益气活血方对大鼠慢性脊髓压迫后脊髓功能恢复的影响

杨宇;夏建龙;陈刚;杨挺;蔡平

【摘 要】目的:研究益气活血方对大鼠慢性脊髓压迫后脊髓功能恢复的影响.方法:从60只SD大鼠中,随机选取10只作为假手术组:仅暴露椎板,未造成脊髓压迫,以生理盐水进行灌胃;其余的SD大鼠采用自体第7颈椎棘突椎间移植法制造大鼠脊髓压迫模型,根据改进Rivaling的斜板实验的平均度数、Tarlov评分、BBB评分将其分为益气活血方高、中、低浓度组,颈复康组,NS组.益气活血方高、中、低浓度组及颈复康组按0.01 mL/g灌胃给药,NS组及假手术组灌服等量NS,每日给药1次,连续4周.连续灌胃4周,分别在开始灌胃时,灌胃1、2、3、4周时,采用改进Rivaling的斜板实验、改良Tarlov评分、BBB评分等指标监测大鼠运动功能.结果:不同浓度的益气活血方及颈复康均能显著增加Rivaling的斜板实验的平均度数、Tarlov评分、BBB评分,与NS组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:益气活血方具有促进大鼠慢性脊髓压迫模型中脊髓功能恢复的作用.%Objective: To study the effects of YiQi HuoXue prescription on functional recovery of spinal cord of the rats with chronic spinal compression. Methods: Sixty SD rats were chosen and ten rats were selected as sham operation group randomly; only exposing vertebral plate, no spinal compression,

intragastric administration of physi-ological saline; other SD rat model with spinal compression was established by the seventh cervical spine

interverte-bral transplantation, according to average degrees of reformed Rivaling inclined plate test, Tarlov score and BBB scores, the rats were divided into high, moderate and low concentrations groups of YiQi HuoXue prescription, Jing-FuKang group and NS group. The rats in high,

moderate and low concentrations groups of YiQi HuoXue prescription and JingFuKang group accepted intragastric administration of the corresponding medicine in the ratio of 0.01mL/g, NS group and sham operation group received the lavage of equivalent dose of NS, medication once each day, for four weeks consecutively. Motor function of the rats were monitored by adopting reformed Rivaling inclined plate test, Tarlov score and BBB scores before intragastric administration, at the first, second, third and forth week after lavage respectively. Results: YiQi HuoXue prescription and JingFuKang in different concentrations could increase average degrees of reformed Rivaling inclined plate test, Tarlov score and BBB scores, the difference had statistical meaning compared with NS group (P<0.05). Conclusion: YiQi HuoXue prescription could promote functional re-covery of spinal cord of the rats with chronic spinal compression.

【期刊名称】《西部中医药》 【年(卷),期】2017(030)004 【总页数】4页(P16-19)

【关键词】益气活血方;大鼠;脊髓型颈椎病;脊髓功能恢复 【作 者】杨宇;夏建龙;陈刚;杨挺;蔡平

【作者单位】南京中医药大学,江苏 南京 210046;南京中医药大学,江苏 南京 210046;江苏省中医院;南京中医药大学,江苏 南京 210046;江苏省中医院

【正文语种】中 文 【中图分类】R285.5

脊髓型颈椎病(Cervical Spondylotic Myelopathy,CSM)是由于颈椎间盘退变及突出、椎体后缘及钩椎关节骨质增生、后纵韧带骨化、黄韧带肥厚或钙化，导致脊髓受压、缺血，继而出现脊髓功能障碍的疾病，临床症状主要表现为颈项部疼痛、上肢酸胀、疼痛、麻木、无力感，严重者可出现上肢肌力下降，握拳困难，手指精细动作减弱，步态不稳、易摔跤以及肢体的触痛觉减退或过敏，胸腹部的束带感。本病好发于中老年人，发病率一般为人群的10%～15%，男性多发，本病常因天气变化，寒冷刺激，劳累等原因诱发。益气活血方(黄芪、陈皮、甘草、桂枝、羌活、丹参、茯苓、当归、蜈蚣、延胡索、地龙、独活、泽兰、葛根)由圣愈汤加减而成，圣愈汤最初为李东垣所创，由生地黄、熟地黄、川芎、当归、人参、黄芪等6味中药组成，元代朱震亨《脉因证治》将生地黄易为白芍药。导师在临床中，以该方为基本方，随症加减，灵活运用于治疗脊髓型颈椎病以及改善脊髓型颈椎病术后的脊髓功能状态，具有很好的疗效，且服用安全、方便。本研究拟就益气活血方对大鼠慢性脊髓压迫后脊髓功能恢复的影响进行研究，现报道如下：

