毒孝 文章编号：１００１—９７３１（２０１６）０６ ０６０１０—０６ 斟 ２０１６年第６期（４７）卷 漆酶一ＴＥＭＰＯ体系选择性氧化壳聚糖Ｃ一６伯羟基提高 其抗氧化性能的研究 裴继诚，殷允北，胡 稳，卜 鑫，申正会，张方东 （天津科技大学造纸学院，天津市制浆造纸重点实验室，天津３００４５７） 摘 要： 利用漆酶一ＴＥＭＰＯ体系选择性地氧化壳聚糖ｃ一６伯羟基，对氧化产物分别进行红外光谱、 Ｃ ＮＭＲ、离 子色谱和热失重分析，确定产物结构的变化，并进一步对其抗氧化性进行研究。结果表明，经漆酶一ＴＥＭＰＯ体系 氧化后，壳聚糖分子结构中的Ｃ一６伯羟基被选择性地氧化成羧基，其它结构基本不变，其产物为氧化壳聚糖钠盐； 壳聚糖氧化产物与原样相比，热稳定性得到了提高；壳聚糖经漆酶一ＴＥＭＰＯ体系氧化后的ＡＢＴＳ自由基清除率 ５ ｍｉｎ后达到６６．３６ ，抗氧化性能得到改善。 关键词： 漆酶；ＴＥＭＰＯ；壳聚糖；抗氧化性 中图分类号： ＴＢ３３２ 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９７３１．２０１６．０６．００３ 被氧化基团的去质子化，物质易被氧化基团的供电子 ０ 引 言 壳聚糖（ｃｈｉｔｏｓａｎ，ＣＳ）是由自然界广泛存在的几 丁质（ｃｈｉｔｉｎ）经过脱乙酰作用得到的，化学名称为聚葡 能力得到提高，从而提高物质的抗氧化性能＿ｌ 。因此 在不改变壳聚糖Ｃ一２氨基的基础上将其Ｃ一６伯羟基氧 化成羧基并转变成羧酸盐形式，改性后的壳聚糖在溶 萄糖胺（１ ４）２氨基一Ｊ３ Ｄ葡萄糖，白１８５９年，法国人 Ｒｏｕｇｅｔ首先得到壳聚糖后，这种天然高分子的生物官 能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性等 优良性能被各行各业广泛关注，在医药、食品、化妆品、 水处理、金属提取及回收、生化和生物医学工程等诸多 领域的应用研究取得了重大进展【 】。一些研究表明 液中通过羧酸根的电离提高溶液的ｐＨ值，从而抑制 壳聚糖Ｃ一２氨基的质子化，提高氨基的供电子能力，改 善产物的抗氧化性能。 ２，２，６，６一四甲基哌啶氧自由基（ＴＥＭＰＯ）是一种 具有稳定氮氧自由基结构的环状化合物。Ｄｅ Ｎｏｏｙ 等ｌ＿１ 在１９９５年首次发现ＴＥＭＰ（）自由基形式经催化 壳聚糖在体外具有一定的抗氧化性能［５州，作为食品添 加剂时，壳聚糖通过与金属离子的螯合 从而防止脂 质氧化，是一种次要型抗氧化剂（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ａｎｔｉｏｘｉ— ｄａｎｔ）。而主要型抗氧化剂（ｐｒｉｍａｒｙ ａｎｔｉ—ｏｘｉｄａｎｔ）为 剂氧化后转变成ＴＥＭＰ（）。。亚硝基形式可以选择性地 将醇氧化成醛基或羧基，并利用ＮａＢｒ—ＮａＣｌＯ将 ＴＥＭＰＯ自由基形式氧化成ＴＥＭＰ（）。。亚硝基形式并 选择性地将水溶性多聚糖如马铃薯淀粉、淀粉糊精和 自由基提供电子或者氢质子使自由基转变为稳定的中 间体，防止它们进一步发生自由基反应，从而有效地抑 制氧化反应 ］。虽然壳聚糖的Ｎ原子有一对非共用 支链淀粉中吡喃糖基的Ｃ一６伯羟基选择性氧化成醛基 或羧基。后来Ｉｚｕｍｉ ｓｈｉｂａｔａ和Ａｋｉｒａ Ｉｓｏｇａｉｌ１ 利用 Ｃ ＮＭＲ推测了ＴＥＭＰＯ—ＮａＢｒ—ＮａＣ１０体系氧化纤 维素的机理，即在ＮａＢｒ和ＮａＣ１Ｏ的作用下，ＴＥＭＰＯ 被氧化成ＴＥＭＰＯ ，ＴＥＭＰＯ 再选择性将伯羟基氧 化成羧基，ＴＥＭＰ（） 转变为ＴＥＭＰ（）Ｈ，ＮａＢｒ ＮａＣ１Ｏ 电子对，可以潜在地提供电子，但是由于壳聚糖酸化后 在溶液中的ｐＫａ约为６．３，氨基大多被质子化无法提 供电子，从而导致其抗氧化性较差，了其在许多领 域的应用。因此，对壳聚糖改性改善其抗氧化性成为 近年来研究的热点。壳聚糖中含有的Ｃ一６伯羟基和Ｃ一 再将ＴＥＭＰＯＨ氧化成ＴＥＭＰ（）从而进行下一步反 应。 ２氨基反应活性较高，壳聚糖的改性方式主要在ｃ一２ 氨基上通过酰基化、烷基化、季铵盐化、接枝共聚、 Ｓｃｈｉｆｆ碱反应、交联等消耗一定量的化学试剂与壳聚 Ｆａｂｂｒｉｎｉ等口胡在２００１年发现了漆酶可以将 ＴＥＭＰＯ自由基形式氧化成ＴＥＭＰＯ 亚硝基形式，并 可将ＴＥＭＰ（）Ｈ羟胺形式氧化成ＴＥＭＰＯ自由基形 式。后来，Ｅｌｉｓａｂｅｔｔａ Ａｒａｃｒｉ等 证明了漆酶一ＴＥＭ— ＰＯ体系可以选择性地将剑麻纤维素Ｃ一６伯羟基氧化 成羧基。Ａｒｅｎｄｓ等 。 将漆酶与ＴＥＭＰＯ组合用于催 化分子氧对醇的氧化，反应在室温、常压和ｐＨ值为５ 糖结合的方式引入新的基团 ］，针对壳聚糖Ｃ一６伯羟 基改性的方法主要有羧基化、烷基化、氧化。根据定量 构效关系（ＱＳＡＲ），物质所在溶液ｐＨ值与物质的抗 氧化性能正相关，溶液的ｐＨ值越高，越有利于物质易 ＊基金项目：国家自然科学基金资助项目（３ｌ１７０５４８）；国家级大学生创新创业训练计划资助项目（２０１ ５１００５７０９９） 收到初稿日期：２０１５—０６—０３ 收到修改稿日期：２０１５—１０—１６ 通讯作者：裴继诚，Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｃｐｅｉ＠ｔｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ 作者简介：裴继诚（１９５８一），男，教授，主要研究方向为清洁制浆与木质资源综合利用。 裴继诚等：漆酶一ＴＥＭＰＯ体系选择性氧化壳聚糖Ｃ一６伯羟基提高其抗氧化性能的研究０６０１１ 的条件下进行。文献［１７－１８］已经证实ＴＥＭＰＯ— ＮａＢｒ—ＮａＣ１０体系可以将壳聚糖Ｃ一６伯羟基氧化成羧 基，因此从理论上漆酶一ＴＥＭＰＯ体系也可以将壳聚糖 Ｃ一６伯羟基氧化成羧基。