３不同稀释液对精子活率的影响分解加快，导致＿ｐ．Ｈ值上升。ｐＨ值上升，不利于精子的 效果最好。 １５４ 江西农业学报 ２３卷 看出，经过３ ｄ的稀释保存，１号稀释液稀释的精液精子 度、稀释液的ｐＨ值与稀释液的组分 。１号和５号稀释 活率最高，达５５．５％；５号稀释液次之，达５１．５％；３号稀 液均含有葡萄糖、柠檬酸类组分，对稀释液缓冲保护作用 释液最差，降至３０．５％。 较强，在同一温度的条件下，稀释液ｐＨ值对精液的保存 表３精液ｐＩ－Ｉ值变化 起到关键性的作用 。３号稀释液中含有卵黄物质，本 来在营养剂、抗冷保护剂等比较全面，但是，卵黄物质比 较复杂，易降解，尤其在热天，有利于细菌繁殖，对短期保 存的精子不一定有利，故保存精子的效果不佳 Ｊ。 表４精液中的精子畸形率的测定结果 ％ ３讨论与小结 影响精液质量和精子活率的因素很多，主要有温 表５不同稀释液对精子活率的影响 ％ 综上所述，经研究表明：２号稀释液是基层常用的稀 ［３］吴同山，胡艳娟，张守全．不同稀释剂对母猪繁殖性能的影响 释液，但从试验结果来看，保存３ ｄ时的精子活率性状表 ［Ｊ］．今日养猪，２００７（３）：２ｌ一２３． 现不佳，仅适合于现配现用。１号稀释液效果好，且成本 ［４］高建明，虞桂平，邵世义，等．不同稀释液对猪精液常温保存效 低廉，自配简单易行，适于在农村养猪户中推行。５号稀 果的影响［Ｊ］．中国畜牧杂志，２００７（１３）：１２一ｌ４． 释液的保存效果也比较理想，但该稀释液组分复杂，配制 ［５］林永利，薛永柱．公猪精液保存的研究进展［Ｊ］．福建畜牧兽 医，２００７（２）：９—１１． 较难，成本也较高，可在规模养猪场推广。 ［６］李青旺，汪中良，王立强，等．猪精液保存初步研究［Ｊ］．西北农 林科技大学学报：自然科学版，２００３（４）：６３—６６． 参考文献： ［７］李兆华，钱芙蓉，朴昌植，等．不同稀释液对猪精液４￣Ｃ保存效 ［１］张一玲．家畜繁殖学实验实习指导［Ｍ］．北京：中国农业出版 果的影响研究［Ｊ］．安徽农业科学，２ＯＬＯ（１）：１７９—１８１，１８４． 社，１９９１：１０． ［８］李元山．提高猪人工授精受胎率的措施［Ｊ］．现代农业科技， ［２］何兰花，周美华，陆少华，等．猪精液常温保存的试验［Ｊ］．黑龙 ２０１０（１３）：３５３，３５９． 江动物繁殖，２００５（４）：８—９． 、 （上接第１５１页） ［２］黄玲玲．母鸡产蛋性能的影响因素及预防措施［Ｊ］．现代农业 ４结论 科技，２０１０（１７）：３２８—３２９． ［３］袁正东．海兰褐壳蛋鸡在海南特区饲养效果的初步观察［Ｊ］． 产蛋率及蛋重是衡量蛋鸡产蛋性能的重要指标。 中国家禽，１９９４（４）：２０—２２． 本试验结果表明，海兰褐壳蛋鸡在整个产蛋期内的产蛋 ［４］刘福元．商品蛋鸡产蛋率曲线与生产变化分析［Ｊ］．贵州畜牧 率及蛋重与标准水平相比基本接近，说明海兰褐壳蛋鸡 兽医，２ＯＯｌ（３）：１５—１６． 产蛋性能基本能达到品种标准，海南热带地区饲养也能 ［５］于吉英，陈宽维．文昌鸡产蛋性能及蛋品质研究［Ｊ］．中国家 发挥其遗传潜能。 禽，２００７（３）：２８—３０ ［６］谷新利，王伟，李军伍．鸡开产日龄开产体重和产蛋性能间的 参考文献： 关系［Ｊ］．四川畜禽，１９９６（３）：２０－２３． ［１］王高凡．引起蛋鸡产蛋下降的原因及防治措施［Ｊ］．现代农业 ［７］刘书生，李粉玲，周楠．蛋鸡产蛋性能影响因素应对［Ｊ］．中国 科技，２ｏ１０（１４）：３１６，３１９． 牧业通讯，２００９（１２）：１４—１６．