1.1 药品及试剂 益气活血汤各药物及生理盐水、酒精、碘伏、青霉素、均购置于江苏省中医院，纯水，10%水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司，批号：20140115)，颈复康(河北承德颈复康药业集团有限公司，批号：490283)。 1.2 动物 SD大鼠，雌雄兼备，60只，平均体质量(200±2)g，由南京中医药大学实验动物中心提供，SPF级，动物实验许可证号：SCXK(京)2012-0001。1.3 器械及仪器 刀柄、眼科剪、线剪、有齿镊、无齿镊、持针器、弯钳、万分之一天平、直钳、剃毛机等均由南京中医药大学药理研究室提供，1 mL注射器、针、线、23号刀片、医用纱布、棉球均购置于江苏省中医院，斜板(自制)。

1.4 实验方法

1.4.1 样品制备 取益气活血汤中药材于江苏省中医院代煎，在南京中医药大学药理实验室浓缩，分别以成人临床用药量的20倍、10倍、5倍为高、中、低浓度，其中高浓度含生药5.4 g/mL、中浓度含生药2.7 g/mL、低浓度含生药1.35 g/mL。用研钵将颈复康磨细之后，用纯水配制成浓度为0.17 g/mL的溶液备用；用万分之一天平称取10 g水合氯醛，用100 mL纯水配制成10%水合氯醛备用。 1.4.2 模型制备［1］SD大鼠60只，雌雄兼备，平均体质量(200±2)g，随机选取10只，为假手术组(只暴露颈椎椎板，不咬除椎板，不造成大鼠脊髓压迫模型)，其余50只均在10%水合氯醛(0.4 mL/kg)麻醉下，用剃毛机剃除大鼠颈后部的毛，常规碘伏消毒、铺巾，取大鼠颈椎后正中切口长3～4 cm，切开皮肤、皮下，暴露颈肩部肌群，找到第7颈椎棘突(所有颈椎棘突均可用手触及，最高突起处即是)，自下往上正中切开肌肉群向两侧牵开，沿棘突两侧以23号刀片剥离棘突上附着肌肉，即可暴露整个颈椎骨面；自第7颈椎棘突基底部离断第7颈椎棘突并取出，刮除骨面附着组织备用；自第7颈椎棘突往上找到第5或6颈椎椎板，咬除部分椎板，并取相应直径的第七颈椎棘突骨块植入椎间隙，以不出现松动为度，并尽量向椎管内嵌压，以出现上肢肌肉反射性抽搐为度，缝合肌肉、皮肤，肌肉注射青霉素8万U/只，术毕。青霉素连续肌肉注射3天，术前及术后均不必禁食。为了避免老鼠相互挤压造成的伤害甚至死亡，术后采取单笼喂养并任其自由活动，造模过程中由于麻醉剂量控制不精准导致术中大鼠死亡7只，3只可能是因为手术创伤太大从而导致全身衰竭死亡。

1.4.3 分组及给药 为了使大鼠脊髓的急性压迫转为慢性压迫，术后适应性观察2周，待大鼠伤口基本愈合后采取合笼喂养，为保证脊髓损伤轻与重的大鼠在每组中的数量相当，术后1天根据改进Rivaling的斜板实验的平均度数、Tarlov评分、BBB评分将其分为益气活血方高、中、低浓度组，颈复康组，NS组。益气活血方高、

中、低浓度组及颈复康组按0.01 mL/g灌胃给药，NS组及假手术组灌服等量NS，每日给药1次，连续4周。

1.4.4 大鼠运动功能观察 分别在开始灌胃时、灌胃1周时、2周时、3周时、4周时，采用改进Rivaling的斜板实验、改良Tarlov评分、BBB评分，观察该方对大鼠受损脊髓组织的恢复的影响。

1.4.4.1 改进Rivaling的斜板实验 将受试大鼠分正、反两个方向置于可调节橡胶面斜板上，测定动物在斜板上停留10秒的最大倾斜角度，2个方向的角度平均后即为该动物斜板实验的功能角度。

1.4.4.2 改良Tarlov评分标准 0级：后肢无活动，不能负重；1级：后肢可见活动但不能负重；2级：后肢活动频繁或有力，不能负重；3级：后肢可支持体质量，能走1～2步；4级：可行走，仅有轻度障碍；5级：行走正常。 1.4.4.3 BBB评分 按大鼠行为学评分分为0～21分［2］。

1.5 统计学方法 实验数据采用SPSS 22.0软件进行统计学处理，计量资料以(±s)表示，进行单因素方差分析(ANOVA)和两两比较的LSD-t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

实验过程中，益气活血方高浓度组死亡2只，益气活血方中浓度组死亡1只，益气活血方低浓度组死亡1只，颈复康组死亡1只，NS组死亡2只，假手术组死亡3只。

2.1 Ri val i ng斜板实验 灌胃前各模型组大鼠在斜板上停留10秒的最大倾斜角度比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；灌胃1、2周后，各药物组的大鼠在斜板停留10秒的最大角度明显增加，与NS组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；从灌胃3周开始，益气活血方高、中、低浓度组，颈复康组在斜板停留10秒的最大角度与NS组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 改良Tarl ov评分 灌胃前各模型组中大鼠的Tarlov评分无显著差异(P＞0.05)；