漆酶是一种环保型酵素，催 １．３．３离子色谱检测Ｎａ 含量 通过离子色谱仪检测Ｎａ。。含量表征羧基含量。样 品中的Ｎａ 来自羧基携带的Ｎａ 和样品纯化过程中 残留在样品中的Ｎａ 。根据式（１）可计算出羧基含量 化苯酚类、芳香胺和其它富含电子的底物单电子氧化， 同时将氧分子还原成水ｌ＿】 。 本文从环保的角度出发，采用漆酶一ＴＥＭＰＯ体系 选择性将壳聚糖Ｃ一６伯羟基氧化成羧基，生成壳聚糖 羧酸盐，借助羧酸根在溶液中的电离抑制壳聚糖ｃ一２ 氨基的质子化，提高氨基给电子能力，改善壳聚糖的抗 氧化能力，扩宽壳聚糖应用领域。 １ 实验材料与方法 １．１材料与设备 漆酶：由诺维信公司提供，商品号ＮＯＶＯＺＹＭＥ ５１００３，酶活１０７２ Ｕ／ｍＬ；壳聚糖：实验室自制，分子量 ２ ７２９ Ｄａ，脱乙酰度≥９７ ；２，２，６，６一四甲基哌啶一１氧 基（ＴＥＭＰＯ）：购于Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ公司。 傅立叶红外光谱仪（ＦＴ—ＩＲ）：型号ＶＥＲＴＥＸ ７０， 德国布鲁克公司；核磁共振谱仪（ＮＭＲ）：型号 ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ，瑞士布鲁克拜厄斯宾有限公司；离子色 谱仪（ＨＰＩＣ）：型号ＩＣＳ１１００，美国戴安公司；热重分析 仪（ＴＧＡ）：型号Ｑ５００一Ｖ２０．６，美国ＴＡ仪器公司；紫外 分光光度计（ＵＶ）：型号ＵＶ一２５５０，日本岛津公司。 １．２壳聚糖氧化方法 ２ ｇ壳聚糖和４ Ａ０ ＴＥＭＰＯ溶于２００ ｍＬ ｐＨ值一 ４．８的乙酸一乙酸钠缓冲溶液中，添加２００肚Ｌ漆酶， ３０℃水浴锅中通氧反应１８ ｈ［１ 。反应后滤去不溶 物，调节溶液ｐＨ值至中性，旋转蒸发仪浓缩滤液后加 入适量无水乙醇析出产物，微孔滤膜（Ｏ．４５“ｍ）过滤。 过滤所得固体溶于去离子水中，微孔滤膜（０．４５ ｍ） 过滤，旋转蒸发仪浓缩滤液后加入适量无水乙醇析出 产物，重复２次，所得固体常温真空干燥，样品密封保 存。不添加漆酶和ＴＥＭＰＯ处理的样品表示为ＣＳ— ｃｏｎｔｒｏｌ；只经漆酶处理的样品表示为ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ；经漆 酶一ＴＥＭＰＯ体系氧化产物表示为ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭ— ＰＯ。 １．３检测方法 １．３．１ ＦＴ—ＩＲ检ｉ贝４ 取１ ｍｇ样品和１００ ｍｇ干燥的ＫＢｒ，一起研磨 ５ ｍｉｎ后压片，然后用ＦＴ—ＩＲ测定，扫描范围为 ４ ０００￣６５０ ｃｍ ，分辨率为４ ｃｍ～，扫描１６次，以空 气作为采样背景。 １．３．２ ¨Ｃ ＮＭＲ检测 ”Ｃ ＮＭＲ采用瑞士布鲁克拜厄斯宾４００Ｍ超导 核磁共振仪进行测定。称取１００ ｍｇ样品溶于０．６ ｍＬ 的Ｄ Ｏ中，采样条件为采用３Ｏ。脉冲序列，采样时间 １．３６ Ｓ，弛豫时间１．８９ Ｓ，累积扫描３０ ０００次。 羧基含量＝＝＝（Ｔ—Ｔ。）／２３ （１） Ｔ为经漆酶／ＴＥＭＰＯ／Ｏ。处理样品钠离子含量， ｍｇ／Ｌ；Ｔ。为空白样钠离子含量，ｍｇ／Ｌ；２３为钠元素相 对分子质量。 离子色谱测试条件：色谱柱，ＩｏｎＰａｃ ＣＳ１６；淋洗 液，３０ ｍｍｏｌ／Ｌ甲烷磺酸；柱温，４０℃；池温，４５。Ｃ；流 速，１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；进样体积，２５ Ｌ；抑制器，ＣＳＲＳ（阳 离子连续自动再生电解抑制器）；电流，８８ ｍＡ；检测 器，电导检测器。 配置浓度分别为３０，４５，７５，９０，１５０ ｍｇ／Ｌ的Ｎａ 溶液标样，使用离子色谱仪检测标样Ｎａ’。色谱图，记录 各浓度对应的峰面积。以Ｎａ 浓度为横坐标，对应的 峰面积为纵坐标绘制标准曲线。如图１所示。 Ｉ ｈｅ ｅｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｎａ￣／ｍｇ。Ｌ 图ｌ Ｎａ 含量标准曲线 Ｆｉｇ １ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｆｏｒ Ｎａ 配置１ ｇ／Ｌ的样品溶液，使用离子色谱仪检测 Ｎａ 色谱图，记录峰面积，带人标准曲线计算Ｎａ 含 量。 其中，ｒ一０．９９９９，曲线回归方程为 一０．２７５ｌａｒ。 １．３．４ ＴＧＡ检测 使用Ｑ５００一Ｖ２０．６热重分析仪对样品进行ＴＧＡ 分析，每个样品重２～５ ｍｇ，以氮气作为载体，流速为 ５０ ｍＩ ／ｍｉｎ，实验温度从室温升至６００。Ｃ，升温速率为 １０℃／ｍｉｎ，得到热失重曲线。 １．３．５抗氧化性能检测¨２阳 配制浓度为２．６ ｍｍｏｌ／Ｌ的过硫酸钾溶液与浓度 为７．４ ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＢＴＳ溶液，分别量取２ ｍＬ混合， 在避光处储存１２ ｈ，制得ＡＢＴＳ自由基溶液，然后用 无水乙醇稀释５Ｏ～６０倍至７３４ ｎｍ处吸光度为 ０．７００±Ｏ．０２５。取２ ｍｇ试样溶于２ ｍＬ去离子水中， 再与８ ｍＬ稀释后的自由基溶液发生反应，共进行 ４Ｏ ｍｉｎ。反应每进行５ ｍｉｎ对溶液在７３４ ｎｍ处的吸 光度进行测定。另取２ ｍＬ去离子水与８ ｍＬ稀释后 的自由基溶液混合，作为空白样。 利用式（２）计算其自由基消除率，消除率越高，抗 氧化性能越强。 ０６０１ ２ 自由基消除率（ ）一 Ｈ ０ 助 ×１００￣／ｏ （２） 财 抖 ２０１６年第６期（４７）卷 峰［２１ ２４］：波数为３ ４００ ｃｍ 的垂直谱带是Ｎ—Ｈ和 Ｏ—Ｈ的伸缩振动；弱峰２ ８７５ ｃｍ 可能是Ｃ—Ｈ的 伸缩振动；由于壳聚糖脱乙酰度≥９７ ，壳聚糖分子中 存在极少的酰胺基团参与形成分子内和分子间氢键 （Ｃ一（）…Ｈ （）及Ｎ—Ｈ…（）一Ｃ），因而在 Ａ 为空白样吸光度；Ａ 为反应后吸光度。 ２ 实验结果与讨论 ２．１红外光谱分析 １ ６１０ ｃｍ 对应的酰胺Ⅱ（ ＮＨ。）谱带出现了很强的 吸收峰，ＣＨ 的摇摆振动也包含在这个吸收峰中；壳聚 糖的 ＣＨ 弯曲和一ＣＨ。变形的吸收峰在 １ ４１０ ｃｍ＿。；壳聚糖多糖结构中碳氧（Ｃ一（））的伸缩振 动在１ ０８０ ｃｍ一。 对比ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ的红外光谱，ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭ— ＰＯ的红外光谱中的特征吸收峰与ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ的极其 相似，特别是１ ６１０ ｃｍ 对应酰胺Ⅱ（一ＮＨ。）谱带的 吸收峰强度基本不变，表明了壳聚糖Ｃ一２氨基未被氧 化。 ２．２ Ｃ ＮＭＲ分析 通过红外光谱分析壳聚糖氧化前后官能团的变 化，ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ和ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ的红外吸收光 谱如图２所示。 ４０００ ３５００ ３ ０００ ２５００ ２０００ １ ５００１ ０００ ５００ Ｗａｖｅｎｕｍｂｅｒｓ，ｏｌｃｍ。’ 通过”Ｃ ＮＭＲ探究物质碳元素种类的变化及漆 图２ ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ和ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ的ＦＴ—ＩＲ图 Ｆｉｇ ２ ＦＴ—ＩＲ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ ＣＳ ｃｏｎｔｒｏ１ ａｎｄ ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ— ＴＥＭＰ（） 酶一ＴＥＭＰＯ体系氧化壳聚糖机理。图３为ＣＳ—ｃｏｎ— ｔｒｏｌ，ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ和ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ的”Ｃ ＮＭＲ 谱图。 图２中，ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ红外光谱图中特征吸收 图３ ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ、ＣＳ Ｌａｃｃａｓｅ和ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ的 。Ｃ ＮＭＲ谱图 Ｆｉｇ ３ 。Ｃ ＮＭＲ ｓｐｅｃｔｒａ ｏｆ ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ。ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ ａｎｄ ＣＳ—Ｉ ａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ 从图３可看出，ｃｓ—ｃｏｎｔｒｏｌ、ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ和ＣＳ— Ｉ ａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ的 Ｃ ＮＭＲ谱图相比，只有ＣＳ—Ｌａｃ ｃａｓｅ ＴＥＭＰＯ在 、一１７９处出现了新的共振峰，由文 献［２５ ２７］可知该共振峰为 Ｃｏ（）的共振峰，其它信 号源基本一致，由此可表明漆酶ＴＥＭＰＯ体系选择性 ｃａｓｅ的Ｎａ 含量，可表明样品ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰ（）中 含有大量的羧基从而携带了大量的Ｎａ ，继而表明漆 酶一ＴＥＭＰＯ体系将壳聚糖Ｃ一６伯羟基氧化成羧基。 经离子色谱仪检测样品ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ，ＣＳ—Ｉ ａｃｃａｓｅ和ＣＳ一 Ｉ ａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ的Ｎａ 含量如图４所示。 １００ 将壳聚糖Ｃ ６伯羟基氧化成羧基，其它结构基本不变； ＣＳ—Ｉ ａｃｃａｓｅ的 Ｃ ＮＭＲ谱图与ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ相比无明 显变化，表明了漆酶和ＴＥＭＰＯ的协同作用才能将壳 聚糖Ｃ一６伯羟基氧化成羧基。图３中， 一５８．７，６Ｏ．３， 蓦８０ Ｅ 宅６０ ｏ 暑４０ ‘， ２０ ０ ７９．１，７７，７４和１０１处的信号分别源于氨基葡糖糖环的 Ｃ一２，Ｃ一６，Ｃ一４，Ｃ一５，Ｃ一３和Ｃ一１共振峰，此结果与已有 文献一致［２ ］。ＣＳ—Ｉ ａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ在 ｃ一６Ｏ．