实验黄连中⼩檗碱的提取、精制和鉴定
实验四黄连中⼩檗碱的提取、精制和鉴定⼀、概述
黄连系⽑茛科黄连属植物黄连（coptis chinensis Eranch.）的⼲燥根茎。黄连具有清热燥湿、清⼼除烦，泻⽕解毒的功效。黄连的有效成分主要是⽣物碱，已分离出的主要⽣物碱有⼩檗碱（berberine）、掌叶防⼰碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。⼩檗碱有很强的抗菌作⽤，已⼴泛地应⽤于临床。主要化学成分的结构及理化性质：
⼩檗碱为黄⾊针状结晶，mp为154℃，游离的⼩檗碱能缓缓溶于⽔（1：20）及⼄醇中（1：100），易溶于热⽔及热醇，难溶于⼄醚，⽯油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在⽔中溶解度很⼩，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热⽔中都⽐较容易溶解。
⼩檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于⽔中，其⽔溶液有三种互变形式。
O33NHCHOOOCH3
OCH3季铵式（红棕⾊）醇式（黄⾊）醛式（黄⾊）N+OOCH3OCH3
⼩檗碱（黄连素）⼆、实验部分（⼀）实验⽬的
1、掌握⼩檗碱的结构特点和理化性质，以及⼀般的提取精制⽅法。2、掌握旋转蒸发仪的使⽤。
3、熟悉盐酸⼩檗碱的⾊谱鉴定和定性鉴定⽅法。（⼆）实验原理
1、提取原理：⼩檗碱为异喹啉类⼩檗碱，结构中的氮原⼦以季铵盐形式存在，显⼀定程度的亲⽔性，因此游离⼩檗碱能溶与⽔(1:20)及⼄醇(1:100)，热⽔或热⼄醇中易溶，不溶于⼄醚、氯仿、苯等有机溶剂。盐酸⼩檗碱在沸⽔中溶解，在冷⽔中析出。
2、分离原理：⼩檗碱与酸所成的盐在⽔中的溶解度不尽相同，如硫酸⼩檗碱为(1:30)，酸性硫酸⼩檗碱为(1:100)，枸橼酸⼩檗碱为(1:125)，⽽盐酸⼩檗碱为(1:500)。本实验就是据游离⼩檗碱在⽔和⼄醇中的溶解度较⼤，⽽其盐酸盐难溶于⽔的性质进⾏提取和精制的。（三）实验药材、仪器与试剂1、药材：黄连50g（每组）。
2、仪器：回流装置、⽔浴锅、冰箱、旋转蒸发仪、烧杯（250ml）、抽滤装置、滤纸、层析缸、滤纸、试管、电炉。3、试剂：75%⼄醇、95%⼄醇、蒸馏⽔、10%盐酸、氯化钠、⼄醇、氯仿-甲醇-1/10盐酸（1:1:1）、10%硫酸、漂⽩粉、10%氢氧化钠、丙酮。（四）实验内容1、⼩檗碱的提取
取黄连粗粉50g，加⼊400ml75%的⼄醇回流1.5h，四层纱布过滤，药渣⽤95%⼄醇300ml回流1h，四层纱布过滤，并⽤少量蒸馏⽔洗涤药渣，合并两次滤液和洗液，放于冰箱中。2、⼩檗碱的浓缩
⽤旋转蒸发仪将⼩檗碱提取液浓缩⾄糖浆状（⼩于50ml，⽆醇味）。3、盐酸⼩檗碱的制备
将浓缩液倒⼊100ml沸⽔中（换成250ml烧杯）煮沸⾄溶解（10min），趁热抽滤，在滤液中加10%盐酸，调制pH=2，加⼊氯化钠10g，放⼊冰箱析晶。4、盐酸⼩檗碱的精制
（1）抽滤，得到盐酸⼩檗碱粗品。
（2）取粗品放⼊100ml沸⽔中，搅拌溶解，继续加热10min，趁热抽滤，滤液放置过夜。（滤取结晶，先⽤少量1%盐酸洗⼀次，再⽤少量蒸馏⽔洗数次，抽⼲，⼲燥后得到⼩檗碱精品。）5、鉴定（1）化学检识
①取盐酸⼩檗碱少许，加10%的H2SO4
2ml，溶解后加漂⽩粉少许，即显樱红⾊。
②取盐酸⼩檗碱约50mg，加蒸馏⽔5ml，⽔浴加热，溶解后加10%氢氧化纳试液2滴，显橙⾊。溶液放冷过滤，取澄清滤液，加丙酮4滴，即发⽣浑浊。放置后，⽣成黄⾊的丙酮⼩檗碱沉淀。（2）纸层析鉴定
样品：1%醇溶液。（每组0.1g溶于10ml⼄醇）标准品：1%盐酸⼩檗碱醇溶液
展开剂：氯仿—甲醇—1/10MHCL(1:1:1下⾏)显⾊：⾃然光下观察（五）实验注意事项
1、提取时两次⼄醇浓度不等，提醒学⽣不要加错。2、漂⽩粉加少许即可，否则影响结果3、纸条要保持平整，不靠壁。（六）思考题
1、⼩檗碱为哪类⽣物碱，可以⽤什么⽅法提取？2、回流与蒸馏的区别是什么？3、⼩檗碱精制的原理是什么？
4、旋转蒸发仪使⽤时需注意哪些问题？