灌胃1周后，益气活血方高、中浓度组大鼠Tarlov评分明显增加，与NS组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；灌胃2周后，各药物组老鼠Tarlov评分明显增加，与NS组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；从灌胃3周开始后，各药物组大鼠Tarlov评分与NS组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表2。 2.3 BBB评分 在灌胃药物前各模型组中大鼠的BBB评分差异无统计学意义(P＞0.05)；灌胃药物1周后，益气活血方高、低浓度组大鼠BBB评分明显增加，与NS组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；从灌胃2周开始，各药物组中大鼠BBB评分显著增加，与NS组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

脊髓型颈椎病属中医学中的“痹”“痿”等证范畴。研究表明［3］，脊髓受压后缺血与缺氧，血管直接受损或受刺激广泛痉挛，以及释放生化物质，刺激软膜上交感神经丛，可使脊髓前动脉或其他小血管痉挛栓塞，脊髓神经发生缺血、水肿、坏死与液化。因此，脊髓损伤后血流量的改变是引起脊髓坏死与神经功能丧失的重要原因［4］。《素问·痹论篇》曰：“风寒湿三气杂至合而为痹也。”即外因为发病的重要因素。脊髓型颈椎病在临床上主要以实证、虚证及虚实夹杂证常见，实证以痹证居多，常表现为肢体的疼痛麻木、酸胀，无力感，其病在脾，属瘀血、痰湿等所致。虚证以痿证为多，表现为肌肉萎软无力、步态不稳，其病在脾、肾，属气虚、肾亏所致。《医林改错》指出：“痹久有瘀血”，即瘀血也是痹症的重要因素。本病为本虚标实，气血不足，瘀血内阻，髓失所养之证。劳则耗气，久劳其气必虚，“气为血之帅”“气行则血行”，气虚导致血瘀，血瘀导致不通则痛；气能生血，气虚则血亦虚，肌肤、筋骨、脊髓失于濡养则可出现肢体麻木、肌肉萎软无力、步态不稳等症状；脾失健运，水湿不化，湿着于内则卫气不荣，肌肉顽痹；此外，气血失和，筋脉失养，腠理空虚，风寒湿邪乘虚而入，合而为痹。

根据中医学理论“气行则血行，治血先治气”的观点，以圣愈汤为主方，加减组成“益气活血方”，方中重用黄芪、当归、丹参为君药，取其补益气血、活血化瘀之

功，延胡索、地龙、蜈蚣、桂枝活血化瘀通络；羌活、独活祛风胜湿止痛；陈皮、茯苓、泽兰燥湿利水；葛根生津舒筋；甘草调和诸药，诸药共奏益气活血，利水消肿，通络止痛之功。药理实验显示，黄芪注射液［5］能明显改善脊髓损伤后神经功能，其机制与其抗脂质过氧化反应以及清除体内自由基的作用有关；黄芪甲苷［6］能够促进神经干细胞增殖，诱导其向胶质细胞分化。《景岳全书·本草正》载：“当归，功专补血，又能行血，补中有动，行中有补，诚血中之气药，亦血中之圣药也。”当归在保护损伤神经及促神经再生方面有重要作用，可能与抑制兴奋性氨基酸毒性作用有关［7］。丹参对脊髓神经的修复作用与其减少血小板凝集，对抗缩血管物质的作用有关［8］；丹参注射液对损伤脊髓的干预途径是减轻大鼠损伤脊髓的水肿、出血，改善脊髓微循环，此外还可以提高脊髓GDNF mRNA，通过GDNF减缓血脊髓屏障的崩解，减轻水肿形成及细胞损伤，减少脊髓神经细胞凋亡，从而促进运动功能的恢复［9］；黄芪、丹参、当归等能直接扩张周围血管，明显改善微循环［10］；能减轻神经水肿、炎症、出血、变性和脱髓鞘，来促进神经的再生［11］。应用益气活血方治疗脊髓型颈椎病以及改善脊髓型颈椎病术后的脊髓功能状态，与以下机制有关：1)改善颈部软组织的炎性渗出，减缓颈部组织的退变，消除颈部的症状。2)改善脊髓、神经的血液循环，修复雪旺氏细胞，使神经功能得以恢复。3)改善微循环，使退变的肌肉、韧带、椎间盘组织得以尽快修复，增强脊柱的稳定性。

本实验通过采用大鼠自体第7颈椎棘突椎间移植法制造脊髓压迫模型来观察益气活血方对受损脊髓神经功能恢复的影响，研究结果表明，益气活血方通过改善微循环，减轻神经水肿、炎症、脱髓鞘来促进受损神经细胞的修复，缓解神经细胞的变性、坏死，从而起到治疗作用。

△通讯作者：夏建龙(1965—)，男，博士学位，副主任医师。研究方向：中医骨伤科。

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