３２处 的氨基葡糖糖环的Ｃ一６伯羟基共振峰依旧存在，表明 仍有氨基葡糖糖环上的Ｃ一６伯羟基未被氧化。 ２．３离子色谱（ＨＰＩＣ）分析 图４ ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ，ＣＳ Ｉ ａｃｃａｓｅ和ＣＳ Ｉ ａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰ（） 的Ｎａ。。含量 Ｆｉｇ ４ Ｔｈｅ Ｎａ。。ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ，ＣＳ—Ｉ ａｃｃａｓｅ ａｎｄ ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ 纯化后的产物中所含的Ｎａ。。来自反应体系及反应 产物的羧基携带的Ｎａ 。若样品ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭ— Ｐ０中Ｎａ 含量远远大于样品ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ和ＣＳ—Ｌａｃ一 由图４可以看出，样品ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰ（）中 裴继诚等：漆酶一ＴＥＭＰＯ体系选择性氧化壳聚糖Ｃ ６伯羟基提高其抗氧化性能的研究０６０１３ Ｎａ 含量远远大于样品ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ和ＣＳ—Ｉ ａｃｃａｓｅ的 从图６可以看出，样品的热降解和热氧解可分为 ３个阶段。 Ｎａ 含量，表明了漆酶一ＴＥＭＰＯ体系将壳聚糖Ｃ ６伯 羟基氧化成羧基；样品ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ和ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ的 Ｎａ。。含量基本一致，表明了漆酶和ＴＥＭＰＯ的协同作 第一阶段在１４０。Ｃ附近，伴随着吸热反应，两者在 １４０。Ｃ前均有一个小的失重过程，这是由于多糖具有 比较强的水亲和力和水化特性＿２ ，样品中的结合水和 结晶水热蒸发导致失重。ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ和ＣＳ—Ｉ ａｃｃａｓｅ— 用才能将壳聚糖Ｃ一６伯羟基氧化成羧基。由式（１）可 得出羧基含量为４．１３ ｍｍｏｌ／ｇ。Ｎａ 含量分析结果验 证了 Ｃ ＮＭＲ的分析结果。 ＴＥＭＰＯ相比，失重速率更快，质量下降更多。 第二阶段在１６０￣４００℃，为壳聚糖的主要降解阶 段，主要发生主链的脱乙酰和糖苷键的断裂反应口 。 结合国内外研究成果及以上检测结果推测了漆 酶一ＴＥＭＰＯ体系选择性氧化壳聚糖Ｃ一６伯羟基的反 应机理（图５），即漆酶ＴＥＭＰＯ体系选择性地将壳聚 糖Ｃ一６伯羟基氧化成羧基的反应分为４个阶段：（１） Ｌａｃｃａｓｅ与ＴＥＭＰ０自由基形式反应生成Ｌａｃｃａｓｅ。 和 ＴＥＭＰＯ。。亚硝基形式；（２）ＴＥＭＰＯ。。将壳聚糖上的ｃ ６伯羟基氧化成羧基，而其被还原成ＴＥＭＰＯＨ羟胺 形式。Ｃ一６羧基在Ｎａ 存在下，转化为其钠盐状态； （３）ＴＥＭＰＯＨ与Ｌａｃｃａｓｅ反应重新生成ＴＥＭＰＯ自 由基；（４）Ｌａｃｃａｓｅ。 与Ｏ２反应生成水和Ｌａｃｃａｓｅ，从而 进而进行下一轮反应。 ＣＯＯＮａ ｆ Ｑ］ ０｝、 Ｈ ’Ｎａ 图５ 漆酶一ＴＥＭＰＯ体系氧化壳聚糖的推测机理图 Ｆｉｇ ５ Ａ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｌａｃｃａｓｅ— ＴＥＭＰ（）ｓｙｓｔｅｍ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ ２．４ ＴＧＡ分析 通过ＴＧＡ检测物质热稳定性，热稳定性越高，分 子的化学结构越稳定。ＣＳ—Ｉ ａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ和ＣＳ— ｃｏｎｔｒｏｌ的ＴＧＡ曲线如图６所示。 １ １ 兰 一 ： ａ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．『，℃ 图６ Ｃ Ｌａｃｃａｓ ＴＥＭＰＯ和Ｃ ｃｏｎｔｒｏｌ的ＴＧＡ曲线 Ｆｉｇ ６ ＴＧＡ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ＣＳ——Ｌａｃｃａｓｅ——ＴＥＭＰＯ ａｎｄ ＣＳ——ｃｏｎ ｔｒｏｌ 在这过程中，ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ和ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ失重 分别约为４Ｏ．０ｌ 和５２．７１ 。 第三阶段在４００～６００。Ｃ，主要发生吡喃环的裂解 以及碳化残渣的分解口。。 ｊ，分解速度较为缓慢，６００℃ 时，ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ和ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ失重分别约为 ５６．４９ 和７３．３９ 。 结果显示，ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ的热稳定性优于 ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ。这可能由于样品ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ引 入了羧酸根，羧酸根的共轭效应在产物分子内和分子 问形成了强烈的氢键（Ｏ—Ｃ Ｏ…ＮＨ） ，使分子之 间聚集程度更高，提高了分子空间结构稳定性，形成了 有利于热稳定性的结构。 ２．５抗氧化性能分析 实验通过检测物质的ＡＢＴＳ自由基清除率来评定 物质的总抗氧化性能。在此反应体系中，ＡＢＴＳ经氧 化后生成相对稳定的蓝绿色的ＡＢＴＳ・ 溶液，且在 ７３４ ｎｍ处具有典型的特征吸收峰。抗氧化剂与 ＡＢＴＳ・ 反应后使其溶液褪色，特征吸光度值下降， 下降越大表明物质的总抗氧化性能越强。图７显示的 是ＣＳ Ｉ ａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ和ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ的ＡＢＴＳ自由 基清除率。 ＝ 丘 ａ’ ．三 西 Ｃ ０ ＞ 日 ‘， ‘Ｉ， ｒｉｍｅ． ｍＩｎ 图７ ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ和ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ的ＡＢＴＳ自 由基清除率 Ｆｉｇ ７ ＡＢＴＳ・。。ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＣＳ—Ｌａｃ— ｃａｓｅ——ＴＥＭＰＯ ａｎｄ ＣＳ——ｃｏｎｔｒｏｌ 由图７可知，静置５ ｒａｉｎ后，ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ 的自由基清除率已达到６６．３６ ，具有较强的抗氧化 性；ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ的自由基清除率达到４４．２２ ，具有较 弱的抗氧化性。随着时间的增加，二者都缓慢增加， ４０ ｍｉｎ时ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ的自由基清除率已达 到９２．３７ ，ＡＢＴＳ自由基溶液接近无色；ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ 的自由基清除率达到６２．６５ ，２ ｈ后，ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ的 Ｏ６０１４ ＡＢＴＳ自由基溶液接近无色。 助 材 料 ２０１６年第６期（４７）８ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｎｄ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃ— ＣＳ—ｃｏｎｔｒｏｌ和ＣＳ—Ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ中都含有伯氨 基，水溶性的壳聚糖上的伯胺基具有提供电子的潜力， ＡＢＴＳ自由基具有较强的氧化性，可以将一ｃ—ＮＨ 氧 化成一Ｃ—ＮＨ［３ 。漆酶一ＴＥＭＰＯ体系选择性地将壳 聚糖Ｃ一６伯羟基氧化成羧基，生成壳聚糖钠盐，因此在 ＣＳ—Ｉ ａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ中通过羧酸根的电离抑制了氨基 ｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，２０１４，４５ （１４）：１４０３７—１４０４２． 裴继诚，于成华，张方东，等．漆酶催化壳聚糖一阿魏酸接 枝共聚提高产物抗氧化及抗菌性的研究［Ｊ］．功能材料， ２Ｏ１４，４５（１４）：１４０３７—１４０４２． ａｋ Ｈ，Ｔｙｒａｋｏｗｓｋａ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ［１１］ Ｌｅｍａｎｓｋａ Ｋ，Ｓｚｙｍｕｓｉｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐＨ ｏｎ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｃｈａ 的质子化，提高了氨基的供电子能力，致使ＣＳ—Ｌａｃｃａ— ｓｅ—ＴＥＭＰＯ的ＡＢＴＳ自由基的清除速率明显高于ＣＳ— ｎｉｓｍ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙｌ—ｆｌａｖｏｎｅｓ［Ｊ］．Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００１，３１（７）：８６９ ８８１． ｃｏｎｔｒｏｌ。抗氧化性能的提高间接地表明了经漆酶一 ＴＥＭＰ０体系氧化后，壳聚糖中产生了羧基。 ｇｈｌｙ ［１２］ Ｄｅ Ｎｏｏｙ Ａ Ｅ Ｊ，Ｂｅｓｅｍｅｒ Ａ Ｃ，Ｖａｎ Ｂｅｋｋｕｍ Ｈ．Ｈｉｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｎｉｔｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ３ 结 论 漆酶一ＴＥＭＰＯ体系可以选择性地将壳聚糖分子 中的Ｃ一６伯羟基氧化成羧基，其产物为氧化壳聚糖钠 盐；产物的热稳定性提高，化学结构稳定性增强；产物 对ＡＢＴＳ自由基清除率达到６６．３６ ，抗氧化能力得到 改善，具有较强的抗氧化性。由于经漆酶一ＴＥＭＰＯ体 系氧化的壳聚糖较强的抗氧化性可以防止脂质被氧 化，因此氧化后的壳聚糖在食品包装材料和食品添加 剂方面具有很好的潜在应用价值。 参考文献： Ｅｌｉ Ｒｏｂｅｒｔｓ Ｇ Ａ Ｆ．Ｃｈｉｔｉｎ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ［Ｍ１．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｍａｃｍｉｌ— ｌａｎ Ｐｒｅｓｓ，１９９２：７２． ［２］ Ｇｏｏｓｅｎ Ｍ Ｆ Ａ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｈｉｔｉｎ ａｎｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ［Ｍ１． Ｌａｎｃａｓｔｅｒ ＰＡ：Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９７：７． ［３］ Ｍｕｚｚａｒｅｌｌｉ Ｒ Ａ Ａ，Ｐｅｔｅｒ Ｍ Ｇ．Ｃｈｉｔｉｎ ｈａｎｄｂｏｏｋ［Ｍ］． Ｇｒｏｔｔａｍｍａｒｅ：Ａｔｅｃ Ｅｄｉｚｉｏｎｉ，１９９７：１９３． ｒ４］Ｐｉｌｌａｉ Ｃ Ｋ Ｓ，Ｐａｕｌ Ｗ，Ｓｈａｒｍａ Ｃ Ｐ．Ｃｈｉｔｉｎ ａｎｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｐｏｌｙｍｅｒｓ：ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｆｉｂｅｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００９，３４（７）：６４１—６７８． ［５］Ｐａｒｋ Ｐ Ｊ，Ｊｅ Ｊ Ｙ，Ｋｉｍ Ｓ Ｋ．Ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖ ｉｔｉｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｙ ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎｓ ｕｓｉｎｇ ａｎ ＥＳＲ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｌｅｒ［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２００４，５５（１）： １７—２２． ［６１ Ｙｅｎ Ｍ Ｔ，Ｙａｎｇ Ｊ Ｈ，Ｍａｕ Ｊ １ ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｆｒｏｍ ｃｒａｂ ｓｈｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ， ２００８，７４（４）：８４０—８４４． ｒ ７］ Ｇｕｉｂａｌ Ｅ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｅｔａｌ ｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｃｈｉｔｏｓａｎ－ｂａｓｅｄ ｓｏｒｂｅｎｔｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈ ｎｏｌｏｇｙ，２００４，３８（１）：４３—７４． ［８］ Ｒｈａｚｉ Ｍ，Ｄｅｓｂｒｉｅｒｅｓ Ｊ，Ｔｏｌａｉｍａｔｅ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎａｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔａｌ ｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｘａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｈｉ— ｔｏｓａｎ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ ｗａｓｔｅ［Ｊ］．Ｅｕ— ｒｏｐｅａｎ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００２，３８（８）：１５２３—１５３０． ｒ９］ Ｓｈａｈｉｄｉ Ｆ，Ｎａｃｚｋ Ｍ．Ｐｈｅｎｏｌｉｃｓ ｉｎ ｆｏｏｄ ａｎｄ ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ［ＭＩ．Ｂｏｃａ Ｒａ，ＦＩ ：ＣＲｃ Ｐｒｅｓｓ，ＬＩ Ｃ，２００３． ［１Ｏ１ Ｐｅｉ Ｊｉｃｈｅｎｇ，Ｙｕ Ｃｈｅｎｇｈｕａ，Ｚｈａｎｇ Ｆａｎｇｄｏｎｇ，ｅｔ ａ１．Ｇｒａｆｔ— ｉｎｇ ｏｆ ｌａｃｃａｓｅ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ ｏｎｔｏ ｔｈｅ ａｌｃｏｈｏｌ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｗａｔｅｒ—ｓｏｌｕｂｌｅ ｇｌｕｃａｎｓ［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙ— ｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９５，２６９（１）：８９—９８． ［１３１ Ｓｈｉｂａｔａ Ｉ，Ｉｓｏｇａｉ Ａ．Ｄｅｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｏｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｄｕｒｉｎｇ ＴＥＭＰＯ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，２００３。 １０（２）：１５１－１５８． ［１４］ Ｆａｂｂｒｉｎｉ Ｍ，Ｇａｌｌｉ Ｃ，Ｇｅｎｔｉｌｉ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌ— ｃｏｈｏｌｓ ｂｙ ｏｘｙｇｅｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｌａｃｃａｓｅ ａｎｄ ｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｂｙ ＴＥＭＰＯ［Ｊ］．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００１，４２（４３）： ７５５１—７５５３． ［１５１ Ａｒａｃｒｉ Ｅ，Ｖｉｄａｌ Ｔ，Ｒａｇａｕｓｋａｓ Ａ Ｊ．Ｗｅｔ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｄｅｖｅｌ ｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｓｉｓａｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｆｉｂｅｒｓ ｂｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａ ｌａｃｃａｓｅ ＴＥＭＰＯ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２０１１， ８４（４）：ｌ３８４—１３９０． ［１６］ Ａｒｅｎｄｓ Ｉ Ｗ（：Ｅ，Ｉ ｉ Ｙ Ｘ，Ａｕｓａｎ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ＴＥＭＰＯ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｉｎ ｌａｃｃａｓｅ ｃａ— ｔａｌｙｓｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌｓ［Ｊ］．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｍ，２００６，６２ （２８）：６５６９－６６６５． ［１７］ Ｋａｔｏ Ｙ，Ｋａｍｉｎａｇｅ Ｊ，Ｍａｔｓｕｏ Ｒ，ｅｔ ａ１．ＴＥＭＰＯ—ｍｅｄｉａ— ｔｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｔｉｎ ａｎｄ Ｎ～ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ［Ｊ］．Ｃａｒ— ｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２００４，５８（４）：４２１－４２６． ［１８］ Ｓｕｎ Ｉ Ｐ，Ｄｕ Ｙ Ｍ，Ｙａｎｇ Ｊ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｃｒｙｓ— ｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈｉｔｉｎ ｔｏ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ６一 ｃａｒｂｏｘｙｃｈｉｔｉｎ ｗｉｔｈ ｍｏｉｓｔｕｒｅ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ－ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ ［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２００６，６６（２）：１６８—１７５． ［１９］ Ｗａｎ Ｙｕｎｙａｎｇ，Ｄｕ Ｙｕｍｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｍｅｃｈ— ａｎｉｓｍ ｏｆ ｌａｃｃａｓｅｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｏｎｌｉｎｅ，２００７，７０（９）： ６６２—６７Ｏ． 万云洋，杜予民．漆酶结构与催化机理［Ｊ１．化学通报， ２００７。７０（９）：６６２－６７０． ［２Ｏ］ Ｌｉ Ｘ，Ｌｉｎ Ｊ，Ｇａｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｍａ Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａｅ［Ｊ］．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｃｅｎ— ｔｒａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０ｌ２，６（１）：ｌ４Ｏ． ［２１］ Ｂｒｕｇｎｅｒｏｔｔｏ Ｊ，Ｌｉｚａｒｄｉ Ｊ，Ｇｏｙｃｏｏｌｅａ Ｆ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｉｎ— ｌｆａｒｅｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｈｉｔｉｎ ａｎｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｏｌｙｍｅｒ，２００１，４２（８）：３５６９ ３５８０． ［２２１ Ｔｉａｎ Ｆ，Ｌｉｕ Ｙ，Ｈｕ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｐｏｌｙｍｅｒｉｚａ— ｔｉｏｎ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｂｙ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ［Ｊ］．Ｃａｒ ｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２００１，５７（１）：３１～３７． ［２３］ Ｊｉａｎｇ Ｔ Ｄ．Ｃｈｉｔｏｓａｎ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｓｔｕｄｙ ０ｎ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｃ一６－ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｂｙ ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ＰＥＩ Ｊｉｃｈｅｎｇ，ＹＩＮ Ｙｕｎｂｅｉ，ＨＵ Ｗｅｎ，ＢＵ Ｘｉｎ，ＳＨＥＮ Ｚｈｅｎｇｈｕｉ，ＺＨＡＮＧ Ｆａｎｇｄｏｎｇ （Ｔｉａｎｊｉｎ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｕｌｐ＆Ｐａｐｅｒ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｔｉａｎｊｉｎ ３００４５７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｄｏｐｔｉｎｇ ｌａｃｃａｓｅ—ＴＥＭＰＯ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｏｘｉｄｉｓｅ ｔｈｅ Ｃ一６一ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ，ｔｈｅ ＦＴ— ＩＲ，”Ｃ ＮＭＲ，Ｎａ＋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ａｎｄ ＴＧＡ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ａｎｄ ｆｕｒｔｈｅｒ ｔｏ ｓｔｕｄｖ ｉｔｓ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ Ｃ一６一ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｏｘｉｄｉｓｅｄ ｔｏ ｃａｒｂｏｘ— ｙｌ，ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｂａｓｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｕｎｃｈａｎｇｅｄ，ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｓ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ ｏｆ ｏｘｉｄｉｓｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ；ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｏｘｉｄａ— ｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎａｌ，ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｔｈｅｒｍａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ；ａｆｔｅｒ ｓｔａｎｄｉｎｇ ｆｏｒ ５ ｍｉｎ，ｔｈｅ ｏｘｉ— ｄａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ａｎ ＡＢＴＳ・－。ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ６６３６％，ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈａｔ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ．ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗａｓ ｉｍｐｒｏｖｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｌａｃｃａｓｅ；ＴＥＭＰＯ；ｃｈｉｔｏｓａｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ
